圖 1.成功共表達 eGFP 和 mKate2。單獨轉染 PC3.1eGFP (A) 和單獨轉染 pmKate2 (B) 的 HeLa 細胞,以及使用 X-tremeGENE HP Reagent 共同轉染兩個質粒的螢光圖像。eGFP 和 mKate2 的共表達也顯示於 X-tremeGENE 9 Reagent (D)。在圖 1E 中,X-tremeGENE HP 轉染試劑的轉染效率使用螢光細胞覆蓋面積與細胞覆蓋總面積的比率來計算。指示的質粒比例和試劑量是指 100 μL 的轉染複合物。
質粒的瞬間共轉染是一種常用於細胞蛋白質-蛋白質互作研究、轉錄因子研究以及使用 shRNA 編碼質粒進行基因敲除研究的方法。因此,共轉染對於廣泛的科學界來說是非常有用的。在本研究中,使用增強綠色螢光蛋白(eGFP)和紅色螢光蛋白(mKate2)兩種自發螢光報告基因,測試了 X-tremeGENE HP 和 X-tremeGENE 9 轉染試劑(Roche)的共轉染效率。
轉染和自動成像
HeLa Cells (ATCC) 以每 96 孔 1.2 x 105 cells/100 μL 的密度培養。細胞播種 24 小時後,用 PC3.1eGFP 和 pmKate2 質粒 (Evrogen) 轉染細胞。滴定了三種不同的 pmKate2/PC3.1eGFP 比例 (0.5 + 1.0, 0.5 + 0.5, 1.0 + 0.5 μg plasmid per 100 μL complex)。此外,還分別測試了四種不同用量的 X-tremeGENE HP 和 X-tremeGENE 9 轉染試劑的複合物形成(每 100 μL 複合物使用 1、2、3 或 4 μL 試劑)。轉染後 48 小時使用 Cellavista Analyzer 和 HOECHST 33342 染色法測量轉染效率。
結果
- 兩種質粒的轉染效率因質粒本身的不同比例和整個 DNA/轉染試劑的關係而異 (圖 1, A, B, 和 E)。
- X-tremeGENE HP 和 X-tremeGENE 9 轉染試劑都顯示出很高的共效率(圖 1,C 和 D)。
- 在測試的 HeLa 細胞中,X-tremeGENE HP 轉染試劑在所有比例下都顯示出更一致的轉染效率。
X-tremeGENE 是 Roche 的商標。所有其他產品名稱和商標屬於其各自所有者的財產。
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