間充質幹細胞表徵

間充質幹細胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是纖維母細胞樣多能成體幹細胞，來源於多種組織（包括骨髓、脂肪組織、臍帶和牙髓），具有自我更新能力。歷史上，研究人員使用各種方法分離這些幹細胞，而國際細胞治療學會(ISCT)提出了正確的間充質干細胞表徵標準，以協助細胞培養的一致性。根據該指南，間充質干細胞必須1）在標準培養條件下具有可塑性黏附性2）表現正確的間充質干細胞陽性和陰性標記3）保留多能表型，能夠在標準分化條件下分化為脂肪細胞、成骨細胞和軟骨細胞。PromoCell 的所有人類間充質幹細胞系在每一批製造過程中都通過 ISCT 所有三項標準的品質控制測試，以確保細胞的特性和效能。

圖 1. 識別人類間充質干細胞的最低 ISCT 標準。

Mesenchymal Stem Cell Markers

人類間充質干細胞必須表達下列經流式細胞計或免疫細胞化學分析的陽性和陰性表面標記： ≥ 95% 陽性： CD105, CD73, CD90 且≤2% Negative： CD45, CD34, CD14, CD19, HLA-DR.

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表 1. ISCT 建議用來識別 MSCs 的細胞表面抗原清單。

；	表面抗原	替代名稱	表達的細胞
最初由MAb SH2辨識；內皮細胞、間充質干細胞、造血細胞
	CD73	5'核苷酸酶	最初由 MAb SH3 和 SH4 識別；B 和 T 細胞亞群、樹突網狀細胞、上皮細胞和內皮細胞
	CD90	Thy-1	CD90tr>	陰性	CD45	L-CA, PTPRC	泛白血球標記
CD34	-<	原始造血祖細胞和內皮細胞
CD34	<-
CD14 /CD11b	-/ Integrin α-M, CR3A	單核細胞、巨 噬細胞、朗格汉斯細胞和粒細胞 / 粒細胞、單核細胞、自然殺傷細胞、T-和B-細胞及樹突 細胞
CD79α/CD19	MB1、IGA /-	B細胞 /  B細胞和卵泡樹突狀細胞
-	除非受到 IFN- g 的刺激，否則不在 MSCs 上表達。
資料來源  ISCT ( International Society  for Cellular Therapy), Abcam Human CD Antigen Guide

陽性 MSC 標誌

陰性 MSC 標誌

圖 2.從骨髓中分離出的 PromoCell 人類間充質幹細胞的流式細胞儀分析。 CD73、CD90和CD105陽性表達與CD14、CD19、CD45和HLA-DR陰性表達的直方圖。

間充質幹細胞自我更新

圖 3.骨髓衍生 hMSCs 在纖維連接素塗層塑料上的生長表現。 在無血清/無毒素的 PromoCell 生長培養基 DXF 中培養超過 7 個傳代的間葉干細胞可維持穩定的生長率，少於 30 小時/雙倍。

間充質幹細胞分化

圖 4.多能骨髓衍生的 hMSCs 分化為脂肪細胞、軟骨細胞和骨細胞。 A)脂肪細胞的脂質泡積聚顯示廣泛的細胞內脂質泡形成。 B)軟骨細胞和軟骨細胞外基質的 Alcian Blue 染色。 C)茜素紅 S 染色礦化成骨細胞中的鈣沉積。

結論

使用 PromoCell 的定義無血清培養基分隔人類間充質干細胞，可得到均勻、定義清晰的間充質干細胞群，與 ISCT 提出的表達特徵一致。穩定的生長表現和多次傳代擴增，證明了細胞的自我更新能力。間充質干細胞可分化為成脂、成骨及軟骨三系，證明其具有多系分化能力。間充質幹細胞的分離方法和培養條件對於獲得符合 ISCT 規範的定義良好的間充質幹細胞群起到關鍵作用。將間充質幹細胞的特性和培養條件標準化，可確保實驗室與實驗室之間產生可重複的結果。

材料

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