小分子 HPLC

小分子分析

小分子是指低分子量（通常小於 900 道尔顿）的化合物。一些常見的小分子例子包括胺基酸、脂質、糖、脂肪酸、生物鹼等。

有不同的方法可用於分離小分子，包括 High Performance liquid chromatography (HPLC), liquid chromatography (LC), gas chromatography (GC)、thin-layer chromatography (TLC) 及 capillary electrophoresis (CE)。此外，鑑定它們的選項包括核磁共振光譜法 (NMR) 或質譜法 (MS)。液相色譜-質譜聯用技術(LC-MS)是近年來鑑定小分子化合物的關鍵技術。

在高效液相色譜(HPLC)、超高效液相色譜(UHPLC)或液相色譜-質譜(LC-MS)分析小分子化合物時，能否獲得最佳結果取決於是否選擇了最合適的固定相和流動相條件。分析物的化學性質是選擇最適合的色譜柱化學性質的關鍵。其他方面如速度、樣品基礎和化合物數量則決定了最適合的固定相基礎材料。

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小分子的 HPLC

小分子的 HPLC 分析最常在反相分離模式下進行。對於極性化合物的分離，親水作用色譜 (HILIC) 和正相色譜也很適合，其中 HILIC 是首選的方法。對於離子化合物的分離，可採用離子交換分離模式，對於無機負離子或陽離子，也可採用離子色譜法。

HPLC色譜柱由全多孔矽石顆粒、表面多孔矽石顆粒、聚合物顆粒填料組成，或由 monolithic silica 棒作為固定相。此外，還使用氧化鋁、氧化鋯微粒和碳微粒。用於小分子分離的固定相材料的典型孔徑在 60 Å - 160 Å 之間。對於 HPLC，固定相的典型粒徑範圍為 3 µm 至 5 µm，對於 UHPLC，則使用較小的粒徑，通常為 2 µm 或以下。固定相上可附加不同的色譜柱選擇性 (修飾)。C18 烷基鏈是反相 (RP) 色譜中最常用的柱化學物。然而，其他修飾，如 C30、C8、Phenyl、Pentaflourophenyl 和各種更極性的修飾，以及具有離子交換或手性特性的修飾，幾乎可以分離所有溶於液體的化合物。RP-HPLC 的流動相通常由水緩衝液或水與乙腈或甲醇等水溶性有機溶劑組成。

HPLC 樣品製備

複雜且富含基質的樣品，如食品、飲料、化妝品、生物樣品和富含基質的藥品配方（如膏霜、糖漿），需要高效的樣品製備方案來去除不需要的成分，並選擇性地萃取所需的分析物質。如果固定相的粒度非常小，就像超高效液相色譜（UHPLC）中使用的 2 µm 或以下的微粒，這一點就非常重要。常見的樣品製備方法有液體-液體萃取、固相萃取 (SPE)，對於生物樣品而言，過濾旁邊的蛋白質沉澱也很重要。除了目標化合物的選擇性洗脫和預濃縮之外，樣品製備的主要目的是保護 HPLC 固定相不受樣品基質的阻塞。HPLC 柱基於 monolithic silica可以在很大程度上耐受基質，而且所需的樣品製備比顆粒狀色譜柱少得多。