TOSRTRO

Transcriptor One-Step RT-PCR Kit

sufficient for 50 reactions, sufficient for 150 reactions, suitable for RT-qPCR, suitable for RT-PCR, hotstart

• UNSPSC-Code: 41106313
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 150 reactions; sufficient for 50 reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Leistungsmerkmale: hotstart
• Hersteller/Markenname: Roche
• Verpackung: pkg of 150 reactions (04655885001); pkg of 50 reactions (04655877001)
• Methode(n): RT-PCR: suitable; RT-qPCR: suitable
• Aufnahme: purified RNA
• Nachweisverfahren: probe-based

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Das Transcriptor One-Step RT-PCR Kit enthält alle benötigten Komponenten für eine einstufige RT-PCR (außer Primern und Template) in einem praktischen Format. Die Packung für 50 Reaktionen enthält zudem 10 Kontrollreaktionen (Kontroll-RNA und Kontroll-Primermischung).
Der Enzym-Mix des Kits enthält vier verschiedene Enzyme: Transcriptor Reverse Transcriptase gewährleistet sensitive und robuste Transkription mit hoher Ausbeute. Der Protector RNase-Inhibitor, der bei hohen Temperaturen voll aktiv ist, bietet während der reversen Transkription maximalen Template-Schutz und das Expand-System – eine Mischung aus Taq DNA-Polymerase und einer Korrekturlese-Polymerase – minimiert die Möglichkeit von Mutationen. Dies führt zu hoher Ausbeute und Wiedergabetreue bei der PCR.
Der optimierte RT-PCR Reaktionspuffer beinhaltet qualitativ hochwertige dNTPs und bietet die insgesamt verbesserte Leistung eines Heißstartsystems. Die einzigartige Heißstartkomponente des Puffers bindet und sequestriert Primer bei niedrigeren Temperaturen, um zu verhindern, dass die Primer an unspezifische Stellen binden. Eine weitere Komponente bindet Magnesium auf temperaturabhängige Weise, um eine unkontrollierte DNA-Synthese zu verhindern. Diese neue Pufferformulierung entfaltet ihre Wirkung während der reversen Transkription und der PCR, was zu verbesserter Spezifität und Sensitivität führt.
Die Kombination von optimiertem Reaktionspuffer und Enzym-Mix stellt die effiziente Transkription von schwierigen Templates mit hoher Sekundärstruktur und hohem GC-Gehalt ohne erhöhte Reaktionstemperatur sicher.

Die einstufige RT-PCR ist eine sehr sensitive Technik zur Bestimmung des Vorhandenseins oder Fehlens von RNA-Templates oder zur Quantifizierung der Expressionsniveaus durch qualitative, semiquantitative oder quantitative Analyse von RNA-Transkriptionsniveaus (z. B. für die Quantifizierung des Virusniveaus). Diese RT-PCR-Methode unterstützt auch die Amplifikation seltener Botschaften für das Klonen. Das einstufige Format ist praktisch, zeigt reduzierte Variabilität von Reaktion zu Reaktion und verhindert Verunreinigungen durch die Minimierung manueller Schritte.
Das Transcriptor One-Step RT-PCR Kit bietet die außergewöhnlichen Vorteile der Transcriptor Reverse Transcriptase und eines einstufigen RT-PCR-Formats mit Heißstart.

Für die einstufige Heißstart-RT-PCR unter Verwendung der Enzymmischung aus Transcriptor Reverse Transcriptase, Protector RNase-Inhibitor und dem Expand-System, mit innovativem Heißstartpuffer (Patente angemeldet).

Anwendung

Das Transcriptor One-Step RT-PCR Kit ist für eine schnelle, sensitive und spezifische End-Punkt-RT-PCR-Analyse von RNA (Gesamt-RNA, mRNA, in-vitro-transkribierte RNA oder virale RNA) mittels genspezifischer Primer ausgelegt.
Das Kit enthält einen innovativen Reaktionspuffer und kombiniert sensitive, hochergiebige reverse Transkription mit der verbesserten Leistung eine Heißstartsystems für hohe Wiedergabetreue und eine hohe Ausbeute bei der Amplifikation verschiedener Templates, einschließlich Gc-reicher RNA.
Das Kit bietet eine praktische, hochsensitive einstufige RT-PCR-Methode zur Generierung von Transkripten bis zu 6.5 kb für Anwendungen wie:

• Qualitative, semiquantitative oder quantitative Analyse der Transkriptionsniveaus von RNA
• Bestimmung des Vorhandenseins oder des Fehlens von RNA-Templates
• Quantifizierung der Genexpression durch RNA-Analyse (z. B. für die Quantifizierung des Virusniveaus)
• Klonen von RNA bis zu 6,5 kb

Das einstufige Format ist praktisch, reduziert die Variabilität von Reaktion zu Reaktion und verhindert durch Minimierung der manuellen Schritte die Kontamination.

