2GRNTKB

KAPA2G Robust PCR-Kit

with dNTPs

• Synonym(e): PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 200 reactions; sufficient for 500 reactions
• Haltbarkeit: ≤12 mo.
• Leistungsmerkmale: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart: no
• Verpackung: pkg of 100 U (KK5004); pkg of 250 U (KK5005)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: crude DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die KAPA2G Robust DNA-Polymerase der zweiten Generation wurde entwickelt, um das Problem inkonsistenter Amplifikation bei einer breiten Palette von Amplikontypen (GC- und AT-reich) zu beheben. Dieses Produkt ermöglicht eine höhere Prozessivität und spezifische Aktivität, was zu einer robusteren PCR-Leistung, höherer Sensitivität und verbesserter Toleranz gegenüber gängigen Inhibitoren führt. Die hohe Leistung der KAPA2G Robust DNA-Polymerase ist ideal geeignet für schwierige PCR-Anwendungen und Proben und macht eine Optimierung mit mehreren Enzymen und Protokollen überflüssig.

Anwendung

• Amplifikation von GC- und AT-reichen Templates
• Templates mit häufigen PCR-Inhibitoren wie Salzen, Harnstoff, SDS oder Ethanol
• Rohproben-PCR z. B. aus Wangenabstrichen sowie kultivierten Säuger-, Hefe- oder Bakterienzellen
• Kolonien-PCR

Biochem./physiol. Wirkung

KAPA2G Robust DNA-Polymerase weist eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf. Die Genauigkeit von KAPA2G Robust ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 105 einbezogenen Nukleotiden. KAPA2G Robust ist eine hochprozessive DNA-Polymerase, die sich zur Amplifikation von DNA-Fragmenten bis zu 1 kb Länge mit einer Extensionszeit von 15 s pro Zyklus eignet. Übermäßige Extensionszeiten führen mit großer Wahrscheinlichkeit zu Schmieren und unspezifischer Amplifikation. Bei Amplicons <1 kb mit genomischer DNA als Template sollten 15 s pro Zyklus für einen hohen Ertrag des Produkts ausreichen. Im Falle längerer Amplicons kann die Zeit in 15-Sekunden-Intervallen auf maximal 60 s/kb erhöht werden. Die mit KAPA2G Robust generierten PCR-Produkte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren kloniert werden.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Effiziente Amplifikation von GC- und AT-reichen Targets

• Robuste Leistung bei einer breiten Palette von stark GC- und AT-haltigen Templates
• Höhere PCR-Erfolgsraten

Verbesserte Toleranz gegenüber häufigen PCR-Hemmern

• Effiziente Amplifikation aus Rohproben
• Höhere Ausbeute und Sensitivität pro Enzymeinheit

Unübertroffene Leistung bei Kolonien-PCR

• Höhere Ausbeute und verbesserte Konsistenz bei PCR direkt von E. coli- und Hefezellen

Einige Anmerkungen:

• KAPA2G Robust PCR-Kits mit dNTPs enthalten KAPA2G Robust DNA-Polymerase, die für eine hohe Prozessivität und Inhibitortoleranz entwickelt wurde.
• Sowohl aufgereinigte genomische DNA als auch Rohproben (z. B. Kolonien-PCR) können als Template verwendet werden.
• 0,5 U KAPA2G Robust DNA-Polymerase pro 25 μl Reaktion verwenden. Bei schwierigeren PCRs (GCrich, Rohprobe) sind unter Umständen höhere Enzymkonzentrationen erforderlich.
• 15 s/kb Extensionszeit pro Zyklus gewähren und diese bei schwierigen Amplikons oder Templates auf 30–60 s/kb erhöhen.
• KAPA2G Puffer enthalten 1,5 mM MgCl₂ bei 1X.
• Weiteres MgCl₂ kann unter Verwendung der 25 mM MgCl₂-Lösung aus dem Kit hinzugefügt werden.
• KAPA2G Puffer A ist optimiert auf hohe Ausbeute, Spezifität und Sensitivität.
• KAPA2G Puffer B wird empfohlen für Inhibitor-kontaminierte Templateproben.
• KAPA2G GC-Puffer wird empfohlen für PCR bei hohem GC-Gehalt (>70 % GC).
• KAPA Verstärker 1 kann mit KAPA2G Puffer A oder B verwendet werden, besonders für Assays bei hohem GC-Gehalt.
• Reaktionsprodukte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Kloningvektoren geklont werden.

Qualität

Jede Charge KAPA2G Robust DNA-Polymerase enthält nachweislich < 2 % kontaminierendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). KAPA2G Robust PCR-Kits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert werden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur gehalten wird. Eine langfristige Lagerung bei Raumtemperatur und 4 °C wird nicht empfohlen. Beachten Sie bitte, dass Reagenzien, die bei Temperaturen über -20 °C gelagert werden, bei einer Kontaminierung während der Verwendung viel anfälliger für eine Zersetzung sind. Die Lagerung bei nicht empfohlenen Temperaturen erfolgt daher auf Risiko des Anwenders.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Nur Kit-Komponenten

• KAPA2G Robust Standard or HotStart^® DNA Polymerase 5 U/µL
• 5X KAPA2G Buffer A with MgCl₂
• 5X KAPA2G Buffer B with MgCl₂
• 5X KAPA2G GC Buffer with MgCl₂
• 5X KAPA Enhancer 1
• MgCl₂ 25 mM
• dNTP Mix (optional) 10 mM each

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07,GHS08
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H302,H371,H412
• P-Sätze: P260 - P264 - P270 - P273 - P308 + P311 - P501
• Gefahreneinstufungen: Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - STOT SE 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash