Percoll 在血細胞中的應用

血細胞

血液中存在的所有細胞類型都可以在預先製成的 Percoll 梯度上進行分離。Pertoft 等人 (55) 所描述的方法 (圖 19)，同時使用了速率分區 (依大小分離) 和等離子 (依密度分離) 技術。將稀釋的血液分層置於預先製成的自製梯度之上，並以 400 × g 離心 5 分鐘，此時血小板或血小板（比其他存在的細胞明顯更小）不會穿透梯度。 

移除含有血小板的血漿層並代之以生理食鹽水，繼續以 800 × g 離心 15 分鐘，形成單核細胞（淋巴細胞和單核細胞）、多形核細胞和紅細胞的同種帶。

雖然上述方法展示了 Percoll 對於全血分離的效用，但使用簡單的階梯梯度可以顯著富集大部分血細胞。簡單的階梯梯度通常可為下游處理提供可接受的產量與純度。以下的應用表格包含許多使用不同類型 Percoll 梯度來純化血細胞及其他細胞類型的範例。

圖 19. 在 Percoll 梯度中分離人血細胞。管中注入 10 ml 70% (v/v) Percoll in 0.15 M NaCl (p=1.086 g/ml)，在 14° 角轉子中以 20 000 × g 轉 15 分鐘進行梯度。使用注射器從試管底部取出 2 毫升梯度材料，然後將 1 毫升用 1 毫升 0.15 M NaCl 稀釋的肝素化血液分層置於梯度材料之上。按指示進行離心。使用密度標記珠監測密度。MNC = 單核細胞，PMNC = 多形核細胞，RBC = 紅血球（55，經作者和出版商允許轉載）。

編輯下列表格是為了協助研究人員選擇最有可能包含特定細胞或組織類型使用 Percoll 相關資訊的參考資料。

淋巴細胞
種類	組織類型	評論	下游應用	參考文獻。#
血液	Percoll密度離心導致L-selectin表面反應性顯著下調。	891<
連續	使用 Percoll 密度梯度分離大的（低密度）活化細胞和小的（高密度）靜止細胞。	細胞培養、FACS、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）測試和 Northern 印圖	892
人類	以 Percoll 梯度離心法獲得的扁桃腺大 B 淋巴細胞 (體內活化細胞) 較靜止細胞顯示更高的 IL-4R 水準。	893
人類	使用Percoll分離增殖與非增殖細胞。	11
	此程序可產生 > 90% 的存活細胞，並證實對更新過度生長的培養物相當有幫助。	16
人類	使用Percoll分離單核細胞和淋巴細胞。	40
人	淋巴細胞富集在介於66.7 和 44% Percoll 的界面中富集淋巴細胞。使用磁珠進行進一步純化。	894
人類	使用Percoll從外周單核細胞中分離大顆粒淋巴細胞（LGL）。	在 LGL 群中檢測 CD5LOW+ <	895
人類	Percoll梯度用於分離小(高密度)和大(低密度)細胞。	896
非連續		897
人類	使用Percoll分離低密度細胞。	898
Percoll 用于分离低密度细胞。	從低密度 Percoll 分離物中回收淋巴細胞。	899
human	discontinuous	tonsil	Percoll 用來分離卵泡樹突細胞 (FDCs)。	人類	使用Percoll從骨髓中分離出白血病細胞。	901<
非連續性	經 Percoll 分離後，根據 4F2 標誌和轉铁蛋白受體的存在情況估計，可獲得幾乎純淨的活化細胞群。	免疫荧光和磷脂代谢测定902
人類	淋巴細胞純度為 >99%，而單核細胞群則富集了 82% 至 90%。	903
人類	Percoll用於從T細胞中分離大顆粒淋巴細胞（LGL）。	904
B細胞富集使用Percoll。	flow cytometry	905
非連續性（5層）	大顆粒淋巴細胞 (LGL) 收集自低密度部分，而 T 細胞則位於密度較高的底層部分。	906
人類	69
人類		cytotoxicity assay, flow cytometry analysis, and complement-dependent lysis	907
human<	使用Percoll分離有活力和無活力的細胞。與 Ficoll- Isopaque 相比，Percoll 的產率略高，紅細胞污染略低。	83
canine	Percoll用於富集和去除抗體陽性細胞。	908
不連續 (4 步和 2 層)	經由 45/50% Percoll 梯度的純化淋巴細胞最後沉澱，將自然殺手 (NK) 活性濃縮為單一淋巴細胞帶。	909
mouse<	富集度從44.1%（單次過濾）增加到52.4%（多次過濾），尼龍絨過濾後的富集度從70.3%（單次過濾）增至 82.8%（多次過濾）。	flow cytometry	910
mouse	Percoll用於分離原始和記憶T細胞。	911
小鼠<	用Percoll分離B細胞。	912
連續（3層）	腸	用Percoll分離腸上皮內淋巴細胞（IEL）。	913
mouse<	用Percoll分離小的靜止B細胞。	914
牛	純化細胞純度為> 80%。	915

