X-tremeGENE™ HP DNA 轉染試劑協議

轉染前的細胞準備n

在轉染前約24小時， 平移細胞， 確保細胞處於最佳濃度（70-90 % 匯合）。

轉染前的步驟

1. 將 X-tremeGENE™ HP DNA 轉染試劑、DNA 和稀釋液（Opti:MEM^®I 還原血清培養基或無血清培養基）溫暖至 +15 °C 至 +25 °C，輕輕旋轉。
2. 將稀釋液置於無菌試管中。
3. 加入 質粒 DNA。
4. 在稀釋的 DNA 中加入 X-tremeGENE™ HP DNA 轉染試劑。
   
5. 在 +15 °C 至 +25 °C 下孵育 15 分鐘。
6. 以滴加的方式將轉染複合物滴加到細胞中。
7. 輕輕搖動或旋轉孔板或平皿，以確保在整個平板上均勻分佈。
8. 在測量蛋白質表達之前，孵育細胞 18 - 72 小時。

X-tremeGENE™ HP DNA 轉染試劑的容量和不同比例的 DNA 數量

	比率轉染試劑 ：DNA	最小轉染 複合容量	整個 96孔板的容量
	無血清培養基的最終容量為	100μL	500μL
1 ：1	X-tremeGENE™ HP DNA 轉染試劑 DNA	1 μLL 1 μg	5 μL 5 μg
2 ：1	X-tremeGENE™ HP DNA 轉染試劑 DNA	2 μLL 1 μg	10 μL 5 μg
3 ：1	X-tremeGENE™ HP DNA 轉染試劑 DNA	3 μL 1 μg	15 μL 5 μg

使用  X-tremeGENE™ DNA 轉染試劑成功轉染的提示 ；

1. 將 X-tremeGENE™ 9 DNA 轉染試劑存放於 +2 至 +8 °C，X-tremeGENE™ HP DNA 轉染試劑存放於 -15 至 -25 °C。
2. 將載有 X-tremeGENE™ DNA 轉染試劑的小瓶移至 +15 至 +25 °C，攪拌一秒鐘後取出所需用量。
3. 請勿等分 X-tremeGENE™ DNA 轉染試劑；將剩餘的轉染試劑儲存在原始玻璃瓶中。
4. 盡量減少未稀釋的轉染試劑與塑料表面的接觸。
5. 取出所需用量後，立即蓋緊玻璃瓶蓋：DNA 複合物用於轉染的最小量為 100 μL。低劑量下形成的複合物會顯著降低轉染效率。
6. 請勿使用聚苯乙烯製成的試管或微孔板來製備 X-tremeGENE™ DNA 轉染試劑：DNA 複合物：DNA 複合物的製備。當無法避免使用聚苯乙烯材料時，請務必直接將轉染試劑移入無血清培養基或還原血清培養基（不含任何血清）中。
7. 請勿使用矽化吸頭或試管。
8. 確定細胞在轉染時仍在活躍地生長。
9. 進行轉染時，加入適當的對照，包括：
   (1) 未轉染細胞
   (2) 單用轉染試劑的細胞
   (3) 單用 DNA 的細胞
10. 轉染試劑的最佳比例：DNA 的最佳比例，以及複合物的最佳總量，會因細胞品系、細胞密度、測試用的細胞生長狀態，以及所表達的基因而異

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材料

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