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DIG-High Prime

sufficient for 40 labeling reactions, pkg of 160 μL, solution

• Synonym(e): DIG-System
• UNSPSC-Code: 41105500

Eigenschaften

• Form: solution
• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 40 labeling reactions
• Verpackung: pkg of 160 μL
• Hersteller/Markenname: Roche
• Grünere Alternativprodukt-Eigenschaften: Designing Safer Chemicals; Learn more about the Principles of Green Chemistry.
• sustainability: Greener Alternative Product
• Grünere Alternativprodukt-Kategorie: Aligned,
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

DIG-High Prime hat ein Enzym- und Nukleotid-Gemisch für die schnelle Random-Priming-Markierung von DNA mit Digoxigenin-11-dUTP. Bei dieser Methode wird der komplementäre DNA-Strang der denaturierten DNA anhand der Klenow-Polymerase unter Verwendung von 3′-OH Termini zufälliger Oligonukleotide als Primer synthetisiert. DIG-markierte Sonden werden mit hoher Ausbeute innerhalb von einer Stunde bzw. nach der Inkubation über Nacht erzeugt.

Wir verpflichten uns, Ihnen umweltfreundlichere Alternativprodukte anzubieten, die einen oder mehrere der „12 Prinzipien der Grünen Chemie“ erfüllen. Dieses Produkt wurde als sicherere Chemikalie entwickelt.  Das DIG-System wurde als empfindliche und kosteneffektive Alternative zur radioaktiven Markierung im Nachweis von Nukleinsäuren entwickelt. Die Vielseitigkeit des DIG-Systems ist in zahlreichen Publikationen belegt. Die radioaktive Markierung stellt daher nicht mehr die einzige Option für die Markierung von DNA zur Hybridisierung dar.

Spezifität

Hitzeinaktivierung: Die Reaktion wird durch Zugabe von 2 μL 0,2 M EDTA (pH 8,0) bzw. Erwärmung auf 65 °C für eine Dauer von 10 Minuten gestoppt.

Anwendung

DIG-High Prime-markierte DNA-Sonden werden in vielen verschiedenen Hybridisierungsmethoden eingesetzt:

• in Southern Blots
• in Northern Blots
• in Dot/Slot-Blots
• für das Screening von Genbibliotheken
• in In-situ-Hybridisierungen

Aufgrund hochspezifischer und -empfindlicher Detektionssyteme können DIG-markierte DNA-Sonden für die Einzelkopie-Gendetektion in 1μg humaner Gesamt-DNA eingesetzt werden. Die Verwendung der alkalilabilen Form von DIG-dUTP, bei der der Digoxigenin-Teil über eine alkalilabile Esterbindung mit dem Spacer-Arm verbunden ist, ermöglicht ein einfacheres und effizienteres Ablösen und Neuverproben von Blots.

Leistungsmerkmale und Vorteile

DIG-High Prime gewährleistet die effiziente Markierung von:

• DNA-Mengen von 10 ng bis 3μg in einer Standardreaktion.
• DNA verschiedener Längen von kleinen Restriktionsfragmenten bis λ oder Cosmid-DNA.
• Superspiralisierte oder linearisierte DNA
• DNA in Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt.

Markierungseffizienz:
Eine Standard-Markierungsreaktion mit 1μg Template ergibt nach 1 Stunde 0,8μg neu synthetisierte, Digoxigenin-markierte DNA und 2μg nach einer 20-stündigen Inkubation bei +37 °C.

Inhalt
5-fach konzentriertes Random-Priming-Gemisch: 1U/μL Klenow-Polymerase, Markierungsgüte, 1 mM dATP, 1 mM dCTP, 1 mM dGTP, 0,65 mM dTTP, 0,35 mM DIG-11-dUTP, alkalilabil in 50 % (v/v) Glycerin.

Qualität

Funktionstest:
In einem Standardassay mit 1μg linearisierten pBR328 werden 0,8μg der DIG-markierten DNA nach 1 Stunde und 2,3μg nach 20 Stunden synthetisiert. Wenn diese markierte DNA in einer Konzentration von 20 ng/mL zur Hybridisierung verwendet wird, werden 0,03 pg der homologen DNA durch Chemilumineszenz mit dem Anti-DIG-alkalinischen Phosphatasekonjugat und CSPD auf einem Dot oder Southern Blot nachgewiesen.

Prinzip

DIG-markierte DNA-Sonden werden unter Anwendung der Random-Priming-Markierungsmethode mit DIG-High Prime erzeugt. DIG-High Prime ist ein eigens entwickeltes Reaktionsgemisch. Es enthält Digoxigenin-11-dUTP und alle für die Random-Priming-Markierung erforderlichen Reagenzien, einschließlich des Klenow-Enzyms. Diese sind in einem optimierten, 5-fach konzentrierten Reaktionspuffer in 50 % Glycerin vorgemischt.

Angaben zur Herstellung

DIG-markierte Sonden im Reaktionsgemisch oder im Hybridisierungspuffer sind bei einer Lagerung bei -15 bis -25 °C länger als 12 Monate stabil. Sie können bei frischer Denaturierung vor jedem Gebrauch mehrmals wiederverwendet werden.

Testzeit: 80 Minuten

Probenmaterialien

• DNA-Fragmente von mindestens 100 bp
• Linearisiertes Plasmid, Cosmid oder λDNA
• Superspiralisierte DNA
• Oder minimale DNA-Mengen (10 μg), z. B. aus Gelen oder in geschmolzener Agarose isolierte DNA-Restriktionsfragmente

Hinweis: Um optimale Ergebnisse zu erzielen, sollte die Template-DNA linearisiert sein und eine Mindestgröße von 100 bp aufweisen. Template-DNA von > 5 kb sollte vor dem Markieren mit einer 4-bp-Schere mit der Restriktionsverdau-Methode geschnitten werden.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): No data available
• Flammpunkt (°C): No data available