Strep-Tag® II/Strep-Tactin® 系統結合了高特異性與溫和的洗脫條件，在單一純化步驟後可提供高純度、具潛在活性的重組蛋白質或蛋白質複合物。
Strep-Tag® 系統以可靠的生物素/鏈霉親和素結合特異性為基礎。小的 Strep-Tag® II 多肽是 8 個氨基酸的融合標籤，其結合特異性與生物素相當。小尺寸的標籤可減少對目標蛋白結構或功能的潛在干擾。該標籤可與 Strep-Tactin® protein 結合，Strep-Tactin® protein 是一種工程化的鏈球蛋白，具有優化的 Strep-Tag® II 多肽結合位點。Strep-Tag® II肽與Strep-Tactin® 蛋白結合的緊密程度比與Strep-Tactin® 蛋白結合的緊密程度高出近100倍，但會在溫和、生理條件下洗脫。快速、一步親和純化 Strep-Tag® 融合蛋白可得到純度高於 95% 的活性蛋白。在親和標籤的比較中，Strep-Tag 多肽被證實具有優異的純化效果，產率高，成本適中 (1)。Strep-Tag® system 包括 Strep-Tag II® vectors (for expression in bacterial, insect, or mammalian cells), a wide range of Strep-Tactin® 親和純化樹脂、硬體和緩衝液，以及 Strep-Tag® detection reagents。
最新的 Strep-Tag® vectors
最新的 pET (E.大腸桿菌）、pIEx™（昆蟲細胞）和 pTriEx™（多系統 E.大腸桿菌、杆狀病毒和哺乳動物）融合蛋白表達載體納入了 Strep-Tag® ；II肽編碼序列，如表1所述和圖1所示，該序列被添加到腸激酶（Ek）或HRV 3C（3C）裂解位點上游以產生N-末端融合標籤。這些載體有幾個共同的額外特性：用於傳統克隆的多重克隆位點 (MCS)、對氨苄青霉素的抗性，以及可選的 C 端 His-Tag® 序列（含 10 個組氨酸殘基）。N 端 (Strep-Tag® II 多肽) 和 C 端 (His-Tag® II 多肽) 均可選擇「溫和洗滌」標籤。sup>® 肽），這些載體是雙重純化策略的理想選擇，旨在分離全長、高度純化的融合蛋白。具有 3C 蛋白酶位點（2）的載體還編碼了一個可選的凝血酶蛋白酶位點，以去除 C 端 His-Tag® peptide 融合蛋白。
圖 1.Strep-Tag® II 向量的地圖。
Strep-Tag® II Ek MCS
Strep-Tag® II 3C MCS
Ligation-independent cloning (LIC) options
The pET-51b, pIEx™-8, pIEx-10, ；pTriEx™-5和 pTriEx-7 载体是基于Ek/LIC克隆技术的Radiance™克隆系统（3）的新成员。如圖 2所示，載體 pET-52b, pIEx-9和 pTriEx-6 以新的3C/LIC格式提供。這些 3C/LIC 載體具有一個 N 端 Strep-Tag® II 融合標籤（可被 3C 蛋白酶裂解）和一個最佳的 C 端 His-Tag® 融合標籤（可被凝血酶裂解）。可單獨購買未切割的質粒，也可在 LIC 向量試劑盒中線性化。
分泌選項
pIEx-10 and pTriEx-7 feature the mouse IgM signal sequence for secretion of fusion proteins in both insect (4) and mammalian cells (5)。我們已經在昆蟲和哺乳類動物細胞中驗證了融合蛋白的分泌，以及在 大腸桿菌 細胞中向外質體的輸出（數據未顯示）。
圖 2.3C/LIC 克隆策略
Strep-Tag® II融合蛋白的純化
在Strep-Tag® ；II 融合蛋白表達後，裂解細胞，並將裂解液加入含有固定化 Strep-Tactin® affinity resin 的柱或盒 (圖 3A)。用 1X Strep-Tactin® Wash Buffer (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA; pH 8.0)清洗柱/盒數次以去除非特異蛋白。結合的 Strep-Tag® II 蛋白會被 2.5 mM 的 Desthiobiotin 溫和洗脫。Desthiobiotin是生物素的類似物，可競爭Strep-Tactin® 蛋白結合位點（圖3C）。由於洗滌緩衝液是添加了去硫代生物素的洗滌緩衝液，而且去硫代生物素是一種特異的競爭分子，因此任何非特異地與樹脂結合的蛋白質通常不會與 Strep-Tag® fusion protein 一起洗脫。
圖 3. Strep-Tag® II® 和 One-STrEP™-Tag 與 Strep-Tactin® 親和純化及柱再生示意圖。
Strep-Tactin® 樹脂再生
Strep-Tactin® 樹脂可以再生 3 到 5 次。過量的黃色偶氮染料羥基偶氮苯甲酸 (HABA) 會將去硫代生物素從 Strep-Tactin® 蛋白質上的結合位點置換出來（圖 3D）。
生物素干擾
細胞或培養液中的生物素會與 Strep-Tactin® 蛋白結合，降低樹脂的結合能力。在許多情況下，細胞萃取物中的生物素濃度不會高到足以干擾Strep-Tag® 融合蛋白的純化。然而，有些細胞培養介質可能含有相當高濃度的生物素。不與 Strep-Tag® peptide 結合的 Avidin 可用來結合並「中和」任何生物素。為了測試BacVector® 昆蟲細胞培養基中可能存在的生物素干擾，從Sf9昆蟲細胞中純化瞬間表達的Strep-Tag®-Renillaluciferase (RLuc)融合蛋白，在裂解前向細胞中添加或不添加阿維丁。纯化结果表明，添加或不添加阿维丁，RLuc的量或纯度没有差异（图4）。
