Stężenie białka i wymiana buforu
Stężenie białek i wymiana buforów są powszechnie stosowane w procesach oczyszczania białek i przeciwciał, bioprzetwarzania i analizy proteomicznej. Preparaty próbek roztworów wielkocząsteczkowych, takich jak białka, enzymy, przeciwciała i wirusy, często dają duże objętości rozcieńczonych białek i innych biomolekuł w buforach, które są niekompatybilne z dalszymi procesami lub wykrywaniem. Po ekstrakcji próbki, rozcieńczone białka często wymagają zatężenia i oczyszczenia przed analizą lub użyciem.
Stężenie białek
Istnieje kilka metod zatężania białek, w tym filtracja za pomocą porowatych filtrów membranowych, dializa w roztworach hiperosmotycznych oraz wytrącanie/solenie. Ultrafiltracja zapewnia wygodną metodę, która wykorzystuje półprzepuszczalne membrany do koncentracji białek pod ciśnieniem lub siłą odśrodkową przy minimalnej denaturacji, dezaktywacji i degradacji białek. Stosując tę technikę, nadmiar płynu przechodzi przez filtr, podczas gdy docelowe białko jest zatrzymywane, zwiększając stężenie białka poprzez zmniejszenie objętości próbki.
Wzbogacanie białek
W wzbogacaniu białek, określone grupy lub typy białek w próbce biologicznej są zagęszczane do dalszej analizy. Metody wzbogacania białek są stosowane do izolowania białek o niskiej liczebności i zmniejszania złożoności próbki. Wzbogacanie oddziela i koncentruje białka docelowe w celu poprawy dalszej analizy proteomicznej. Ultrafiltracja jest często stosowana we wzbogacaniu białek w celu oddzielenia klas białek na podstawie masy cząsteczkowej.
Wymiana buforu i odsalanie
Purynowane białka często muszą być przeniesione do odpowiedniego buforu w celu dalszej analizy. Wymianę buforu, odsalanie i usuwanie detergentów można przeprowadzić przy użyciu metod obejmujących:
- Dializa: Małe przepuszczalne cząsteczki, takie jak sole, detergenty, rozpuszczalniki i inne zanieczyszczenia są usuwane w oparciu o ich zdolność do przechodzenia przez membranę.
- Chromatografia kolumnowa: Sole są usuwane za pomocą kolumn do filtracji żelowej, które opierają się na wykluczeniu wielkości do separacji.
- Diafiltracja: Sole, detergenty i inne zanieczyszczenia są usuwane na podstawie ich wielkości molekularnej przy użyciu porowatych membran ultrafiltracyjnych pod ciśnieniem lub siłą odśrodkową.
Powiązane artykuły techniczne
- Odsalanie w skali laboratoryjnej jest sprawdzoną, prostą i szybką metodą, która szybko usuwa zanieczyszczenia o niskiej masie cząsteczkowej, jednocześnie przenosząc próbkę do pożądanego buforu w jednym kroku.
- Amicon Stirred Cells skutecznie koncentrują i buforują makrozole dzięki filtracji ciśnieniowej.
- Poznaj zasady działania membran ultrafiltracyjnych i korzyści związane z przygotowywaniem próbek białek, w tym z wymianą rozpuszczalników i zatężaniem próbek.
- Optymalizacja warunków solnych dla wiązania białek i przechodzenia zanieczyszczeń w chromatografii w celu osiągnięcia wymaganej selektywności.
- Ta strona obejmuje szczegółowe aspekty każdego kroku w separacji IEX w celu poprawy rozdzielczości i ogólnej wydajności.
- Zobacz wszystkie (13)
Powiązane protokoły
- Tabele te pomogą w przygotowaniu wielu popularnych roztworów buforowych według pH i pKa. Wybierz bufor z efektywnym zakresem pH dla konkretnego testu.
- Ta strona pokazuje, jak wykonać odsalanie próbki, wymianę buforu i zatężanie dla chromatografii powinowactwa znakowanych białek.
- Podręcznik użytkownika dla komórek mieszających Amicon®, w tym funkcje, obsługa, specyfikacje i rozwiązywanie problemów.
- Detergents are frequently used to solubilize proteins and nucleic acids during purification, but the presence of detergents may interfere with downstream analyses.
- If an antibody must be purified from a small sample volume (0.5-10 mL), then the Amicon® Pro Purification System is recommended.
- Zobacz wszystkie (23)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim.
