CT01
MTT-Zellwachstumstest-Kit
MTT Cell Growth Assay is a colorimetric assay that can be used for either proliferation or complement-mediated cytotoxicity assays.
Synonym(e):
MTT Formazan Assay
Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise
Alle Fotos(1)
About This Item
UNSPSC-Code:
12352207
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.32
Empfohlene Produkte
Qualitätsniveau
Hersteller/Markenname
Chemicon®
Methode(n)
activity assay: suitable
cell based assay: suitable
Versandbedingung
wet ice
Allgemeine Beschreibung
MTT ist ein blassgelbes Substrat, das von lebenden Zellen gespalten wird und ein dunkelblaues Formazanprodukt ergibt. Dieser Prozess erfordert aktive Mitochondrien, und selbst frisch abgestorbene Zellen spalten keine nennenswerten Mengen an MTT. Der nachstehend beschriebene kolorimetrische Assay kann sowohl für Proliferations- als auch für Komplement-vermittelte Zytotoxizitätstests verwendet werden.
Anwendung
Verfahren:
1. Führen Sie einen Lymphokin-, Mitogen- oder Komplement-vermittelten Zytotoxizitätstest nach Standardmethoden in 96-Well-Flachboden-Gewebekulturplatten von guter optischer Qualität (z. B. Falcon) durch. Das Endvolumen des Gewebekulturmediums in jeder Vertiefung sollte 0,1 ml betragen, und das Medium (z. B. RPMI oder DMEM) kann bis zu 10 % fötales Rinderserum enthalten.
2. Am Ende des Tests 0,01 ml AB-Lösung (MTT) in jede Vertiefung geben. Durch leichtes Klopfen auf den Rand der Schale mischen.
3. Bei 37 °C inkubieren, damit die Spaltung von MTT stattfinden kann. Die optimale Zeit kann je nach Test variieren, aber vier Stunden sind für die meisten Zwecke geeignet. Nach Ablauf dieser Zeit erscheint das MTT-Formazan, das in den Vertiefungen mit lebenden Zellen produziert wird, als schwarze, unscharfe Kristalle auf dem Boden der Vertiefung.
4. 0,1 ml Isopropanol mit 0,04 N HCl in jede Vertiefung geben. Durch wiederholtes Pipettieren mit einer Mehrkanalpipette gründlich mischen. Das HCl wandelt das Phenolrot im Gewebekulturmedium in eine gelbe Farbe um, die die MTT-Formazan-Messung nicht stört. Das Isopropanol löst das Formazan auf, so dass eine homogene blaue Lösung entsteht, die für die Absorptionsmessung geeignet ist.
5. Innerhalb einer Stunde wird die Absorption auf einem ELISA-Plattenlesegerät bei einer Testwellenlänge von 570 nm und einer Referenzwellenlänge von 630 nm gemessen. Nach mehrstündiger Lagerung bei Raumtemperatur kann aufgrund der Säure/des Alkohols eine Ausfällung der Serumproteine beginnen. Das Abkühlen der Platten beschleunigt die Ausfällung. Wenn die Platten vor der Messung gelagert werden müssen, sollten sie vor der Zugabe der Säure/des Alkohols bei 4 ° C aufbewahrt, dann auf Raumtemperatur erwärmt und die Säure/der Alkohol erst kurz vor der Messung zugegeben werden.
Ergebnisse:
Mit dem MTT-Test werden normalerweise 200 bis 50.000 Zellen einer typischen Zelllinie erfasst, wobei 1.000 bis 50.000 Zellen der nützliche Bereich sind. Diese Zahl kann bei anderen Zelltypen variieren. Zytotoxische Tests sollten so eingestellt werden, dass die unlysierten Kontrollzellen ein Signal von 0,2 bis 0,4 ergeben, und Proliferationsassays sollten beim Konzentrationsplateau einen ähnlichen Wert ergeben. Dies entspricht etwa 20–50.000 Zellen pro Vertiefung bei einer typischen Zelllinie.