單核細胞
種類	組織類型	評論	下游應用	參考文獻。#
外周血	使用 Percoll minigradient，在骨髓移植 (BMT) 後的所有時間點，都能從患者身上取得 90% 至 100% 的細胞。	916
連續	分離的單核白細胞(MNL)部分含有80%的細胞對a-萘乙酸酯酶(a-NAE)呈陽性反應。	917
連續性	外周血	使用Percoll分離單核細胞，其純度為85%，存活率為95%。	918
Percoll已證明非常適用於從血液中分離單核細胞，以及從腹水和滑膜液中分離巨噬細胞。	34
連續性	血液	Percoll梯度用於單核細胞與淋巴細胞的分離。	40
連續	使用一步法獲得純度為 20% 的高產量單核細胞懸浮液，此方法不需要在培養前進行清洗。兩步法可得到優於 90% 純度的單核細胞，但產量較低。	57
人	MNL用Percoll分離成兩個部分：	用 Percoll 將 MNL 分離為兩部分：一部分主要由單核細胞組成，另一部分則由淋巴細胞組成。	919
人類	非連續	血液	單核細胞純度為 95%。	920
非連續性	全血	Percoll梯度用於造血祖細胞的富集。	921
血液	血液	922
不連續	骨髓	；	923
血液	淋巴細胞純度為99%，單核細胞群的豐富度為82%至90%。	903
人類	PMN回收率為> 90%，RBC污染率為< 5%。	924
人類	925
Monocytes ≥ 95% 純度。	從65%至75%界面取得的細胞為99%粒細胞。	人類<	使用1-step梯度，單核細胞的純度為93%至96%。	927
連續 (5 層)	外周血	經 Wright-Giemsa 染色鑑定的顆粒單核細胞/巨噬細胞。	928
人類	單核細胞純化至 90%，淋巴細胞純化至 99%。	69
人類				929
equine	非連續性（1層）	外周血	所有MNC均在Percoll梯度上回收，無任何中性粒細胞污染。	930

紅細胞
種類	組織類型	評論	下游應用	參考文獻。#
連續性	免疫螢光分析 1 型補體受體 (CR1) 和 CD59，CR1 在體內的蛋白質分解裂解。	931
連續性	紅細胞膜脂質過氧化、維生素 E 及跨膜還原系統分析	932
人體章nbsp;	描述了一種利用Percoll密度梯度離心法對人類紅細胞進行年齡分組的快速方法。	77
非連續性（4 層和 8 層）	血液	描述了一種使用 Percoll 根據年齡分餾紅血球的快速方法。	933
人類		血液	血液		934
discontinuous (4-layer)	密度標記珠（Cytiva）的位置是用來收集細胞密度< 1。00 g/cm3 或 > 1.119 g/cm3。	產量應力實驗：細胞的敏感指標：	935
人類	使用Percoll梯度將紅細胞分離成4個密度分段。	血小板活化因子（PAF）乙酰水解酶活性和膜流動性	936
human <	使用低滲透析製程載入L-天冬酰胺酶的紅細胞被分離成8個餾分。	937
Human ；	非連續梯度範圍 1.080 to 1.115 g/cm3 with each layer differing in density by 0.005 g/ml produced nine cell fractions.	66
人類		研究紅血球的變形能力和細胞年齡	938
	Percoll用於反滲透裂解載有六磷酸肌醇（IHP）的RBC的密度分離。	939
	通過監測 Percoll 密度梯度上的 RBC 分佈模式，對六磷酸肌醇的兩種細胞載荷技術進行了詳細比較。	940
Mastomys natalensis	使用Percoll分離疟原虫寄生的紅細胞和未寄生的細胞。	941<
連續（自成體）	分離 RBC 得到五個不同的群體，這些群體在第二梯度中重新離心時保持其密度。	942
mouse<	用Percoll對化學誘導的紅細胞進行密度梯度分離。	943
不連續	紅血球僅污染 0.001% 的有核細胞。	944
大鼠	945
非連續 (7 層)	血液	兔紅血球可重複分離成不同成熟階段的血球群。	946
	在 45% 到 65% Percoll 區域的漸層產生三個紅細胞部分，這是由於血紅素成分的多重性。	947

