細胞凝集：概要
懸濁液中の細胞は、さまざまな原因で相互に付着して凝集体を形成することがあります。細胞凝集で最もよくみられる原因は、培地中の遊離DNAや細胞片の存在で、これにより細胞溶解が引き起こされることです。DNAは粘着性があるため、細胞や他の細胞片を凝集させて大型の凝集体にします。細胞溶解および培地内へのDNA放出の原因のいくつかを以下に示します。
- 過剰消化：細胞分離を目的として一般的に使用されるトリプシンのようなタンパク質分解酵素を用いて過剰に処置すると、細胞凝集が生じます。
- 環境ストレス：機械的な力、凍結／融解サイクルの繰り返し、その他の環境ストレスにより細胞死（その初期症状が細胞間接着の場合があります）が加速されます。
- 組織分離：単細胞懸濁液を一次組織から化学物質、機械刺激または酵素のプロトコルで調製するときに、細胞破裂が誘発される場合があります。コラゲナーゼは、単細胞懸濁液を組織から調製するときに、細胞外基質を消化するために通常必要となります。分離試薬については、こちらをご覧ください。
- 過増殖：細胞が飽和密度に達すると、細胞溶解により細胞片および遊離DNAが過剰蓄積します。
トラブルシューティング
細胞凝集により、重要な栄養分へのアクセスが低下し、その結果、全体の細胞増殖が遅延します。また、細胞凝集体により、クリーンな単細胞調製を必要とする下流アッセイ（例えば、フローサイトメトリー）が損なわれます。凝集が生じる原因に応じて、私たちが提案する凝集防止策を下表に示します。
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