糜蛋白酶

E.C. 3.4.21.1

• 產品
• 物理特性
特異性和動力學 
• 抑制劑<
• 溶解性和溶液穩定性<

物理特性

分子量：25 kDa¹ (Bovine)
pI: 8.752 (Bovine)
消光係數：E1%= 20.4 (280nm)

hymotrypsin在胰腺的acinar細胞中以非活性的前體hymotrypsinogen產生，α-hymotrypsin是由它的zymogen, Chymotrypsinogen A產生的主要活性酵素形式。

在體內，胰蛋白酶水解酶原的速率和自溶會產生不同數量的α、π、δ和γ變體。³ α-Chymotrypsin 是肽酶 S1 家族的一種絲氨酸蛋白酶，由 241 個氨基酸殘基組成。該分子有三條肽鏈：一條 13 個殘基的 A 鏈、一條 131 個殘基的 B 鏈和一條 97 個殘基的 C 鏈。⁴

圖 1. 物理特性

特異性和動力學

α-Chymotrypsin 來自牛胰腺，可選擇性地催化酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸 C 端側肽鍵的水解。甲硫氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、組氨酸、甘氨酸和丙氨酸的 C 端也會發生二次水解：7.8⁸
(pH 6.0: 約 35% 的最大活性，pH 9.3: 40% 的最大活性)⁸

最適溫度：50 °C⁹

α-Chymotrypsin 也被 10 mM Cu²⁺ and Hg²⁺ 完全抑制。¹

溶解性和溶液穩定性

hymotrypsin通常可溶解於 1 mM HCl (2 mg/mL)，產生清澈的溶液。

用含有 2 mM CaCl₂ 的 1 mM HCl 重組，等分並儲存於 -20 °C。儲存於較高的 pH 值時會發生自溶。鈣的存在也是一種穩定劑。⁵ 冷凍的等分試樣可穩定保存約 1 周。糜蛋白酶既能被 Ca²⁺ 活化，又能被 Ca²⁺ 穩定。

應用

糜蛋白酶與縮氨酸的比例（w/w）約為 1:60。在含有 10 mM CaCl₂、pH 7.8、30 °C 的 100 mM Tris HCl 中進行肽消化。如果溫度超過 37 °C，可能會發生自我消化。所有實驗均應使用已知的多肽（如 melittin）作為對照。在 37-40 °C 下孵育 24 小時。可將 pH 調至 2.0 終止消化。^6,7

參考資料

1. Burrell MM. Enzymes of Molecular Biology. https://doi.org/10.1385/0896032345

2. Ui N. 1971. Isoelectric points and conformation of proteins. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure. 229(3):582-589. https://doi.org/10.1016/0005-2795(71)90273-x

3. Desnuelle P, Boyer P. 1960. The Structure of Chymotrypsin. The Enzymes. 3185-191.

4. HESS G. 1971. The Enzymes. 3. New York: Academic Press.

5. Burrell MM. Enzymes of Molecular Biology. https://doi.org/10.1385/0896032345

6. Spackman D, Stein W, Moore S. 1960. The disulfide bonds of ribonuclease.. Journal of Biological Chemistry. 3(255):648-659.

7. Kamp RM. 1986. Separation of Peptides.8-20. https://doi.org/10.1007/978-3-642-71534-1_2

8. Ásgeirsson B, Bjarnason JB. 1991. Structural and kinetic properties of chymotrypsin from atlantic cod (Gadus morhua). Comparison with bovine chymotrypsin. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Comparative Biochemistry. 99(2):327-335. https://doi.org/10.1016/0305-0491(91)90050-n

9. Fernández M, Villalonga MdL, Fragoso A, Cao R, Villalonga R. 2002. Stabilization of ?-chymotrypsin by modification with ?-cyclodextrin derivatives. Biotechnol. Appl. Biochem.. 36(3):235. https://doi.org/10.1042/ba20020056