Mapy wektorowe
Zespół badawczo-rozwojowy MISSION, we współpracy z naukowcami RNAi Consortium (TRC), wygenerował serię wektorów, aby umożliwić pomyślną realizację eksperymentów RNAi. Wektor bazowy pLKO.1-puro został opracowany1 w Broad Institute w ramach TRC. Naszym wkładem w TRC jest zróżnicowany zestaw wektorów do krytycznych eksperymentów kontrolnych, a także wektory do niestandardowej produkcji shRNA. Ta strona zawiera informacje dotyczące tych wektorów.
sekwencja puro (bez shRNA).puro (bez wstawki shRNA)
wektor TRC1.5: pLKO.1-puro
wektory kontrolne TRC1.5 Wektory kontrolne
TRC1.5 Alternate Vector Backbones
Wektor TRC2: TRC2-pLKO-puro
Inducible shRNA Vectors
wektory lentiwirusowe
Referencje
Wektor TRC1.5 Wektor: pLKO.1-puro
Klonony TRC1.5 są w dokładnie tym samym szkielecie wektorowym co klony TRC1
Funkcje wektora pLKO.1-puro pozwalają na przejściową lub stabilną transfekcję shRNA, a także produkcję cząstek lentiwirusowych.1 Stabilne wyciszanie genów jest wybierane przy użyciu selektywnego markera puromycyny, podczas gdy samodezaktywujące się niekompetentne replikacyjnie cząstki wirusowe mogą być wytwarzane w komórkach pakujących (HEK293T) poprzez współtransfekcję z kompatybilnymi plazmidami pakującymi.2,3 TRC1.5, dostępny wyłącznie w naszym portfolio, zawiera prawie 200 000 klonów, w tym ponad 49 000 zweryfikowanych klonów. Łączy w sobie całą zawartość TRC1 oraz dodatkowe 39 212 klonów ukierunkowanych na 2661 nowych genów ludzkich i 2395 genów myszy. W przeciwieństwie do systemów retrowirusowych opartych na adenowirusach lub mysich MMLV lub MSCV, cząsteczki oparte na lentiwirusach umożliwiają skuteczną infekcję i integrację określonego konstruktu shRNA w zróżnicowanych i nie dzielących się komórkach, takich jak neurony i komórki dendrytyczne, pokonując trudności związane z niską transfekcją i integracją podczas korzystania z tych linii komórkowych. W porównaniu do siRNA i innych systemów opartych na wektorach, pLKO.1-puro zapewnia rozwiązania dla długoterminowego knockdownu i obserwacji fenotypowej, transdukcji trudnych lub wrażliwych linii komórkowych (nie dzielących się komórek lub komórek pierwotnych) i jest ekonomicznym zasobem odnawialnym.
Z wstawką shRNA, długość plazmidu pLKO.1-puro wynosi 7086 bp, jak wskazano na poniższej mapie wektora. Bez wstawki shRNA, wektor pLKO.1-puro ma długość 7,052 bp. Dostarczony plik sekwencji to pusty wektor pLKO.1-puro (7,052 bp).
TRC1.5 Opis i funkcje wektora
TRC1.5 Alternatywne szkielety wektorowe
Oferujemy szereg alternatywnych szkieletów wektorowych w ramach naszej standardowej oferty shRNA. Dzięki naszemu konfigurowalnemu interfejsowi zamawiania MISSION shRNA, możliwe jest zamawianie TRC shRNA w tych szkieletach wektorowych bezpośrednio online na stronach szczegółów klonów dla plazmidowego DNA lub lentiwirusowych cząsteczek transdukcyjnych. W przypadku niestandardowych spinek do włosów, odwiedź naszą stronę klonowania niestandardowego, aby uzyskać szczegółowe informacje na temat zamawiania.
Oferujemy również kilka alternatywnych szkieletów wektorowych z białkami fluorescencyjnymi lub promotorem UbC. Konstrukty te są dostępne wyłącznie jako opcje niestandardowe. Odwiedź naszą stronę klonowania niestandardowego, aby uzyskać szczegółowe informacje na temat zamawiania.
wektor TRC2: Wektor TRC2-pLKO-puro i zastosowanie
Wektor TRC2-pLKO-puro umożliwia również przejściową lub stabilną transfekcję shRNA, a także produkcję cząstek lentiwirusowych. Jedyną zmianą między wektorem TRC1.5 a wektorem TRC2 jest dodanie WPRE (lub potranskrypcyjnego elementu regulacyjnego Woodchuck Hepatitis).4 Pozwala to na zwiększoną ekspresję transgenów dostarczanych przez lentiwirusy.5 Podobnie jak w przypadku TRC1.5, stabilne wyciszanie genów uzyskuje się za pomocą selektywnego markera puromycyny. Samoaktywujące się, niekompetentne replikacyjnie cząsteczki wirusowe mogą być wytwarzane w komórkach pakujących (HEK293T) poprzez współtransfekcję z kompatybilnymi plazmidami pakującymi. TRC2-pLKO-puro zapewnia rozwiązania dla stabilnego długoterminowego knockdownu i obserwacji fenotypowej, transdukcji trudnych lub wrażliwych linii komórkowych (nie dzielących się komórek lub komórek pierwotnych) oraz zwiększonej ekspresji transgenów.
Z wstawką shRNA, długość plazmidu TRC2-pLKO-puro wynosi 7518 bp, jak wskazano na poniższej mapie wektora. Bez wstawki shRNA, wektor TRC2-pLKO-puro ma długość 7,484 bp. Dostarczony plik sekwencji to pusty wektor TRC2-pLKO-puro (7,484 bp).
Sekwencja TRC2-pLKO-puro (bez wstawki shRNA)
Mapa wektora TRC2 (TRC2-pLKO-puro)
Uwaga: Obecnie nie są dostępne alternatywne szkielety wektorowe dla TRC2.
Indukowalne wektory shRNA
Wektor pLKO został przeprojektowany tak, aby zawierał LacI (represor) i zmodyfikowany ludzki promotor U6 shRNA z sekwencjami LacO (operator). Pod nieobecność IPTG (izopropylo-β-D-tio-galaktozydu), analogu laktozy, LacI wiąże się z LacO zapobiegając ekspresji shRNA. Gdy obecny jest IPTG, allosteryczny represor LacI zmienia konformację, uwalniając się ze zmodyfikowanego lacO ludzkiego promotora U6, a następnie umożliwia ekspresję shRNA.
Z dumą oferujemy dwa różne wektory indukowalne IPTG do badań. Preferowany wektor indukowalny, pLKO-puro-IPTG-3xLacO, zawiera trzy sekwencje operonu lac (dwie w promotorze U6 i jedną 3' promotora), zapewniając zarówno ścisłą regulację, jak i doskonałe wyciszanie genów. Natomiast pLKO-puro-IPTG-1xLacO wektor zawiera pojedynczą sekwencję operonu lac w promotorze U6, co pozwala na przewagę ekspresji shRNA, ale luźniejszą kontrolę promotora, gdy nie jest indukowany.
Referencje
Kontakt
W przypadku pytań dotyczących biblioteki, cen i ofert lub innych wątpliwości, prosimy o kontakt e-mailowy pod adresem: MISSIONRNAi@sial.com.
.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?