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細胞培養中支原體的檢測、預防和消除

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支原體的常見來源及其控制方法
支原體清除方法
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The INVISIBLE Contamination THAT TO CELL LINES AND CULTURES

維持無污染的培養物是細胞研究的基礎。在真核和幹細胞培養物中，最普遍的污染是支原體。此細菌屬的成員通常是亞微米大小，且缺乏細胞壁。

雖然支原體污染通常不會導致細胞死亡，但會對培養細胞造成各種影響。這些影響包括新陳代謝改變、生長速度減慢和染色體畸變。這些變化可能無法立即察覺，但最終會影響培養數據的可靠性。

簡而言之，支原體污染會破壞受影響細胞株的有效性，無法為生命科學研究提供有意義的資料。

實驗室中支原體的常見來源以及如何控制這些來源

實驗室中支原體污染的來源非常具有挑戰性，難以確實控制。

這些細菌也可能透過受污染的補充劑（如胎牛血清）傳入，或從其他受污染的細胞培養物傳播。這種交叉污染是實驗室中引入支原體污染的一種非常常見的方式。由於支原體尺寸小（0.2-0.8 µm）且易變形，因此在無菌培養基過濾過程中，支原體可以穿透孔徑低至 0.2 µm 的過濾器。支原體還能透過培養物處理過程中產生的氣溶膠和微粒迅速擴散，污染實驗室的其他區域。

嚴格遵守良好的實驗室實踐（如認真無菌技術）是關鍵。為了成功控制污染，我們也強烈建議對培養物進行例行篩檢。有關其他污染來源及預防污染方法的詳細資訊，請閱讀我們的文章cell contamination troubleshooting。

在細胞培養基、緩衝液和試劑製備過程中，使用 0.1 µm 級的滅菌過濾器有助於清除或減少支原體。專為實驗室設備和表面設計的淨化噴霧和擦拭布可提供額外的防污染保護，同時提高 PCR 篩檢結果的準確性。

支原体检测方法

以下产品代表了支原体检测的完整工具包。研究人員可能希望使用第二種檢測方法來確認支原體污染的陽性結果。 Multitest 套件也可以確保以足夠的頻率進行檢測，以保護重要的培養物。三種有效的檢測方法是：

支原體培養：將針對支原體優化的細菌培養基接種到培養測試樣本中，並在支原體瓊脂平板上培養。這是最直接的支原體污染檢測，但所需時間也最長。在進行評估之前，應讓培養物至少培養兩週，支原體培養的結果可能需要一個月的時間才能獲得。
DNA染色法：這種簡單的方法依賴於用 Hoechst 或 DAPI 對細菌核染色，這種染色在螢光顯微鏡下是可見的。
PCR (聚合酶鏈反應)：如果培養樣本中存在細菌 DNA，該方法會將其擴增。以 PCR 為基礎的支原體檢測已經成為一種值得信賴的例行細胞培養維護方法，也是提供支原體檢測服務的公司所採用的方法，同時也是細胞庫保護自己存貨的方式。精心設計的 PCR 引物對於消除假陽性和確保寶貴的培養物在未受污染的情況下不被破壞非常重要。

PCR 測試極為靈敏，可快速提供結果，讓研究人員在偵測到支原體污染時能快速反應，隔離並消除污染。LookOut^® 支原体 PCR 检测试剂盒的灵敏度极高，每 μL 样品的检测限低至 2 个基因组。我們最新的一步式 PCR 套件可將移液操作減至最少，因為 PCR 混合物包括反應所需的所有試劑：引物、核苷酸、聚合酶和內部擴增對照，以即用型凍結化反應混合物提供。檢視我們的方法Optimized PCR-based Detection of Mycoplasma。

DNA污染會影響支原體 PCR 測試的結果。因此，消除 PCR 環境中的污染 DNA 對於確保 PCR 測試的準確性非常重要。DNA 消除噴霧 (L9060-50)可清除 PCR 環境中的核酸污染物，使 PCR 結果更準確。

支原体清除方法

有效的过滤策略对于防止支原体污染至关重要。由於支原體體積小且易變形，因此可穿透孔徑等級低至 0.2 µm 的過濾器。研究顯示，Stericup^® 和 Steritop^® 過濾器含有 0.1 µm PES 膜可在細胞培養基和緩衝液製備過程中有效減少支原體。性能表明，這些過濾器可用於減輕上游細胞培養過程中支原體污染的風險。透過在細胞培養工作流程中採用微過濾策略，研究人員可以降低支原體污染的相關風險，並確保其生物材料的完整性和品質。

MYCOPLASMA ELIMINATION SolutionS

一旦檢測到支原體，細胞培養人員可以從培養物中消除污染或重新開始。

我們的支原體消除試劑盒是消除細胞培養物污染的方便、有效的選擇。