Strep-Tactin® 樹脂
Strep-Tactin® 樹脂有多種預包裝、即用型色柱和色盒或散裝樹脂。根據融合蛋白的大小，Strep-Tactin® 樹脂的結合能力為 50-100 nmol/mL 樹脂（30 kDa 蛋白可達 3 mg）。Strep-Tag® II 的離解常數 (Kd) 為 1 µM。方便的預包裝 Strep-Tactin® Superflow™ 柱（0.2 mL 或 1 mL 樹脂）專為簡單的重力流純化而設計，不需要額外的設備。
Prepacked Strep-Tactin® Superflow Cartridges (1 mL or 5 mL resin) 和 Strep-Tactin MacroPrep® Cartridges (1 mL resin) 可以用於低壓液相層析 (LPLC) 或注射器。每種樹脂具有不同的非特異蛋白結合特性。如果非特異性蛋白質污染是特定宿主/重複蛋白質的問題，使用替代樹脂可以解決問題。試劑盒有一個內螺紋 Luer lock 入口和一個外螺紋 Luer lock 出口。此外，還有多種不同的適配器組，方便與常用的 LPLC 系統連接。
為了從小規模培養物中快速純化 Strep-Tag® 蛋白質，Strep-Tactin® ?sup>® SpinPrep™套件包括固定 Strep-Tactin 樹脂的旋轉柱、洗滌緩衝液和洗脫緩衝液。SpinPrep™ 迴轉柱設計為單次使用。
為了純化樣本以進行高通量處理，Strep-Tactin HT96™ 純化套件提供 Strep-Tactin® 樹脂，96 孔板規格，每孔結合能力高達 100 µg Strep-Tag® II 蛋白質。套件包含純化板、過濾板、洗板、接收板，以及洗滌和洗脫緩衝液。
Strep-Tag II/Strep-Tactin® 純化系統已針對柱純化進行最佳化，因此不建議使用批次方法。然而，批量的 Strep-Tactin® Superflow 和 MacroPrep 樹脂提供了根據特定實驗需求調整親和純化規模的靈活性。為了增加便利性，洗滌、洗脫和再生緩衝液可單獨使用，或結合在 Strep-Tactin® Buffer Kit 中使用。
生理緩衝液
使用 Strep-Tag® II/Strep-Tactin® system, Strep-Tag® II融合蛋白用生理緩衝液從固定化的Strep-Tactin® 樹脂中溫和而特異地洗脫出來。保留特定蛋白結構和活性所需的試劑可以添加到緩衝液中，前提是 pH 大於 7.0
變性條件（例如 6 M 尿素、6 M 氫氯化胍）與 Strep-Tactin® 樹脂不相容。但是，如果需要變性條件，則可以使用載體上的兩個親和標籤（Strep-Tag® II 和 His-Tag® 肽）進行雙重純化。最初可使用 His-Bind® 純化來純化變性緩衝液中的蛋白質，這也會濃縮目標蛋白質。經過透析或緩衝液交換後，濃縮後的蛋白可使用 Strep-Tactin® resin 進一步純化。
分離蛋白複合物
溫和的純化條件有助於使用 Strep-Tag® II 融合蛋白來研究蛋白質與蛋白質之間的相互作用（圖 3B）。One-STrEP™ 蛋白相互作用試劑盒是專門設計來提供快速有效的單步純化完整蛋白複合物。即使是弱聯繫和/或瞬間聯繫的蛋白質複合物也能被分離出來。該試劑盒包括帶有 CMV 促動子的 pEXPR-IBA103 哺乳動物表達載體、Strep-Tactin® Superflow™ 0.2 和 1 mL 色譜柱、緩衝液、陽性對照品和檢測用的 Strep-Tag® II 抗體 HRP 結合物。
檢測Strep-Tag II融合蛋白
特異性識別Strep-Tag® II的8個氨基酸的抗體。Tag® II融合標記的八個氨基酸的特異性抗體，可幫助檢測Strep-Tag® II融合蛋白。高特異性 Strep-Tag® II 單株抗體和 Strep-Tag® II 抗體 HRP 結合物與其他蛋白沒有已知的交叉反應。將凍乾的 Strep-Tag® II 單株抗體重組後，可以 200 ng/mL 的濃度作為一抗，在 Western 印圖中檢測 5 ng 的 Strep-Tag 蛋白。Strep-Tag® II 抗體 HRP 結合物是單一檢測試劑，不需要第二抗體，可用於 ELISA 或 Western 印圖中檢測 Strep-Tag 蛋白。
為了輕易驗證蛋白質的大小，Strep-Tag II Perfect Protein™ Markers 提供從 16 到 100 kDa 的六種 Strep-Tag II 蛋白質梯形圖（16、23.5、30、45、60、100 kDa）。這些蛋白質會分解成銳利、緊密的帶狀物質，當使用 RAPIDStain™ Reagent、Coomassie blue 或 Strep-Tag II 抗體在 Western 印跡上檢測時，這些帶狀物質會均勻染色。
入門試劑盒
入門 Strep-Tag® ；II 試劑盒讓您輕鬆開始使用 Strep-Tag® II 系統來親和純化在 E.大腸桿菌中表達的蛋白質。有兩種試劑盒可供選擇，包含用於克隆目標蛋白的 pET-51b(+) 或 pET-52b(+) 載體；Strep-Tactin® Superflow™ 膠柱 (1 mL)、洗滌劑和鹽霧劑。色譜柱 (1 mL)、洗滌、洗脫及再生緩衝液，用於純化；以及 Strep-Tag® II Antibody HRP Conjugate，用於融合蛋白的檢測。
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