用於卓越螢光成像的 Atto 染料

活化熒光染料常用於標記蛋白質、核酸和其他生物分子，以用於生命科學應用，包括熒光顯微鏡、流式細胞計、熒光 原位 雜交 (FISH)、受體結合檢測和酶檢測。Atto 染料是一系列能滿足現代螢光技術關鍵需求的螢光染料：

• 穩定性 - Atto 655 和 Atto 647N 具有光穩定性和高抗臭氧降解性，是微陣列應用的理想選擇。請參閱相關文章 "Analyzing Properties of Fluorescent Dyes used for Labeling DNA in Microarray Experiments"。
• 長信號壽命 - 信號衰減時間為 0.6-4.1 毫微秒，允許進行時間門研究，以減少自發光背景和散射。
• 減少背景 -幾種 Atto 染料的激發波長大於 600 nm，可減少來自樣品、瑞利散射和拉曼散射的背景螢光。
• 選擇性 - Atto 染料具有強大的螢光信號，涵蓋可見光和近紅外線發射波長。

Atto染料的長信號壽命

Atto染料在水溶液中的螢光信號壽命（0.6-4.1 ns）比碳青染料或大多數細胞和生物大分子固有的自發螢光都要長。使用脈衝雷射激發與時間門控檢測系統可以量測 Atto 染料的訊號，以減少較短生命期螢光體、背景自發螢光、瑞利與拉曼光散射的干擾，進而提高整體靈敏度。

長激發波長可降低背景

研究顯示，635 nm 的二極體雷射激發和吸紅螢光染料可充分降低生物樣本的自發螢光，因此可在人類血清樣本中檢測到個別抗原和抗體分子。^1,2 當處理活細胞時，紅色光譜區的激發也能減少細胞損傷。³

許多 Atto 染料 (Atto 590 及以上) 可以使用大於 600 nm 的波長進行激發。使用長波長活化的 Atto 染料，再搭配適當的激發波長，可減少因樣品、溶劑、玻璃或聚合物支撐而產生的自發螢光，並提高生物分析和成像技術的整體靈敏度。使用較長波長的激發光源也可大幅降低瑞利散射與拉曼散射所造成的背景螢光。

發射波長範圍從 479 到 764 nm，適用於螢光多重檢測

Atto染料具有強大的螢光信號，大多數具有摩爾吸收值>100,000和低激發/發射重疊，使得Atto染料成為使用可見光和近紅外線發射波長的多重技術的理想選擇。

Atto染料的激發信號最大值範圍從390 nm到740 nm，並且具有良好的斯托克斯位移分離能力，適合與任何常見的激發光源搭配使用。

使用Atto染料進行螢光多重檢測

Atto染料可用於結合探針和生物分子，進行多重應用。選擇兩種具有分離發射訊號的 Atto 染料可支援單一實驗中的多重激發和測量結果。

Fluorescent Multiplex Detection using Antibody Atto Dye Conjugates

。

使用兩種一抗和兩種抗IgG-Atto染料結合物進行蛋白1和蛋白2的免疫印圖檢測。使用 FLA-3000 Fuji® 雷射掃描器依序進行成像，先以 532 奈米的激發波長搭配 580 奈米的發射濾光片，再以 633 奈米的激發波長搭配 675 奈米的發射濾光片。使用軟體工具完成影像疊加。

常見螢光團的替代品

由於可供选择的 Atto 染料種類繁多，因此可使用任何常見的激發光源，而且 Atto 染料可取代生命科學中常用的其他螢光染料。

Fluorophone	建議的Atto染料替代品
Alexa Fluor 488	Atto 488
FITC	Atto 488
FAM™	Atto 488
JOE™	Atto 520
TET™	Atto 520
Alexa Fluor 532	Atto 532
HEX™	Atto 532, Atto Rho6G
TAMRA™	Atto 550
Cy3	Atto 550
Cy3.5	Atto 565
ROX™	Atto 565, Atto Rho11
Alexa Fluor 594	Atto 590, Atto 594
Texas Red®<	Atto 590
Alexa Fluor 633	Atto 633, Atto Rho14
Cy5	Atto647, Atto647N, Atto 655
Alexa Fluor 647	Atto 647, Atto647N, Atto655
Cy5.5	Atto 680,
Cy5.a href="/product/SIGMA/30674">Atto700