Natural Killer (NK) cells
Species	梯度類型	組織類型	評論	下游應用	參考文獻。#
	Percoll（預培養）步驟有助於密度分離靜止細胞和較大的淋巴細胞。	948
人類	黏附NK細胞的K562細胞一起分離。NK 細胞的富集率為 71.3%。	61
人	低密度部分（42.	使用 NK 活性富集 4 倍的低密度部分（42.	949
血液	使用磁珠進一步純化，得到純淨的制劑。	950<
	回收率為 > 80%，而根據胰藍排除法判斷的存活率為 > 95%。	951
mouse<	50/55%界面的細胞具有最豐富的NK細胞活性。	952
		NK細胞富集在密度較低的Percoll分離物中，而天然細胞毒性T細胞(NCT)則分佈在密度較高和密度較低的分離物中。	953
小鼠	所有NK活性均高於1.08 g/ml 密度。1.04 和 1.06 的介面可使 NK 祖先富集 2 倍。	954

中性粒細胞
種類	組織類型	評論	下游應用	參考文獻。#
不連續 (1 層)	中性粒细胞在1.077 g/ml 墊中。	955
人			956
人類<	用Percoll分離單核細胞和淋巴細胞。	957
人類	嗜酸性粒細胞和中性粒細胞在葡聚糖沉澱後分離。	958
人類	細胞製備分層置於 Percoll 墊上以去除單核細胞。	將細胞製備物分層置於 Percoll 墊上，以去除單核細胞。	959
人類	中性粒細胞的純度為95%。	間接免疫螢光法、免疫電子顯微鏡和 FACS 分析、O2 消耗量
Percoll用於嗜氮粒、特定粒、明膠酶粒、質膜和分泌囊泡的亞細胞分離。	ELISAs for NGAL, gelatinase, lactoferrin and myeloperoxidase	961
小鼠	使用 Percoll 獲得約 97% 純度的多形核中性白血球 (PMN) 製備。	70

嗜酸性粒細胞
種類	組織類型	評論	下游應用	參考文獻。#
	嗜酸性粒細胞使用 Percoll 梯度分離法純化，然後再使用免疫磁珠。	使用 Percoll 梯度法純化嗜酸性粒細胞，然後使用免疫磁珠，使用此程序，嗜酸性粒細胞的純度總是達到 95%，存活率則為 98%。	FACS 分析、嗜酸性粒細胞移動測試、Ca++ 測量td valign="top">962
非連續 (2 層)	血液	嗜酸性粒細胞的回收率為 40 至 60%，經胰藍排除法測試的存活率為 98%，純度為 85%。	963
人類	嗜酸性粒細胞純度為 >95%，且該方法不會誘發嗜酸性粒細胞的引物。	964
人類	嗜酸性粒細胞純度總是 85%，回收率介於 40% 至 60% 之間。活力為 98%。	965<
	嗜酸性粒細胞純度為 95 至 99%，使用胰藍的存活率為 98%，回收率為 40 至 60%。	966
非連續性（4層）	全血	分析葡聚糖沉澱對中性粒細胞和嗜酸性粒細胞密度的影響。	958

嗜鹽粒細胞
漸層類型	評論
嗜碱性粒细胞通过 Percoll 密度梯度分离和细胞分选纯化。此程序的純度為 95%，總產量估計在 5% 到 28% 之間。	流式細胞儀、組胺釋放、電子顯微鏡	967
人體	骨髓	低密度部分中嗜碱性粒细胞的纯度（< 1.063 g/ml）中嗜碱性粒细胞的纯度一般为> 75%。	968
	使用 Percoll 梯度法取得高度純化的嗜碱性粒細胞，再使用流式細胞儀進行陰性選擇。	969
人類	大部分嗜碱性粒细胞位于1.070 至 1.080 界面。此部分的純度為 36% 至 63%。	使用免疫磁珠進行陰性選擇，以進一步純化	970
human	血液	使用 Percoll 梯度法取得高度純化的嗜碱性粒細胞，再使用流式細胞計法進行陰性選擇。	971
使用 Percoll 梯度純化至 80% 的嗜基細胞，再以單株抗體去除雜質。	流式細胞計測法和鈣離子刺激物刺激後白三烯 C4 的產生	972
972
人類使用 Percoll 方法，嗜碱性粒细胞纯度为 85% 至 96%。	973
	用免疫磁珠、免疫螢光、電子顯微鏡進一步純化	974

材料

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