Analiza UHPLC parakwatu i dikwatu

William L. Maule III, Clint Corman, Michael Ye, Cory Muraco, Curtis Frantz

Merck, Bellefonte, PA

Parakwat i dikwat to dwa toksyczne herbicydy stosowane w celu zapobiegania rozwojowi inwazyjnych gatunków roślin. Ponieważ oba gatunki mają charakter polarny, mogą być trudne do rozdzielenia przy użyciu konwencjonalnej chromatografii z fazą odwróconą. Niniejsza aplikacja demonstruje zastosowanie kolumny Supel™ Carbon LC UHPLC do zatrzymywania i rozdzielania tych dwóch związków. Ponadto zbadano odtwarzalność między partiami przy użyciu dwóch kolumn zapakowanych z różnych partii fazy stacjonarnej.

Rysunek 1. Struktury chemiczne parakwatu i dikwatu.

Warunki eksperymentalne dla analizy Diquat/Paraquat

Tabela 1. Warunki eksperymentalne dla analizy Diquat/Paraquat

Kolumny	Supel™ Carbon LC, 10 cm x 2,1 mm I.D., 2,7 µm; Konkurent T, 10 cm x 2,1 mm I.D., 3,0 µm
Detekcja	UV: 290 nm
Fazy ruchome	[A] Woda (0.1% (v/v) DFA); [B] Acetonitryl (0.1% (v/v) DFA)
Gradient	Czas (min) %A %B 0 100 0 1 100 0 11 85 15 20 100 0
Mieszanina testowa	Diquat/Paraquat Mix, 100 µg/mL, woda (0.1% DFA)
Objętość iniekcji	2 µL
Prędkość przepływu	0.50 mL/min
Temperatura	Kolumna 55 oC; Autosampler 10 oC

Wyniki wydajności i porównanie

Rysunek 2. Analiza parakwatu i dikwatu na węglu Supel™ LC.

Tabela 2. Parametry retencji związków widoczne na rysunku 2.

Peak	Compound	Ret. Czas (min)
1	Diquat (100 µg/ml)	4.362
2	Paraquat (100 µg/mL)	7.295

Rysunek 3. Analiza Paraquatu i Diquatu na kolumnie konkurenta.

Tabela 3. Parametry retencji związków widoczne na rysunku 3.

Peak	Compound	Ret. Czas (min)
1	Diquat (100 µg/ml)	4.758
2	Paraquat (100 µg/mL)	7.848

Dodatkowa wydajność wykazująca powtarzalność każdej partii z kolumnami Supel™ Carbon LC

Warunki eksperymentalne

Tabela 4. Warunki chromatograficzne dla badania odtwarzalności z partii na partię

Kolumny	Supel™ Carbon LC, 5 cm x 3,0 mm I.D., 2,7 µm Konkurent T, 5 cm x 3,0 mm I.D., 3,0 µm
Detekcja	UV: 290 nm
Fazy ruchome	[A] Woda (0.1% (v/v) DFA); [B] Acetonitryl (0.1% (v/v) DFA)
Gradient	Czas (min) %A %B 0 100 0 1 100 0 11 85 15 20 100 0
Mieszanina testowa	Mieszanina Diquat/Paraquat, 100 µg/ml, woda (0.1% (v/v) DFA)
Objętość iniekcji	5 µL
Prędkość przepływu	1.0 mL/min
Temperatura	Kolumna:  55 °C Autosampler:  10 °C

Szczyt	Składnik	Czas powrotu (min)
1	Diquat (100 µg/mL)	3. Czas (min)
1	Diquat (100 µg/ml)	3.800
2	Paraquat (100 µg/mL)	6.709

Szczyt	Składnik	Czas powrotu (min)
1	Diquat (100 µg/mL)	3. Czas (min)
1	Diquat (100 µg/ml)	3.762
2	Paraquat (100 µg/mL)	6.660

Peak	Compound	Ret. Czas (min)
1	Diquat (100 µg/ml)	4.118
2	Paraquat (100 µg/mL)	6.517

Rysunek 4. Analiza parakwatu i dikwatu na dwóch kolumnach Supel™ Carbon LC i konkurencyjnej kolumnie węglowej. Należy zwrócić uwagę na wysoki stopień odtwarzalności między dwiema kolumnami Supel™ Carbon LC. Tabele pod każdym obrazem odpowiadają parametrom retencji związków.

Wnioski

W niniejszej aplikacji zademonstrowano zastosowanie kolumny węglowej Supel™ Carbon LC w celu zapewnienia podstawowej rozdzielczości i doskonałego kształtu piku do rozdzielania polarnych herbicydów - dikwatu i parakwatu. Unikalna i zastrzeżona procedura syntetyczna, węższy rozkład wielkości cząstek i mniej aktywna powierzchnia skutkują bardziej wydajną i powtarzalną separacją chromatograficzną w porównaniu z inną kolumną węglową od innego dostawcy. Kolumna węglowa Supel™ LC jest idealnym wyborem dla związków polarnych, które są trudne do zatrzymania przy użyciu typowych kolumn RP.