使用藍色 Sepharose^® 層析介質去除白蛋白

Blue Sepharose^® 6 Fast Flow或預包裝的HiTrap™ Blue HP 1 mL和5 mL色譜柱（圖4.2）可用於在其他純化步驟之前或之後去除白蛋白（表4.1）。白蛋白通過靜電和/或疏水作用與芳香族陰離子配體 Cibacron Blue F3G-A 和 Sepharose^® 進行非特異性結合。

圖 4.2. 使用 Blue Sepharose® High Performance 預先包裝，HiTrap™ Blue HP 色譜柱可透過非相容性色譜快速、簡單地去除白蛋白。

使用 HiTrap™ Blue HP 1 mL 或 5 mL 色譜柱來去除哺乳動物 表達系統中的宿主白蛋白，或者當已知樣品中含有大量白蛋白，可能掩蓋其他蛋白質峰的紫外吸收時。

如果免疫球蛋白或其他目標分子具有與白蛋白相似的疏水性，請勿使用 Blue Sepharose^® 色譜介質。

表 4.1 使用 Blue Sepharose® 色層析介質進行非相容性色層析去除白蛋白的選項。

	容量/毫升培養基1	備註
HiTrap™藍色HP	HSA20毫克	去除白蛋白 預裝1毫升和5毫升色譜柱
HSA>18毫克	以懸浮液形式提供，可直接進行柱包裝
1 不同蛋白的結合能力不同

圖 4.3. 使用 HiTrap™ Blue HP 1 mL 色譜柱有效去除人體血漿中的白蛋白。

 

使用 HiTrap™ Blue HP 色谱柱去除白蛋白的程序

缓冲液制备

结合缓冲液：20 mM 磷酸钠，pH 7.0, or 50 mM potassium hydrogen phosphate (KH₂PO₄), pH 7.0

洗脱缓冲液：0.02 M 磷酸鈉，2 M 氯化鈉，pH 7.0，或 0.05 M 磷酸氫鉀，1.5 M 氯化鉀，pH 7.0

去除白蛋白

1. 將蒸餾水注入注射器或泵管。取下瓶塞，將色谱柱與注射器（使用隨附的接頭）、實驗室泵或色譜系統 「滴對滴 」連接，以避免將空氣引入系統。
2. 移除色谱柱出口的卡扣端。
3. 用 3 至 5 柱体积的蒸馏水冲洗乙醇。
4. 用至少 5 柱体积的结合缓冲液平衡色谱柱。建議流速為 1 mL/min (1 mL 色譜柱) 和 5 mL/min (5 mL 色譜柱)。
5. 使用與 Luer 接頭連接的注射器或泵將樣品注入色譜柱。
6. 使用結合緩衝液清洗（通常至少 5 至 10 柱容量），直到吸光度達到穩定基線或試劑中無物殘留。保持 1 至 2 mL/min 的流速（1 mL 柱）和 5 至 10 mL/min 的流速（5 mL 柱）進行洗滌。對於一步式洗脫，通常 5 個柱容量就足夠了。對於線性梯度洗脫，10 到 20 個柱容量通常就足夠了。保持 1 至 2 mL/min 的流速（1 mL 色谱柱）和 5 至 10 mL/min 的流速（5 mL 色谱柱）进行洗脱。
7. 洗脱后，用 3 至 5 柱体积的结合缓冲液清洗色谱柱，使其再生。

* 使用 1 mL HiTrap™ 色谱柱的注射器时，1 mL/min 相当于约 30 滴/分钟；使用 5 mL HiTrap™ 色谱柱时，5 mL/min 相当于约 120 滴/分钟。

儲存

儲存於 2 °C 至 8 °C 的 20% 乙醇中。