03353621001

Zestaw RACE 5′/3′,^2. generacja

sufficient for 10 reactions

• Kod UNSPSC: 41106313
• NACRES: NA.55

Właściwości

• zastosowanie: sufficient for 10 reactions
• Poziom jakości: 100
• producent / nazwa handlowa: Roche
• Warunki transportu: dry ice
• temp. przechowywania: −20°C (−15°C to −25°C)

Opis

Opis ogólny

Szybka amplifikacja końców cDNA (RACE) jest powszechną techniką stosowaną do szybkiego uzyskiwania pełnej długości cDNA z częściowo znanych sekwencji.[1] Zestaw RACE 5′/3′ zawiera odwrotną transkryptazę Transcriptor i rekombinowaną terminalną transferazę. Odwrotna transkryptaza Transcriptor transkrybuje cDNA o pełnej długości w celu bardzo czułej i szybkiej amplifikacji fragmentów cDNA 5′ lub 3′ o długości do 14 kb. Ze względu na swoją termostabilność (do +65 °C), może pracować z szablonami bogatymi w GC o wysokiej strukturze drugorzędowej. Wysoką czułość można osiągnąć przy użyciu odwrotnej transkryptazy Transcriptor, co skutkuje wysoce wydajną syntezą cDNA i generowaniem długich produktów RACE. Rekombinowana terminalna transferaza jest używana do dodawania homopolimerycznego ogona A do 3′ końca cDNA.[2] Ogon poli(A⁾⁺ zmniejsza prawdopodobieństwo niewłaściwego skrócenia przez starter oligo(dT)-kotwiczący i przezwycięża słabszą hybrydyzację A/T w porównaniu do hybrydyzacji G/C. Co więcej, dłuższe odcinki reszt A są wymagane, zanim starter oligo(dT)-kotwiczący może hybrydyzować do miejsca wewnętrznego i może skrócić produkt amplifikacji. Ogonowe cDNA jest amplifikowane metodą PCR przy użyciu startera specyficznego dla genu i startera oligo(dT)-kotwiczącego. Uzyskany cDNA jest dalej amplifikowany przez drugi PCR przy użyciu zagnieżdżonego specyficznego startera i startera kotwiczącego PCR, umożliwiając klonowanie produktów RACE do odpowiedniego wektora do dalszych badań.

Specyficzność

Inaktywacja termiczna: Transferaza terminalna: 70 °C przez 10 minut
Transkryptor Odwrotna transkryptaza: 85 °C przez 5 minut

Zastosowanie

Zestaw RACE 5′/3′, 2. generacji jest odpowiedni dla

• Badania struktury i ekspresji cząsteczek RNA[3]
• Generowanie cDNA o pełnej długości[4][5]
• Izolacja i charakterystyka końców 5′ lub 3′ z wiadomości RNA o niskiej kopiowalności[6]
• Synteza pierwszej nici cDNA[6]
• Amplifikacja i dalsze klonowanie rzadkich mRNA[6]
• Zastosowanie w połączeniu z metodami pułapkowania eksonów
• Produkty reakcji RACE mogą być bezpośrednio sekwencjonowane bez klonowania

Cechy i korzyści

• Solidna wydajność: Recombinant Transcriptor Reverse Transcriptase umożliwia procesowanie przez regiony o trudnej drugorzędowej strukturze RNA.
• Wygoda: Badania funkcji i ekspresji 5′ lub 3′ końca RNA mogą być wykonywane przy użyciu tego samego zestawu.
• Wiarygodność: ogonowanie dA cDNA za pomocą rekombinowanej terminalnej transferazy zmniejsza prawdopodobieństwo niewłaściwego skrócenia.
• Powtarzalność: Oligo dT-anchor primer z non 3′dT zapewnia prawidłowe wiązanie do wewnętrznego końca ogona poli (A).
• Wytwarzanie długich fragmentów: Generowanie cDNA o długości do 14 kb przy użyciu odwrotnej transkryptazy Transcriptor.

Reakcja kontrolna obejmuje transkrypcję kontrolnego RNA do pierwszorzędowego cDNA przy użyciu startera kontrolnego neo1/rev. Amplifikację cDNA przeprowadza się przy użyciu startera kontrolnego neo2/rev i neo3/for w celu uzyskania produktu PCR o wielkości 157 pz. Ogonowanie oczyszczonego cDNA przeprowadza się za pomocą dATP. Amplifikację ogonowanego cDNA przeprowadza się za pomocą startera oligo dT-anchor i startera kontrolnego neo2/rev w celu uzyskania produktu PCR o wielkości 293 pz.

Opakowanie

1 zestaw zawierający 12 komponentów

Inne uwagi

Wyłącznie do badań naukowych. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Tylko elementy zestawu

• cDNA Synthesis Buffer 5x concentrated
• Transcriptor Reverse Transcriptase 20 U/μl
• Deoxynucleotide Mix
• dATP, pH 7.5 (20 °C)
• Reaction Buffer 10x concentrated
• Terminal Transferase, recombinant
• Control neo-RNA 1 ng/μl
Oligo dT-Anchor Primer
PCR Anchor Primer
Control Primer neo1/rev primer 12.5 μM
Control Primer neo2/rev primer 12.5 μM
Control Primer neo3/for primer 12.5 μM

Zobacz wszystko (12)

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• Klasa zagrożenia wodnego (WGK): WGK 1
• Temperatura zapłonu (°F): does not flash
• Temperatura zapłonu (°C): does not flash