MAB3430

Anti-Desmin-Antikörper, Klon DE-B-5

clone DE-B-5, Chemicon^®, from mouse

• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Conjugate: unconjugated
• Clone: DE-B-5, monoclonal
• Application: IHC (p), WB
• Citations: 30

Eigenschaften

• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• conjugate: unconjugated
• antibody form: purified antibody
• clone: DE-B-5, monoclonal
• species reactivity: mouse, frog, pig, rat, human
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): immunohistochemistry (formalin-fixed, paraffin-embedded sections): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG1
• NCBI accession no.: NM_001927.3
• UniProt accession no.: P17661
• shipped in: wet ice
• target post-translational modification: unmodified
• Gene Information: human ... DES(1674)

Beschreibung

Immunogen

Gereinigtes Desmin.

Application

Anti-Desmin-Antikörper, Klon DE-B-5, ist zur Verwendung in WB, IH, IH(P), IH(P) für den Nachweis von Desmin validiert.

Forschungskategorie
Zellstruktur

Forschungsunterkategorie
Zytoskelett

Immunzytochemie: (5 μg/ml) Immunhistochemie: (5 μg/ml) Siehe IHC2011-6 für vorverdünnte und detaillierte Paraffinprotokolle.



Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.

Immunhisto-/zytochemie-Protokolle

Ideale Proben werden aus Gefrierschnitten von schockgefrorenen Gewebeproben gewonnen. Die gefrorenen Schnitte werden an der Luft getrocknet und dann 10 Minuten lang mit Aceton bei –20 °C fixiert. Überschüssiges Aceton lässt man bei 15–25 °C verdampfen. In Alkohol fixiertes und in Paraffin eingebettetes Material kann ebenfalls verwendet werden (2). Durch die Fixierung mit Formaldehyd wird die Intensität der Färbung je nach den Bedingungen, unter denen sie durchgeführt wird, verringert oder aufgehoben. Andere Fixierungsbedingungen müssen zunächst vom Forschenden getestet werden.

Es ist vorteilhaft, unspezifische Bindungsstellen zu blockieren, indem die Schnitte 20–30 Minuten lang bei 15–25 °C mit fötalem Kälberserum bedeckt werden. Überschüssiges fötales Kälberserum wird vor dem Auftragen der Antikörperlösung durch Dekantieren entfernt.

Zytozentrifugenpräparate von Einzelzellen oder Zellausstrichen werden ebenfalls in Aceton fixiert. Diese Präparate sollten jedoch nicht an der Luft getrocknet werden. Stattdessen wird das überschüssige Aceton durch kurzes Waschen in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) entfernt.

Die weitere Behandlung ist dann wie folgt:

• Das Präparat mit 10–20 μl Antikörperlösung bedecken und in einer feuchten Kammer bei 37 °C 1 Stunde lang inkubieren.

• Den Objektträger kurz in PBS tauchen und dann 3 × 3 Minuten lang in PBS waschen (jeweils in einem frischen PBS-Bad).

• Die Ränder des Präparats trockenwischen und das Präparat mit 10–20 μl einer Anti-Maus-Ig-FITC- oder Anti-Maus-IgG-Peroxidase-Lösung bedecken und 1 Stunde lang bei 37 °C in einer feuchten Kammer inkubieren lassen.

• Den Objektträger wie oben beschrieben waschen.

Das Präparat darf bei keinem der Schritte austrocknen.

Bei Verwendung einer indirekten Immunfluoreszenztechnik sollte das Präparat mit einem geeigneten Einbettungsmedium (z. B. Moviol, Hoechst) bedeckt und unter dem Fluoreszenzmikroskop untersucht werden. Wurde ein POD-Konjugat als Sekundärantikörper verwendet, sollte das Präparat mit einer Substratlösung (siehe unten) bedeckt und bei 15–25 °C inkubiert werden, bis sich eine deutlich sichtbare rotbraune Farbe entwickelt. Eine Negativkontrolle (z. B. nur der Sekundärantikörper) sollte während dieser Inkubationszeit in ihrer Farbe unverändert bleiben. Anschließend wird das Substrat mit PBS abgewaschen und das Präparat, falls gewünscht, etwa 1 Minute lang mit Hämalaun angefärbt. Die Hämalaunlösung wird mit PBS abgewaschen; das Präparat wird eingebettet und untersucht.

Substratlösungen:

Aminoethyl-Carbazol: 2 mg 3-Amino-9-ethylcarbazol werden in 1,2 ml Dimethylsulfoxid gelöst und mit 28,8 ml 50 mM Tris-HCI, pH-Wert 7,3 sowie 20 μl 3%igem H₂O₂ (w/v) versetzt. Lösung täglich frisch herstellen. Diaminobenzidin: 25 mg 3,3′-Diaminobenzidin werden in 50 ml 50 mM Tris-HCI, pH-Wert 7,3, gelöst und mit 40 μl 3%igem H₂O₂ (w/v) versetzt. Lösung täglich frisch herstellen.

Biochem/physiol Actions

Der Antikörper reagiert mit Desmin von Mensch, Schwein, Ratte und Kröte. In Gewebeschnitten wird dieser Antikörper zum Anfärben von Skelett-, Herz- und Eingeweide- sowie einige glatte Gefäßmuskelzellen verwendet. Zelllinien wie RD (ATCC CCL 136) und Hamster BHK-21 sind positiv (Debus et al., 1983).

Physical form

Flüssigkeit in 0,02 M Phosphatpuffer, 0,25 M NaCl mit 0,1 % Natriumazid, pH-Wert 7,6.

Format: Aufgereinigt

Preparation Note

Antikörper bei 2–8 °C in unverdünnten Aliquoten bis zu 6 Monate nach Empfangsdatum haltbar. NICHT EINFRIEREN.

Analysis Note

Western-Blot-Analyse: 1:1.000-Verdünnung

Other Notes

Ersetzt: 04-585

Konzentration: Die chargenspezifische Konzentration entnehmen Sie bitte dem Analysenzertifikat.

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CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
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