Liczenie komórek i analiza stanu zdrowia

Komórki w hodowli muszą być liczone w celu monitorowania czasu podwojenia i kwantyfikacji przed eksperymentami lub procesami produkcyjnymi. Hodowane komórki wymagają rutynowego monitorowania nie tylko proliferacji, ale także żywotności, cytotoksyczności i innych miar zdrowia komórek. Wybór testu zależy od rodzaju komórek w hodowli, zastosowania badania i pożądanej wydajności. Kluczowe znaczenie ma określenie ilościowe lub policzenie hodowanych komórek przed podhodowlą lub dalszym wykorzystaniem w transfekcji, badaniach genomicznych, kriokonserwacji lub innych manipulacjach.

Powiązane artykuły techniczne

• Ręczny licznik komórek Scepter™ 3.0
  Licznik komórek Scepter™ to przenośne urządzenie, które zapewnia spójność liczenia komórek bezpośrednio w okapie hodowlanym w czasie krótszym niż 30 sekund.
• Testy apoptozy
  Testy apoptozy komórkowej do wykrywania zaprogramowanej śmierci komórki przy użyciu aneksyny V, kaspazy i testów fragmentacji DNA TUNEL.
• Scepter™ 3.0 Cell Counter – How it Works
  Scepter™ counting is 7 to 10 times faster than hemocytometry-and also faster than other automated counters. Learn more about how this amazing technology works
• Wykrywanie, zapobieganie i eliminacja mykoplazm w hodowli komórkowej
  Wykryj skażenie mykoplazmą w hodowli komórkowej za pomocą testów PCR, barwienia DNA lub hodowli. Odkryj zestawy do zapobiegania, eliminacji i wykrywania mykoplazmy.
• Zobacz wszystkie (25)

Powiązane protokoły

• Protokół testu MTT na żywotność i proliferację komórek
  Protokół testu MTT do pomiaru żywotności, proliferacji i cytotoksyczności komórek. Instrukcje przygotowania odczynnika MTT i przykłady zastosowań.
• Przewodnik po protokole testu żywotności i proliferacji komórek XTT
  Przeprowadzanie testów kolorymetrycznych w celu nieradioaktywnej kwantyfikacji proliferacji, żywotności i cytotoksyczności komórek przylegających lub zawiesinowych hodowanych w 96-dołkowych mikropłytkach.
• Protokół testu WST-1 na żywotność komórek
  Protokół testu WST-1 do pomiarów żywotności i cytotoksyczności komórek z instrukcjami przygotowania, zastosowaniami, często zadawanymi pytaniami i rozwiązywaniem problemów.
• Testy przepuszczalności in vitro
  Test przepuszczalności Caco-2 ocenia przepuszczalność związków przez barierę jelitową, wspierając formułowanie produktów farmaceutycznych, chemicznych i konsumenckich.
• Testy stabilności metabolicznej
  Testy stabilności metabolicznej mierzą szybkość zanikania związku w inkubacji mikrosomalnej lub hepatocytowej w celu obliczenia klirensu wewnętrznego.
• Zobacz wszystkie (16)

Znajdź więcej artykułów i protokołów

Wprowadź słowa kluczowe

Ręczne liczenie komórek

Komory do liczenia komórek, takie jak hemocytometr z siatkami Neubauera, są powszechnymi urządzeniami do ręcznego/wizualnego liczenia komórek. Niewielka porcja zawiesiny komórek jest ładowana do komory siatkowego, precyzyjnie szlifowanego szklanego urządzenia, gdzie rozprasza się na wytrawionej siatce poprzez działanie kapilarne. Komórki są wizualizowane pod mikroskopem i zliczane za pomocą ręcznego licznika. Wstępnie zdefiniowana objętość komory i system siatki są wykorzystywane do obliczenia stężenia komórek. Dostępne są systemy oparte na obrazowaniu, które automatyzują proces liczenia.

Zautomatyzowane liczenie komórek

Wiele zautomatyzowanych urządzeń do liczenia komórek wykorzystuje te same barwniki do liczenia wizualnego i zasady stosowane w hemocytometrii. W przeciwieństwie do automatycznych liczników komórek, które opierają się na rozpoznawaniu obiektów, urządzenia oparte na zasadzie Coultera zyskały popularność ze względu na użyteczność i precyzję. Liczniki Coultera pompują zawiesiny komórek przez czujnik, który wykrywa komórki na podstawie zmiany oporu elektrycznego. Pozwala to na bardziej niezawodne wykrywanie komórek, nawet tych małych, oraz zliczanie komórek z dużą dokładnością. Przenośne modele, które są podręczne (podobne do pipety) umożliwiają bezpośrednie zliczanie komórek z okapu hodowlanego.

Testy żywotności komórek

Synteza DNA: Monitorowanie aktywnej syntezy DNA w komórkach jest podstawą niektórych testów proliferacji komórek. Replikacja DNA może być mierzona poprzez włączenie zmodyfikowanych nukleozydów, takich jak radioaktywna 3H-tymidyna lub nieradioaktywna bromodeoksyurydyna (BrdU), która jest wykrywana za pomocą przeciwciała.

Aktywność metaboliczna: Testy kalorymetryczne mierzące aktywność metaboliczną są odpowiednie do analizy proliferacji komórek, ich żywotności i cytotoksyczności. Redukcja soli tetrazolowych, takich jak MTT, XTT i WST-1 do barwnych związków formazanu zachodzi tylko w komórkach aktywnych metabolicznie. Obecność ATP jest również wskaźnikiem aktywności metabolicznej. W teście reporterowym lucyferazy firefly, ATP wytwarzane przez dzielące się komórki jest wykorzystywane do utleniania D-Lucyferyny, która daje bioluminescencyjne światło jako odczyt.

Wykluczenie barwnika: Barwienie błękitem trypanu jest powszechnie stosowane do liczenia żywych komórek. Metoda ta opiera się na zasadzie, że żywe komórki nie pobierają barwnika, podczas gdy martwe komórki pobierają barwnik i wydają się niebieskie pod mikroskopem.

Badania fluorescencyjne żywotności komórek: znakowanie estrem N-sukcynoimidylowym 5(6)-karboksyfluoresceiny (CFSE) jest popularnym wyborem do pomiaru liczby zakończonych cykli podziałów komórkowych w populacji komórek. Inny przepuszczalny dla błon barwnik, Calcein-AM, sam w sobie nie jest fluorescencyjny, ale emituje silną zieloną fluorescencję po hydrolizie w żywej komórce. Z kolei barwnik jądrowy jodek propidyny (PI) może dotrzeć do jądra tylko poprzez przejście przez uszkodzoną błonę martwych komórek. Ponieważ zarówno kalceina, jak i PI-DNA mogą być wzbudzane światłem o długości fali 490 nm, możliwe jest jednoczesne monitorowanie żywych i martwych komórek za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego z pojedynczym wzbudzeniem.