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Roche
PCR DIG Probe Synthesis Kit
sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)
Synonym(e):
DIG-System, Sonde
Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise
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About This Item
UNSPSC-Code:
41105500
Empfohlene Produkte
Verwendung
sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)
Qualitätsniveau
Hersteller/Markenname
Roche
Methode(n)
PCR: suitable
Lagertemp.
−20°C
Allgemeine Beschreibung
Das PCR DIG Probe Synthesis Kit enthält eine Formulierung von alkalilabilem Digoxigenin-11Desoxyuridin-Triphosphat (dUTP) (Digoxigenin = DIG). Dieses Kit dient zur praktischen und effizienten Herstellung von DIG-markierten DNA-Sonden, die bei der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) hochempfindlich sind. Die Sonden sind gemäß PCR-Methode mit DIG-11dUTP (alkalilabil) markiert. Das Verhältnis DIG-dUTP:dTTP ist 1:2.
Das PCR DIG Probe Synthesis Kit enthält den DNA-Polymerase-Mix Expand High Fidelity. Dieser robuste Enzym-Mix mit Korrekturlese-Aktivität polymerisiert Sonden mit einer Länge von 40 bp bis 5 kb unter Verwendung von 10 pg Plasmid-DNA und 10 ng genomischer DNA als Template. Diese DIG-markierten Sonden bleiben über ein Jahr lang stabil.
Das PCR DIG Probe Synthesis Kit enthält den DNA-Polymerase-Mix Expand High Fidelity. Dieser robuste Enzym-Mix mit Korrekturlese-Aktivität polymerisiert Sonden mit einer Länge von 40 bp bis 5 kb unter Verwendung von 10 pg Plasmid-DNA und 10 ng genomischer DNA als Template. Diese DIG-markierten Sonden bleiben über ein Jahr lang stabil.
Anwendung
Mit dem PCR DIG Probe Synthesis Kit erzeugte digoxigenin-markierte (DIG-markierte) DNA-Sonden sind zum Nachweis von Genen in niedriger (oder einfacher) Kopienzahl in seltener mRNA in Southern und Northern Blots geeignet. DIG-markierte DNA-Sonden werden auch zur Markierung von DNA bei der In-situ-Hybridisierung verwendet.
Die Konzentration des gelieferten dUTP-Nukleotid-Mixes kann entsprechend der Sondenlänge angepasst werden. Die Wirksamkeit der Markierung kann schnell auf einem Agarosegel bestimmt werden.
Membran-Stripping und Membran-Resondierung ist mehrmals möglich, wenn das Protokoll in der Packungsbeilage befolgt wird.
Eine PCR-Markierungsreaktion (50 μl) ergibt normalerweise genügend Sonde für 20 ml Hybridisierungslösung. Das Kit kann für ungefähr 25 Reaktionen (50 μl) verwendet werden.
Die Konzentration des gelieferten dUTP-Nukleotid-Mixes kann entsprechend der Sondenlänge angepasst werden. Die Wirksamkeit der Markierung kann schnell auf einem Agarosegel bestimmt werden.
Membran-Stripping und Membran-Resondierung ist mehrmals möglich, wenn das Protokoll in der Packungsbeilage befolgt wird.
Eine PCR-Markierungsreaktion (50 μl) ergibt normalerweise genügend Sonde für 20 ml Hybridisierungslösung. Das Kit kann für ungefähr 25 Reaktionen (50 μl) verwendet werden.
Verpackung
1 Kit mit 6 Komponenten.
Qualität
Jede Charge des PCR DIG Probe Synthesis Kit wird einem Funktionstest mit PCR unterzogen. Amplifikationsprodukte werden in genomischen Southern Blots getestet.
Mit der Kontrollreaktion wird unter den in dieser Packungsbeilage beschriebenen PCR-Bedingungen ein Amplifikationsprodukt mit 442 bp hergestellt. Aufgrund mehrfachen Einbaus von DIG-dUTP während des PCR-Prozesses haben die PCR-Produkte im Vergleich zu dem nicht markierten PCR-Produkt ein wesentlich höheres Molekulargewicht. Nach der Hybridisierung des PCR-Produkts auf 10 μg menschlicher genomischer DNA und dem anschließenden Chemilumineszenz-Nachweis wird ein spezifisches Fragmentmuster nachgewiesen.
Mit der Kontrollreaktion wird unter den in dieser Packungsbeilage beschriebenen PCR-Bedingungen ein Amplifikationsprodukt mit 442 bp hergestellt. Aufgrund mehrfachen Einbaus von DIG-dUTP während des PCR-Prozesses haben die PCR-Produkte im Vergleich zu dem nicht markierten PCR-Produkt ein wesentlich höheres Molekulargewicht. Nach der Hybridisierung des PCR-Produkts auf 10 μg menschlicher genomischer DNA und dem anschließenden Chemilumineszenz-Nachweis wird ein spezifisches Fragmentmuster nachgewiesen.
Nur Kit-Komponenten
Produkt-Nr.
Beschreibung
- Enzyme Mix, Expand High Fidelity 3.5 U/μl
- PCR DIG Probe Synthesis Mix, containing dATP, dCTP, dGTP (2 mM each) 10x concentrated
- PCR Buffer with MgCl2 10x concentrated
- dNTP Stock Solution, containing dATP, dCTP, dGTP, dTTP (2 mM each), pH 7.0 10x concentrated
- Control Template, plasmid DNA in Tris/EDTA buffer, pH 8.0. The 5-kb plasmid contains the cDNA for the human tissue-type plasminogen activator (tPA) 20 pg/μl
- Control PCR Primer Mix, containing 50 pmol of each primer, control PCR primer 1 and 2 2 mM each
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Produkt-Nr.
Beschreibung
Preisangaben
H-Sätze
P-Sätze
Gefahreneinstufungen
Aquatic Chronic 3
Lagerklassenschlüssel
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 2
Flammpunkt (°F)
does not flash
Flammpunkt (°C)
does not flash
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