SCM014

神経幹細胞凍結培地（1X）

• UNSPSCコード: 41106200
• eCl@ss: 32160801
• NACRES: NA.32

特性

• 詳細: Neural Stem Cells
• 品質水準: 100
• タイプ: for cell culture
• 形状: liquid
• テクニック: cell culture | stem cell: suitable

詳細

アプリケーション

1.細胞培養凍結培地を完全に解凍し、ボトルを軽く振り混ぜます。 使用中は凍結培地を氷上で保存してください。

2.凍結する細胞は、対数期後期の増殖段階としてください。

3.単層は解離させる必要があります。 解離後、細胞を神経幹細胞基礎培地（カタログ番号 SCM003）に再懸濁し、生存率と細胞数を測定します。

4.細胞を300 x gで3分間遠心します。ペレットより上の培地を取り除きます。

5.細胞を神経幹細胞凍結培地中に、約 4 x 10⁶ 個/mL の濃度で再懸濁します。 バイアルあたり 1 mL の細胞を凍結します。 細胞を再懸濁し、適切な凍結保存用バイアルに均等に分注した後、凍結容器に入れ、5 分以内に通常の凍結を開始します。

6.細胞は -80℃ 以下で保存する必要があります。長期保存の場合、細胞は超低温冷凍庫（-150℃）または液体窒素（-196℃）で保存してください。

7.凍結保存した細胞の融解は、以下のように行ってください：

a. 推奨される培地および適切コーティングされたポリ-L-オルニチ ンおよびラミニンプラスチック器具および／またはガラス器具が揃うまで、細胞を融解しないでください。
b. 細胞は37℃の水槽で速やかに融解してください。 重要： 細胞をボルテックスしないでください。
c. バイアルを70％エタノールですすぎ、滅菌します。
d. ラミナーフローフード内で1または2 mL ピペットを使用して、細胞を無菌の 15 mL コニカルチューブへ移します。 移す際に気泡が混入しないよう注意してください。
e. 10 mL ピペットを使用して、9 mL の神経幹細胞基礎培地（37℃ で予熱）を 15 mL コニカルチューブへゆっくり滴下して添加します。 重要： 全容量の培地を一度に細胞へ添加しないでください。 浸透圧衝撃に起因する細胞生存率の低下を招くおそれがあります。
f. ピペットによる吸い出しをゆっくり2回繰り返して、細胞懸濁液を穏やかに混合します。 気泡が混入しないよう注意してください。

重要： 細胞をボルテックスしないでください。
g. 300 x gで2～3分間チューブを遠心分離して、細胞をペレット状にします。
h. 上清をできるだけ多く取り除きます。
i. 新たに添加した成長因子を含有する合計 10 mL の神経幹細胞基礎培地 （37℃ で予熱）で細胞を再懸濁します。

注記： 神経幹細胞基礎培地には、常に新鮮な成長因子を添加してください。 ラット神経幹細胞の場合： FGF-2（100 μg/mL）ストック 2 ～ 4 μL を 神経幹細胞基礎培地 10 mL に加えます。 マウス神経幹細胞の場合：FGF（100 μg/mL ストック）、EGF（100 μg/mL ストック）、ヘパリン（10 mg/mL ストック）を神経幹細胞基礎培地 10 mL に 2 μL 加えます。

j. 細胞混合物をポリ-L-オルニチンとラミニンでコーティングした 10 cm 組織培養プレートに塗布します。
K. 5% CO2 湿式インキュベーター内で細胞を 37℃ で培養します。
l. 翌日、新鮮な成長因子を含む神経幹細胞基礎培地（37℃ に予熱）と交換します（成長因子の濃度はステップ 7i を参照）。 以後1日おきに、成長因子を含む新鮮な培地と交換します。
m. 細胞が約80%コンフルエントであればTM=[「Accutase」]（カタログ番号 SCR005）で細胞を分解でき、さらに継代するか、または後で使用するために凍結できます。

物理的形状

無血清製剤。 10% DMSO 含有。

保管および安定性

-20℃ で保存してください。

免責事項

メルクのカタログまたは製品に添付されたメルクのその他の文書に記載されていない場合、メルクの製品は研究用途のみを目的としているため、他のいかなる目的にも使用することはできません。このような目的としては、未承認の商業用途、in vitroの診断用途、ex vivoあるいはin vivoの治療用途、またはヒトあるいは動物へのあらゆる種類の消費あるいは適用などがありますが、これらに限定されません。

安全性情報

• 保管分類コード: 10 - Combustible liquids