Die Absorption ist direkt proportional zur Anzahl der Zellen; die tatsächlichen Zellen absorbieren nicht signifikant, selbst bei Konzentrationen von bis zu 1 x 106 Zellen/ml.
1. Führen Sie einen Lymphokin-, Mitogen- oder Komplement-vermittelten Zytotoxizitätstest nach Standardmethoden in 96-Well-Flachboden-Gewebekulturplatten von guter optischer Qualität (z. B. Falcon) durch. Das Endvolumen des Gewebekulturmediums in jeder Vertiefung sollte 0,1 ml betragen, und das Medium (z. B. RPMI oder DMEM) kann bis zu 10 % fötales Rinderserum enthalten.
2. Am Ende des Tests 0,01 ml AB-Lösung (MTT) in jede Vertiefung geben. Durch leichtes Klopfen auf den Rand der Schale mischen.
3. Bei 37 °C inkubieren, damit die Spaltung von MTT stattfinden kann. Die optimale Zeit kann je nach Test variieren, aber vier Stunden sind für die meisten Zwecke geeignet. Nach Ablauf dieser Zeit erscheint das MTT-Formazan, das in den Vertiefungen mit lebenden Zellen produziert wird, als schwarze, unscharfe Kristalle auf dem Boden der Vertiefung.
4. 0,1 ml Isopropanol mit 0,04 N HCl in jede Vertiefung geben. Durch wiederholtes Pipettieren mit einer Mehrkanalpipette gründlich mischen. Das HCl wandelt das Phenolrot im Gewebekulturmedium in eine gelbe Farbe um, die die MTT-Formazan-Messung nicht stört. Das Isopropanol löst das Formazan auf, so dass eine homogene blaue Lösung entsteht, die für die Absorptionsmessung geeignet ist.
5. Innerhalb einer Stunde wird die Absorption auf einem ELISA-Plattenlesegerät bei einer Testwellenlänge von 570 nm und einer Referenzwellenlänge von 630 nm gemessen. Nach mehrstündiger Lagerung bei Raumtemperatur kann aufgrund der Säure/des Alkohols eine Ausfällung der Serumproteine beginnen. Das Abkühlen der Platten beschleunigt die Ausfällung. Wenn die Platten vor der Messung gelagert werden müssen, sollten sie vor der Zugabe der Säure/des Alkohols bei 4 ° C aufbewahrt, dann auf Raumtemperatur erwärmt und die Säure/der Alkohol erst kurz vor der Messung zugegeben werden.
Ergebnisse:
Mit dem MTT-Test werden normalerweise 200 bis 50.000 Zellen einer typischen Zelllinie erfasst, wobei 1.000 bis 50.000 Zellen der nützliche Bereich sind. Diese Zahl kann bei anderen Zelltypen variieren. Zytotoxische Tests sollten so eingestellt werden, dass die unlysierten Kontrollzellen ein Signal von 0,2 bis 0,4 ergeben, und Proliferationsassays sollten beim Konzentrationsplateau einen ähnlichen Wert ergeben. Dies entspricht etwa 20–50.000 Zellen pro Vertiefung bei einer typischen Zelllinie.
Die Absorption ist direkt proportional zur Anzahl der Zellen; die tatsächlichen Zellen absorbieren nicht signifikant, selbst bei Konzentrationen von bis zu 1 x 106 Zellen/ml.
Der MTT-Zellwachstumstest ist ein kolorimetrischer Test, der entweder für Proliferations- oder Komplement-vermittelte Zytotoxizitätstests verwendet werden kann.
Komponenten
Reagenz A: MTT, (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid), 50 mg/Fläschchen.
