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DIG-Nick Translationsmischung

sufficient for 40 labeling reactions, pkg of 160 μL, suitable for hybridization

• Synonym(e): Nick-Translation
• UNSPSC-Code: 41105500

Eigenschaften

• Form: solution
• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 40 labeling reactions
• Verpackung: pkg of 160 μL
• Hersteller/Markenname: Roche
• Grünere Alternativprodukt-Eigenschaften: Designing Safer Chemicals; Learn more about the Principles of Green Chemistry.
• sustainability: Greener Alternative Product
• Methode(n): hybridization: suitable
• Grünere Alternativprodukt-Kategorie: , Aligned
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

DIG-Nick Translationsmischung ist eine praktische Mischung aus Enzym und Nukleotid zur Nick Translation. Sie nutzt die Kombination aus DNase und DNA-Polymerase, um einen Strang der DNA-Helix einzuschneiden und anschließend markierte Nukleotide einzubringen, wenn die Polymerase die eingeschnittene Stelle untersucht oder „Korrektur liest“. Große Plasmide, Cosmide und Polymerase-Kettenreaktion(PCR)-Fragmente werden regelmäßig mit diesem Verfahren verwendet, und die DNA kann linearisiert oder Supercoiled sein. Einzelne Templates erzeugen bei der 90-minütigen Standardreaktion konsistente Ergebnisse und führen zu einer durchschnittlichen Sondenlänge von 200 bp bis 500 bp. Das Molverhältnis von Digoxigenin (DIG)-11-desoxyuridintriphosphat (dUTP) zu Desoxythymidintriphosphat (dTTP) wird angepasst, um sicherzustellen, dass jedes 20. bis 25. Nukleotid in der neu synthetisierten DNA mit DIG modifiziert ist. Diese Dichte von Haptenen in der DNA erzeugt in der immunologischen Nachweisreaktion die höchste Sensitivität.

Wir verpflichten uns, Ihnen umweltfreundlichere Alternativprodukte anzubieten, die einen oder mehrere der „12 Grundsätze der Grünen Chemie“ erfüllen. Dieses Produkt wurde als sicherere Chemikalie entwickelt.  Das DIG-System wurde als empfindliche und kosteneffektive Alternative zur radioaktiven Markierung im Nachweis von Nukleinsäuren entwickelt. Die Vielseitigkeit des DIG-Systems ist in zahlreichen Publikationen belegt. Die radioaktive Markierung stellt daher nicht mehr die einzige Option für die DNA-Markierung zur Hybridisierung dar.

Spezifität

Hitzeinaktivierung: Beenden Sie die Reaktion durch Zugabe von 1 μl 0.5 M EDTA (pH-Wert 8,0) und Erwärmung auf 65 °C für 10 Minuten.

Anwendung

DIG-Nick Translationsmischung wird zur Erzeugung hochsensitiver Sonden für die In-situ-Hybridisierung, die mit Digoxigenin-11-dUTP markiert sind, eingesetzt.
Hinweis: Die Mischung kann auch für Filterhybridisierungsverfahren eingesetzt werden. Wir empfehlen für hochsensitive Filterhybridisierungssonden jedoch, dass Sie DIG-High Prime von Roche Applied Science verwenden.
Für die nichtradioaktive Markierung von In-situ-Sonden mit anderen Haptenen und Fluorophoren bietet Roche Applied Science die Biotin-Nick Translationsmischung und die Nick Translationsmischung (ohne Nukleotide) an.

Qualität

Die Funktion wurde in einem Dot-Spot-Assay getestet.

Prinzip

Das Nick Translationsverfahren basiert auf der Fähigkeit der DNase I, bei geringen Enzymkonzentrationen in Gegenwart von MgCl₂ zufällig verteilte Nicks in DNA einzubringen.
E. coli DNA-Polymerase I synthetisiert DNA komplementär zu dem intakten Strang in 5′→3′-Richtung unter Verwendung der 3′-OH-Termini des Nicks als Primer. Die 5′→3′-exonukleolytische Aktivität von DNA-Polymerase I entfernt gleichzeitig Nukleotide in Richtung der Synthese. Die Polymeraseaktivität ersetzt im Anschluss die entfernten Nukleotide mit isotopmarkierten oder haptenmarkierten Desoxyribonukleosidtriphosphaten. Bei geringen Temperaturen (+15 °C) wird die unmarkierte DNA während der Reaktion daher durch neu synthetisierte, markierte DNA ersetzt.

Angaben zur Herstellung

1 Fläschchen mit 5x konzentriertem stabilisierten Reaktionspuffer in 50%igem Glycerin (v/v) und DNA-Polymerase I, DNase I, 0,25 mM dATP, 0,25 mM dCTP, 0,25 mM dGTP, 0,17 mM dTTP und 0,08 mM DIG-11-dUTP (alkalisch-stabil).
Assaydauer: 100 Minuten
Probenmaterialien: Supercoiled und linearisierte Plasmid-DNA, Supercoiled und linearisierte Cosmid-DNA, aufgereinigte PCR-Produkte.
Hinweis: Denaturierung des Templates vor der Nick Translation ist nicht erforderlich.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): No data available
• Flammpunkt (°C): No data available