光源	主線 (nm)	推薦的Atto染料
汞弧燈	365、405、436、546	Atto390、Atto 425、Atto 465、Atto 550、Atto 565
汞弧燈	577	Atto 590, Atto Rho101, Atto 594; Atto Rho13, Atto 610, Atto 611x
氙弧燈	連續和峰值 >800 nm	Atto 610, Atto 620, Atto 647, Atto 647N, Atto 655, Atto 680
鹵素燈	紫外線和紫光發射較少；較長波長的強度較高	Atto 610、Atto 620、Atto 647、Atto 647N、Atto 655、Atto 680
氬離子雷射	488, 514	Atto 488, Atto 520, Atto 532, Atto 550
氬氪雷射	488、514、647、676	Atto 520、Atto 647、Atto 647N、Atto 655、Atto 680<
氪雷射	647,676	Atto 647, Atto 647N , Atto 655, Atto Oxa12, Atto 665, Atto 680, Atto 700, Atto 725, Atto 740< /td>
氪雷射	647,676	氪雷射He-Ne 雷射	633	Atto Rho14, Atto 633, Atto 647, Atto 647N
Nd-NAG 雷射	532	Atto 532、Atto Rho6G、Atto 550、Atto 565、Atto Rho11、Atto Rho12<
一般二極體雷射	635, 650, 670	Atto 633, Atto 647, Atto 647N, Atto 655, Atto 680

活性 Atto 染料和共結物

Atto 染料由於強吸光度和高量子產率而產生強烈的螢光信號。染料有以下格式：

• 游離酸 染料，用於所有常規染色應用
• NHS-酯 用於常規結合協議
• 馬來酰亞胺 用於與含硫醇基團偶合，例如半胱氨酸殘基和在自動化過程中添加的硫醇 (-SH) 標籤。SH）標籤在自動合成過程中添加
• 結合 到生物素、鏈球蛋白和抗體

Atto 655、Atto 680 和 Atto 700 是通過染料和淬滅劑之間的直接接觸，並使用電子轉移過程被鸟苷、色氨酸和相關化合物淬滅的。蛋白質中色氨酸殘基對染料的螢光淬滅作用已被用來區分未結合（非螢光）蛋白質與蛋白質-抗體（螢光）之間的相互作用。

	λabs	ε max	λem	ηem	τem	型錄編號
Dye	nm		nm	%	游離酸	NHS酯	馬來亞胺	疊氮化物	胺	生物素
390	24,000	479	90	3.8	89313	89204<	89740	68321
Atto 425	436	45,000	484	90	3.5	56749	16805	49349	78948<			28616
Atto 430LS	433	32,000	547	65	4.0	06714	56387	41882
Atto 465	453	75,000	508	55	2.2	50712	53404	55607
阿托488	501	90,000	523	80	3.2	41051	41698	28562	72709	74417	74402	30574<
Atto 490LS	496	40,000	661	30	2.6	06715	78362<	78363	93688
Atto 495	495	80,000	527	45	2.4	16951	00379	41022
阿托514	511	115,000	533	85	3.0	52595	67455	81062	44311	93728	80027	00713<
Atto 520	516	110,000	538	90	3.8	70706	77810	16590	61911			01632
Atto 532	532	115,000	553	90	3.8	06699	88793	68499	；
Atto Rho6G	535	115,000	560	90	4.1	88821	93516	87785				94169
Atto 540Q<	542	105,000				40592	61683	62453
阿托550	554	120,000	576	80	3.2	42424	92835	30730	41986	39271		28923
Atto 565	563	120,000	592	90	3.4	75784	72464	18507	43069			92637
Atto Rho3B	565	120,000	592	50	1.5	93685	28743	<76531				07876
Atto Rho11	571	120,000	595	80	4.0	56611	89101	<51431				19096
Atto Rho12	576	120,000	601	80	4.0	44432	68761	72763				91254
Atto Thio12	579	110,000	609	15	2.0	56963		94079					87784
Atto Rho101	586	120,000	610	80	4.2	77085	50492	73522		&。nbsp;		94379
Atto 580Q	586	110,000					03722	44756	68152		03722	44756
Atto 590<	594	120,000	624	80	3.7	70425	79636	39887				43208
601	120,000	627	85	3.5	08637	08741	08717	72998	61583		03927<
Atto Rho13	600	120,000	625	80	3.9	16973	68538	<44535			76141
615	150,000	634	70	3.3	78493	93259	41061			41061		43292
Atto 612Q	615	115,000				04327	53988	50332
Atto 620	619	120,000	643	50	2.9	92716	67351	49728				72978
Atto Rho14	625	140,000	646	80	3.7	59746	61909	14397				76140
Atto 633	629	130,000	657	64	3.2	18620	01464<	n/a	68517	73245	68652
Atto 647	645	120,000	669	20	2.3	97875	07376	41784
阿托647N	644	150,000	669	65	3.4	04507	18373	05316	91000	95349	73353	93606
Atto 655	663	125,000	684	30	1.9	93711	76245	80661	11774	14918	73948	06966
Atto Oxa12	663<	125,000	684	30	1.8	92606	55785	01971				61938
Atto 665	663	160,000	684	60	2.9	16851	04022	01407				01376
Atto 680	680	125,000	700	30	1.8	94875	75999	04971				55819
Atto 700	700	120,000	719	25	1.5	30674	16986	50611	59825	19571		73911
Atto 725	729	120,000	752	10	0.5	47156	93725	90979				69616
Atto 740	740	120,000	764	10	0.6	91394	59808	77071				50842
Atto MB2	658	100,000				75118	73499	51797					02934