Das Transcriptor One-Step RT-PCR Kit wurde verwendet in der Amplifikation:

• von Fragmenten des Hepatitis-C-Virus (HCV)
• der CH3-Region von schweren Ketten und der polyA-Region von leichten Ketten
• des murinen Leukämievirus (MLV)

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Erzielen Sie hohe Sensitivität und Ausbeute in einem breiten Ampflifikationsbereich:

Detektieren Sie so geringe Mengen wie 1 fg Gesamt-RNA.

• Erzielen Sie hohe Spezifität und reduzieren Sie Primer-Dimere.

Vertrauen Sie auf ausgezeichnete Leistung mit dem proprietären Heißstartpuffer des Kits (Patente angemeldet).

• Erzeugen Sie lange Fragmente:

Generieren Sie Transkripte bis zu 6,5 kb.

• Transkribieren die unterschiedlichsten Templates, selbst die schwierigsten (z. B. GC-reicher RNA):

Überwinden Sie die Sekundärstruktur mit thermostabiler Transcriptor Reverse Transcriptase in Verbindung mit einem optimierten Puffer.

• Sparen sie Zeit und verbessern Sie die Ergebnisse mit einem praktischen Kit:

Minimieren Sie Pipettierungsschritte und vermeiden Sie Kontaminierung durch Verwendung einer vorgemischten Enzymmischung und eines optimierten Puffers, der dNTPs in PCR-Qualität und Heißstartkomponenten enthält.

• Schützen Sie Ihre RNA-Probe:

Schützen Sie Ihre RNA mit dem bereitgestellten thermostabilen Protector RNase-Inhibitor, der seine Wirkung in der einstufigen RT-PCR entfaltet, wo andere RNase-Hemmer versagen, vor dem Abbau durch RNasen.

• Steigern Sie das Vertrauen in Ihre Ergebnisse:

Nutzen Sie die bereitgestellten Kontrollreaktionen zur Überwachung der Leistung.

Komponenten

• RT-PCR Enzymmischung mit Transcriptor Reverse Transcriptase, Protector RNase-Inhibitor und dem Expand-System
• RT-PCR Reaktionspuffer mit Heißstartkomponenten und dNTPs – fünffach konzentriert
• Wasser, PCR-Qualität
• Kontroll-RNA – HAV RNA, In-vitro-Transkript *
• Kontroll-Primermischung HAV RNA (Vorwärts- und Rückwärtsprimer) *

* Nur in der Packung für 50 Reaktionen enthalten.

Qualität

Jede Charge des Transcriptor One-Step RT-PCR Kit wird einem Funktionstest mit RT-PCR unterzogen. Die RT-PCR wird mit 1000 Kopien von HAV RNA, In-vitro-Transkript durchgeführt (ebenfalls bereitgestellt mit Kat. Nr. 04 655 877 001). Die Vorbereitung der Kontrollreaktion und die anschließende RT-PCR mit Primern für ein 246 bp HAV RNA-Fragment werden gemäß dem Standard-RT-PCR-Protokoll durchgeführt (30-minütige reverse Transkription bei +50°C), das auf der Packungsbeilage zu finden ist. Mit 1.000 Kopien des Targets wird nach der Agarosegelelektrophorese und der Ethidiumbromid-Färbung eine deutlich sichtbare Bande erzielt.
Zudem wird eine RT-PCR mit einer Verdünnungsreihe von Gesamt-RNA aus der menschlichen Leber (10 ng, 1 ng und 0,1 ng) durchgeführt. Die RT-PCR mit spezifischen Primern für ein 2,5-bp-Fragment von ApoB wird gemäß dem Standard-RT-PCR-Protokoll durchgeführt (30-minütige reverse Transkription bei +50°C), das auf der Packungsbeilage zu finden ist. Mit 1 ng RNA wird nach der Agarosegelelektrophorese und der Ethidiumbromid-Färbung eine deutlich sichtbare Bande erzielt.

Sonstige Hinweise

Überblick über reverse Transkriptasen

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Sicherheitshinweise

• H-Sätze: H412
• P-Sätze: P273 - P501
• Gefahreneinstufungen: Aquatic Chronic 3
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 2
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash