Supelco 製劑型 HPLC 產品用於藥物開發與生產
Wayne K. Way
在製藥產品的開發和生產過程中，對純化材料的需求與日俱增。FDA 和其他監管機構持續對活性藥品成分 (API) 提出更嚴格的純度要求，包括最近的手性純度。研究通常與雜質、降解物和代謝物同時執行，以確定它們的效用或毒性是否會對開發中的 API 造成影響。隨著純化需求的增加，除了傳統的結晶之外，通常還需要其他工具。一些選擇包括過濾、蒸餾、固相萃取、薄層層析 (TLC)、低壓液相層析 (LPLC) 和高效液相層析 (HPLC)。在許多情況下，制備型 HPLC 是最強大且功能最齊全的方法，可用於製藥工業中具挑戰性的純化任務。
固定相選擇
製備色譜法的第一個重要標準是選擇適當的固定相。除了相的適用性之外，還要考慮分析和製備尺寸以及散裝包裝材料的商業可用性。根據最終用途，全球可用性可能是一個考慮因素。一般而言，製備色譜柱會使用 10 微米或更大顆粒的填料。Supelco 為製備應用提供三個主要產品線，總結於 表 1。
表 1.用於制劑應用的 Supelco HPLC 產品線摘要
儘管 80% 的分析 HPLC 分離是在反相矽膠相上進行，但大部分的小分子製備色譜分離是在正相矽膠相上進行。正相方法通常是第一選擇，因為：
- 相較於移除反相色譜法中使用的水溶液，移除常相中通常使用的有機溶劑更容易，也更符合成本效益 。
- 更容易從正相 TLC 轉移方法
- 正相的裸硅成本通常低於反相的 C18 相成本
Preparative HPLC Scale-Up
分析條件通常在 25 cm x 4.6 mm 內徑、5 微米顆粒的色譜柱上開發。如果解析度過高，則應考慮使用 10 cm x 4.6 mm 內徑的色譜柱。色譜條件最佳化後，建議進行分析尺寸的負載研究。此時，使用兩個簡單的公式即可快速可靠地從分析工作成功擴展至制備工作。公式顯示於 表 2。
表 2.從分析到製備應用的擴展公式
Ascentis 適用於小分子純化
Ascentis HPLC 產品線的多項功能使其成為小分子 HPLC 純化的理想平台。
在 圖 1 中顯示的是一個上載實驗的結果。所使用的分析物是奎尼丁和二氫奎尼丁，這兩種密切相關的化合物是 Ascentis 可用於制備分離的典型類型。
圖 1.高裝載能力 (581358-U)
本研究使用內徑 15 cm x 21.2 mm、裝有 10 微米顆粒的色譜柱。以 C18 作為固定相，在反相模式下進行分離。高比表面積的 Ascentis 色譜柱為此小分子應用提供了最大的負載能力。
圖 2.CHIROBIOTIC CSP 粒子尺寸的可擴展性
CHIROBIOTIC用於制備應用的另一個優點是，可以利用流動相的彈性來優化樣品的溶解度。圖3 顯示了沙利度胺在CHIROBIOTIC V上的分析和制備分離。然而，由於沙利度胺在純甲醇中的溶解度很低，因此在流動相中加入 20% 的二噁烷可將溶解度提高三倍，同時仍能達到必要的分離效果。
圖 3.製備分析規模中的樣品溶解度考慮因素
Discovery BIO 用於多肽和蛋白質純化
Discovery BIO HPLC 產品系列具有多項特點，使其成為多肽和蛋白質純化的理想平台。
反相層析常用於寡核苷酸和多肽的最後研磨步驟，是從分析純化擴展到制備純化的理想選擇。雖然反相層析可用於蛋白質純化，但如果需要恢復活性或正確的三級結構，通常不建議使用反相層析，因為許多蛋白質暴露於反相溶劑時會變性。Discovery BIO HPLC 色譜柱備有三種不同的疏水性相（C18、C8 和 C5）以及三種不同的粒度（3、5 和 10 微米）。
圖 4 Figure 4 所示的是一種多肽混合物在所有三種可用粒度上的分離情況。在所有三種顆粒上都獲得了相同的選擇性，使得擴展非常容易且可預測。雖然在本研究中沒有識別到峰值，但多肽混合物中包含 緩激肽、緩激肽片段 1-5、物質 P、[Arg8]-血管加壓素、促黃體激素釋放激素、轟蛋白、亮氨酸腦啡肽、蛋氨酸腦啡肽和催產素。
圖 4...Discovery BIO 寬孔 C18 (567205-U< /a>(568222-U) 上從分析到製備的匹配選擇性/a>)(568222-U)(567208-U)
結論
我們提供完整的 HPLC 純化產品系列，適用於小分子、手性和肽/蛋白質分離。除了 HPLC 純化方法之外，我們也提供其他純化產品，例如 Flash、散裝矽膠、TLC、玻璃柱和溶劑。
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