Lösung B: PBS, pH-Wert 7,4, 60 ml
Lösung B: PBS, pH-Wert 7,4, 60 ml
Lagerung und Haltbarkeit
Bei 2–8 °C bis zu sechs Monate haltbar. Die Mischung aus Reagenz A und Lösung B ist bei 2–8 °C bis zu zwei Wochen lang stabil.
Reagenzvorbereitung:
Für je 1.000 durchzuführende Tests 10 ml Lösung B zu einem Fläschchen Reagenz A hinzufügen. Gut mischen, steril filtern und bis zur Verwendung im Dunkeln bei 4 ° C aufbewahren. Hinweis: Es kann die ganze Nacht dauern, bis es sich auflöst. Lösung nicht erhitzen. Wenn für die Auflösung der Kristalle unbedingt erforderlich, den pH-Wert mit 1–2 Tropfen HCl anpassen. Das AB-Gemisch ist unter diesen Bedingungen mehrere Wochen lang stabil.
Reagenzvorbereitung:
Für je 1.000 durchzuführende Tests 10 ml Lösung B zu einem Fläschchen Reagenz A hinzufügen. Gut mischen, steril filtern und bis zur Verwendung im Dunkeln bei 4 ° C aufbewahren. Hinweis: Es kann die ganze Nacht dauern, bis es sich auflöst. Lösung nicht erhitzen. Wenn für die Auflösung der Kristalle unbedingt erforderlich, den pH-Wert mit 1–2 Tropfen HCl anpassen. Das AB-Gemisch ist unter diesen Bedingungen mehrere Wochen lang stabil.
Rechtliche Hinweise
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Haftungsausschluss
Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.
Signalwort
Warning
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Eye Irrit. 2 - Muta. 2 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Zielorgane
Respiratory system
Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
Analysenzertifikate (COA)
Suchen Sie nach Analysenzertifikate (COA), indem Sie die Lot-/Chargennummer des Produkts eingeben. Lot- und Chargennummern sind auf dem Produktetikett hinter den Wörtern ‘Lot’ oder ‘Batch’ (Lot oder Charge) zu finden.
Besitzen Sie dieses Produkt bereits?
In der Dokumentenbibliothek finden Sie die Dokumentation zu den Produkten, die Sie kürzlich erworben haben.
Kunden haben sich ebenfalls angesehen
Identification of genes required for recycling reducing power during photosynthetic growth.
Christine L Tavano,Angela M Podevels,Timothy J Donohue
Journal of Bacteriology null
Ovalicin ameliorates compound 48/80-induced atopic dermatitis-related symptoms.
Cheol-Sik Yoon,Sung-Hee Nam,Ji-Young Jeon,Hei-Sam Lee,Myeong-Lyeol Lee,Hyeong-U Son,Sang-Han Lee
Biological & Pharmaceutical Bulletin null
Jason C Collins et al.
The Journal of cell biology, 217(12), 4141-4154 (2018-10-24)
The correct assembly of ribosomes from ribosomal RNAs (rRNAs) and ribosomal proteins (RPs) is critical, as indicated by the diseases caused by RP haploinsufficiency and loss of RP stoichiometry in cancer cells. Nevertheless, how assembly of each RP is ensured
Cobalt chloride decreases EC-SOD expression through intracellular ROS generation and p38-MAPK pathways in COS7 cells.
Tetsuro Kamiya,Hirokazu Hara,Harutaka Yamada,Hirokazu Imai,Naoki Inagaki,Tetsuo Adachi
Free Radical Research null
Characterization of a novel rat cholangiocarcinoma cell culture Model-CGCCA.
Yeh CN, Lin KJ, Chen TW, Wu RC, Tsao LC, Chen YT, Weng WH, Chen MF
World Journal of Gastroenterology null
Unser Team von Wissenschaftlern verfügt über Erfahrung in allen Forschungsbereichen einschließlich Life Science, Materialwissenschaften, chemischer Synthese, Chromatographie, Analytik und vielen mehr..
Setzen Sie sich mit dem technischen Dienst in Verbindung.