Chymotrypsyna

E.C. 3.4.21.1

• Produkty
• Właściwości fizyczne
• Specyficzność i kinetyka 
• Inhibitory
• Substraty
• Rozpuszczalność i stabilność roztworu

Właściwości fizyczne

Masa cząsteczkowa: 25 kDa¹ (Bovine)
pI: 8.752 (Bydło)
Współczynnik ekstynkcji: E1%= 20,4 (280nm)

Chymotrypsyna jest wytwarzana w komórkach gruczołowych trzustki jako nieaktywny prekursor, chymotrypsynogen. α-Chymotrypsyna jest dominującą formą aktywnego enzymu wytwarzanego z jej zymogenu, chymotrypsynogenu A.

In vivo, szybkość hydrolizy zymogenu przez trypsynę i autolizę wytwarza różne ilości wariantów α, π, δ i γ.³ α-Chymotrypsyna jest proteazą serynową z rodziny peptydaz S1 składającą się z 241 reszt aminokwasowych. Cząsteczka ma trzy łańcuchy peptydowe: łańcuch A składający się z 13 reszt, łańcuch B składający się ze 131 reszt i łańcuch C składający się z 97 reszt.⁴

Rysunek 1. Właściwości fizyczne

Specyficzność i kinetyka

α-Chymotrypsyna z trzustki bydlęcej selektywnie katalizuje hydrolizę wiązań peptydowych po C-końcowej stronie tyrozyny, fenyloalaniny, tryptofanu i leucyny. Wtórna hydroliza zachodzi również po C-końcowej stronie metioniny, izoleucyny, seryny, treoniny, waliny, histydyny, glicyny i alaniny.¹

Optymalne pH: 7,8⁸
(pH 6,0: około 35% maksymalnej aktywności, pH 9,3: 40% maksymalnej aktywności)⁸

Optymalna temperatura: 50 °C⁹

Inhibitory

Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd

Network error: Failed to fetch

α-Chymotrypsyna jest również całkowicie hamowana przez 10 mM Cu²⁺ i Hg²⁺.¹

Podłoża

Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd

Network error: Failed to fetch

.Rozpuszczalność i stabilność roztworu

Chymotrypsyna jest zazwyczaj rozpuszczalna w 1 mM HCl (2 mg/ml), dając klarowny roztwór.2, podzielić na porcje i przechowywać w temperaturze -20 °C. Autoliza nastąpi w przypadku przechowywania w wyższym pH. Obecność wapnia jest również stabilizatorem.⁵ Zamrożone podwielokrotności są stabilne przez około 1 tydzień. Chymotrypsyna jest zarówno aktywowana, jak i stabilizowana przez Ca²⁺. Enzym jest aktywny w obecności 0,1% SDS i 2 M chlorowodorku guanidyny.

Zastosowania

Do trawienia peptydów należy stosować stosunek (w/w) około 1:60 dla chymotrypsyny:peptyd. Przeprowadzać trawienie peptydów w 100 mM Tris HCl zawierającym 10 mM CaCl₂, pH 7,8, w temperaturze 30 °C. Samotrawienie może wystąpić, jeśli stosowane są temperatury powyżej 37 °C. Znany peptyd, taki jak melityna, powinien być stosowany jako kontrola we wszystkich eksperymentach. Inkubować do 24 godzin w temperaturze 37-40 °C. Trawienie można zakończyć dostosowując pH do 2.0.^6,7

Produkty

Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd

Network error: Failed to fetch

Referencje

1. Burrell MM. Enzymes of Molecular Biology. https://doi.org/10.1385/0896032345

2. Ui N. 1971. Isoelectric points and conformation of proteins. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure. 229(3):582-589. https://doi.org/10.1016/0005-2795(71)90273-x

3. Desnuelle P, Boyer P. 1960. The Structure of Chymotrypsin. The Enzymes. 3185-191.

4. HESS G. 1971. The Enzymes. 3. New York: Academic Press.

5. Burrell MM. Enzymes of Molecular Biology. https://doi.org/10.1385/0896032345

6. Spackman D, Stein W, Moore S. 1960. The disulfide bonds of ribonuclease.. Journal of Biological Chemistry. 3(255):648-659.

7. Kamp RM. 1986. Separation of Peptides.8-20. https://doi.org/10.1007/978-3-642-71534-1_2

8. Ásgeirsson B, Bjarnason JB. 1991. Structural and kinetic properties of chymotrypsin from atlantic cod (Gadus morhua). Comparison with bovine chymotrypsin. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Comparative Biochemistry. 99(2):327-335. https://doi.org/10.1016/0305-0491(91)90050-n

9. Fernández M, Villalonga MdL, Fragoso A, Cao R, Villalonga R. 2002. Stabilization of ?-chymotrypsin by modification with ?-cyclodextrin derivatives. Biotechnol. Appl. Biochem.. 36(3):235. https://doi.org/10.1042/ba20020056