Ascentis^® Express RP-Amide HPLC 色譜柱

結合嵌入式極性基團固定相與 Fused-Core^® 顆粒

Ascentis Express RP-Amide HPLC 色譜柱是 Supelco HPLC 產品線的最新產品。Ascentis Express RP-Amide 結合了嵌入式極性基團 (EPG) 固定相與 Fused-Core 顆粒，為 HPLC 色譜師提供了許多有用的優點。相位技術的優點可歸納為：

RP-Amide的優點

• 替代C18的反相選擇性
  
• 改善了碱的峰形
  

Ascentis Express C8 和 C18 提供經典的反相選擇性，而 RP-Amide 相則提供另一種選擇性。Supelco 於 1988 年首次商業化推出 EPG 相。當時，傳統的 C18 和 C8 鍵合相持續受到基本分析物尾端因子過大的困擾。EPG 相可改善基本分析物的峰形。早期的 EPG 相基于两步键合过程（图 1）。第一步是將氨基丙基矽烷鍵合到裸露的矽表面，形成具有胺功能的表面。第二步，棕櫚酰氯與胺反應生成長鏈酰胺。在此過程中，並非所有的胺都會被轉換，因此會留下一個混合系統。

下一代相，包括 Ascentis Express RP-Amide，是使用一步法製程生產的（圖 2）。在單步製程中，由於酰胺是作為一個完整的單元引入，因此不會出現游離氨基配體。這種一步接合製程可產生極佳的批次間重現性。有趣的是，市面上並非所有的 EPG 相都使用現代的一步接合方法。

圖 1. 適用於 EPG 醯胺相的早期世代兩步接合製程

圖 2. 用於 EPG 酰胺相的下一代一步鍵合製程

改善碱性化合物的峰形

如前所述，Ascentis Express RP-Amide 相减少了硅烷醇与碱性分析物的相互作用，从而改善了峰形。

质子化（带电）的碱通过离子交换与带电的硅烷醇相互作用，形成尾峰。在 Ascentis Express RP-Amide 和 C18 色谱柱上分析了三环类抗抑郁药的测试混合物，流动相 pH 为 7（图 3）。如 圖3所示，對於這些困難的測試探針，RP-Amide比C18能產生更多對稱的峰。多塞平、丙咪嗪和阿米替林的對稱性數據總結於 圖 4 中。

列：	如圖所示；10 cm x 4.6 mm 內徑。
移動相:	35:65，14 mM 磷酸銨水溶液， pH = 7 ： 甲醇
流速：	1.5 mL/min.
temp.:	254 nm
注射：	0.5 μL

圖 3. 在 Ascentis Express RP-Amide 和傳統 C18 上分離三環抗憂鬱劑

圖 4. Ascentis Express RP-Amide 和傳統 C18 上難處理碱基的不對稱因子

Alternative Selectivity

Ascentis Express RP-Amide 為極性化合物提供更高的選擇性，特別是那些可作為氫鍵供體的化合物。與中性、非極性分析物相比，酚、羧酸、胺以及少量醇類在 RP-Amide 相上顯示出更高的保留率。圖 5 是氫鍵機制威力的範例。兒茶酚和間苯二酚的酚類特性提供了一個很好的測試，證明 RP-Amide 相的選擇性增強。RP-Amide 相對於這些相關化合物顯示出完整的基線解析度，而 C18 相對於酚類的保留、解析度和選擇性都有所降低。在比較 Ascentis Express RP-Amide 與 Waters™ BEH Shield RP18（一種具競爭力的 EPG 相）時，兩者的選擇性非常相似。此例中的差異在於 Ascentis Express RP-Amide 的背壓只有 1.7 μm 色譜柱的一半。

RP-Amide 和 C18 之間的選擇性差異可以成為方法開發中的有用工具。

RP-Amide 與 C18 色譜柱的選擇性差異可作為方法開發中的有用工具。在許多情況下，當 C18 色譜相上的色譜峰共同分離時，可替代 RP-Amide 色譜柱，在不改變流動相的情況下實現分離。

柱：	如圖所示；10 cm x 2.1 mm 內徑。
移動相 A：	20 mM 磷酸，pH 2（未調整）
移動相 B：	水
移動相C：	acetonitrile
mobile phase ratios:	A:B:C=75:5:20
流速：	0。3 mL/min.
temp.:	270 nm
注射：	1 μL
樣品	50 mg/L ea.於 20 mM 磷酸中

圖 5. 在 Ascentis Express RP-Amide & C18 和 Waters BEH Shield RP18、1.7 μm 上分離酚類化合物

水相相容反相柱

Ascentis Express RP-Amide 可在 100% 水相流動相中提供穩定且可重複的分析物保留。眾所周知，許多 C18 相在高水相的流動相條件下會發生塌相，導致保留損失。圖 6 所示的是在 100% 水相條件下分析的有機酸混合物。所有測試探針都具有極佳的選擇性和峰形，即使是眾所周知難以分析的檸檬酸也不例外。

列：	Ascentis Express RP-Amide，10 cm x 2.1 mm 內徑。
移動相:	0.1% TFA (v/v) in water
flow rate:	0.3 mL/min.
temp.:	攝氏35度
Det.:	210奈米
注射：	1微升
樣品	在流動相中；酒石酸，2 g/L；乳酸，檸檬酸，4 g/L；丙烯酸，0.5 g/L；富馬酸，0.2 g/L

圖 6. 在 100% 水溶液條件下分離小分子有機酸

結論

Ascentis Express RP-Amide 融合了現代的相位技術和創新的微粒技術。Fused-Core 粒子在速度、解析度、靈敏度和堅固性方面都有優勢。一步式 RP-Amide 鍵合化學技術可提供選擇性、水穩定性及改善峰形等優點。