Analiza UHPLC/MS wariantów i analogów insuliny na BIOshell A160 Peptide C18 z użyciem kwasu difluorooctowego jako modyfikatora fazy ruchomej
Materiały
kolumna analityczna
CONDITIONS
column
BIOshell A160 Peptide C18, 15 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm particles (66905-U)
mobile phase
[A] 75:25 water (0.1% v/v difluoroacetic acid): acetonitrile (0.1% v/v difluoroacetic acid); [B] 50:50 water (0.1% v/v difluoroacetic acid): acetonitrile (0.1% v/v difluoroacetic acid); (77:23, A:B)
flow rate
0.2 mL/min
column temp.
75 °C
injection
MS, ESI(+) TOF, TIC 100-3000 m/z
injection
0.5 μL
sample
Mixture of six insulin variants, 100 μg/mL, water (0.1% v/v difluoroacetic acid)
Opis
Komentarz do analizy
BIOshell A160 Peptide C18 to idealna kolumna do separacji w odwróconej fazie małych białek i dużych sekwencji peptydowych. Istnieje ponad 75% podobieństwo sekwencji między wszystkimi sześcioma wariantami insuliny w próbce; dlatego też rozdzielenie tych wariantów uzyskuje się dzięki subtelnym różnicom w polarności reszt powierzchniowych na peptydach. Zastosowanie kwasu difluorooctowego (DFA) ma mniejszy wpływ na tłumienie jonów niż kwas trifluorooctowy (TFA), umożliwiając w ten sposób spektralne wykrywanie wariantów insuliny.
Informacje prawne
null