Convenient Atto Dye conjugates

提供廣泛的 Atto Dye conjugates 和試劑盒，包括：

• 蛋白質標籤試劑盒
  • Atto 488 是螢光素及 Alexa Fluor 488 的優異替代品，所製成的結合物具有更高的光穩定性及更明亮的螢光。
  • Atto550 是羅丹明染料、Cy3 和 Alexa Fluor 550 的替代品，具有更強的亮度和更高的光穩定性。
  • Atto594 是 Alexa Fluor 594 和 Texas Red 的替代品。
  • Atto647N 是一種非凡的高螢光染料，Atto 655 是 Cy5 和 Alexa Fluor 647 的替代品。
  • Atto633 是Alexa Fluor 633的替代品。

• Lectins 用於碳水化合物結合研究。

• 一抗和二抗，用於直接和間接 ELISA、免疫印圖、免疫組織化學和其他蛋白質鑒定應用。

• 生物素和鏈霉親和素用於阿維丁/鏈霉親和素/生物素結合應用，包括ELISA、免疫組織化學、原位雜交和流式細胞計。

• NTA Nickel conjugates for direct detection of polyhistidine-tagged recombinant proteins.

。

真菌感染的人體皮膚組織切片（石蠟固定）螢光顯微鏡檢查。病原真菌的目標碳水化合物 chitotriose 特異性結合來自 Phytolacca americana Atto 488 conjugate 的凝集素（綠色）。核用 DAPI（藍色）對照。圖片由伯恩 Inselspital 的 J. Zbären 提供。

His-tagged p38 MAPK 蛋白 (500 ng - 25 ng) 在 4-20% Tris-glycine SDS-PAGE 凝膠上分離。固定和洗滌後，凝膠在黑暗中與 Ni-NTA-Atto 647N (1:1000) 共孵育。凝膠洗淨後使用 FLA-3000 Fuji^® 雷射掃描器成像，Ni-NTA-Atto 647N 使用 633 nm 激發和 675 nm 發射濾光片 (λex 647 nm, λem 669 nm)。使用螢光成像觀察 His-tagged p38-MAPK 的 50 ng 帶。

鉑金染料標示的磷脂

磷脂是生物膜的主要構成物質。研究生物膜（如活細胞的細胞內膜、等離子體膜）已經成為一個主要的研究領域。我們提供一系列的螢光標示磷脂。所選系列染料的光學特性允許應用所有常用的激發和發射濾光器設定。我們提供多種以甘油為基礎的磷脂，甘油帶有一個或兩個脂肪酸（親脂基）和一個磷酸酯單酯殘基（親水基），例如 1,2-二almitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DPPE)、1,2-dioleoylsn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE)、1-palmitoyl-2-hydroxy-snglycero-3-phosphoethanolamine (PPE) 及 1,2-dimyristoyl-sn-glycero- 3-phosphoethanolamine (DMPE)。螢光團在磷脂的親水頭基上共價連結。

Product No.	說明
44039	Atto 488 DPPE
51016<	鉑金550 DPPE
40924	阿托 594 DPPE
528
52816	Atto 633 DPPE
05152	阿托647N DPPE<
40692	阿托 532 DOPE
42208	Atto 550 DOPE
Atto 550 DOPEAtto 550 DOPE
05676	Atto594 DOPE
42247	Atto 647N DOPE
54368	阿托 488 DMPE
Atto 550 DMPE
72567	Atto 594 DMPE
55284	阿托 633 DMPE
89522	Atto 647 DMPE
51028	阿托 488 PPE
94092	Atto 532 PPE
78998
7899878998	Atto 550 PPE
19504	阿托594 PPE
56530	Atto 633 PPE	Atto 633 PPEAtto 633 PPE
91327	Atto 647N PPE

材料

抱歉，發生意外錯誤。

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參考資料

1. Neuweiler H, Schulz A, Vaiana AC, Smith JC, Kaul S, Wolfrum J, Sauer M. 2002. Detection of Individual p53-Autoantibodies by Using Quenched Peptide-Based Molecular Probes. Angew. Chem. Int. Ed.. 41(24):4769-4773. https://doi.org/10.1002/anie.200290044

2. Sauer M, Zander C, Müller R, Ullrich B, Drexhage K, Kaul S, Wolfrum J. 1997. Detection and identification of individual antigen molecules in human serum with pulsed semiconductor lasers. Applied Physics B: Lasers and Optics. 65(3):427-431. https://doi.org/10.1007/s003400050292

3. Sauer M, Zander C, Müller R, Ullrich B, Drexhage K, Kaul S, Wolfrum J. 1997. Detection and identification of individual antigen molecules in human serum with pulsed semiconductor lasers. Applied Physics B: Lasers and Optics. 65(3):427-431. https://doi.org/10.1007/s003400050292

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6. Widengren J, Schwille P. 2000. Characterization of Photoinduced Isomerization and Back-Isomerization of the Cyanine Dye Cy5 by Fluorescence Correlation Spectroscopy. J. Phys. Chem. A. 104(27):6416-6428. https://doi.org/10.1021/jp000059s