2GRHSRMKB

Miscela KAPA2G Robust HotStart ReadyMix

2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)

• Sinonimo/i: PCR, PCR Multiplex
• Codice UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.55

Proprietà

• impiego: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Livello qualitativo: 100
• Durata: ≤12 mo.
• Caratteristiche: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart
• Confezionamento: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5701); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5702)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• Concentrazione: 2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)
• tecniche: PCR: suitable
• input: crude DNA
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

La DNA polimerasi KAPA2G Robust di seconda generazione è stata pensata per ovviare alla variabilità dei risultati di amplificazione di un′ampia gamma ampliconi (ampliconi ricchi di GC e AT). La miscela KAPA2G Robust HotStart^® ReadyMix^™ aumenta la processività e l′attività specifica, consentendo una PCR robusta, con una maggiore sensibilità e un′aumentata tolleranza ai comuni inibitori della PCR. Le elevate prestazioni della DNA polimerasi KAPA2G Robust sono ideali per le applicazioni di PCR più complesse e per i campioni più difficili in quanto evitano di utilizzare enzimi e protocolli diversi per l′ottimizzazione.

Applicazioni

• Amplificazione di templati ricchi di GC e AT
• Templati contenenti comuni inibitori della PCR, ad esempio sali, urea, SDS o etanolo
• PCR su campioni crudi, ad esempio tamponi boccali, cellule coltivate di mammifero, lievito o batteri
• Colony PCR
• Estrazione e amplificazione del DNA
• Screening delle mutazioni

Azioni biochim/fisiol

I frammenti di DNA generati con la DNA polimerasi KAPA2G Robust HotStart^® hanno le stesse caratteristiche dei frammenti di DNA generati con la Taq DNA polimerasi wild-type e possono essere utilizzati per le comuni applicazioni e analisi a valle, quali la digestione con enzimi di restrizione, i clonaggi e il sequenziamento. Analogamente alla Taq wild-type, la polimerasi KAPA2G Robust HotStart possiede attività polimerasica 5′→3′ e attività esonucleasica 5′→3′ ma non è dotata di attività 3′→5′ esonucleasica (proofreading). La fedeltà della KAPA2G Robust HotStart è simile a quella della Taq wild-type; con un tasso di errore di circa 1 errore ogni 1.7 x 105 nucleotidi incorporati. Gli amplificati prodotti dalla KAPA2G Robust HotStart posseggono una coda 3'-dA per il TA cloning.

Caratteristiche e vantaggi

Efficiente amplificazione di bersagli ricchi di GC e AT

• Ottime prestazioni in una vasta gamma di templati ricchi di GC e AT
• Maggiori percentuali di buona riuscita della PCR

Migliore tolleranza ai comuni inibitori della PCR

• Efficiente amplificazione da campioni crudi
• Maggiore resa e sensibilità per unità di enzima

Prestazioni imbattibili nella Colony PCR

• Maggiore resa e migliore coerenza della PCR diretta da cellule di E. coli e lievito

Note rapide:

• I kit per PCR KAPA2G Robust HotStart ReadyMix contengono la DNA polimerasi KAPA2G Robust, concepita per un′elevata processività e un′alta tolleranza agli inibitori.
• Si possono usare come templati sia i campioni di DNA genomico purificato sia i campioni crudi (ad esempio, Colony PCR).
• Utilizzare un tempo di estensione di 15 sec/kb per ciclo e aumentarlo a 30-60 sec/kb per gli ampliconi o i templati difficili.
• La miscela KAPA2G Robust HotStart ReadyMix contiene 2 mM di MgCl₂ 1X.
• La miscela KAPA2G Robust HotStart ReadyMix con colorante include due coloranti traccianti inerti che consentono il caricamento diretto su gel di agarosio.
• La miscela KAPA2G Robust HotStart ReadyMix è ideale per la PCR con singolo protocollo, ovvero l′amplificazione di frammenti variabili con il 25-65% di GC, fino a 1 kb di dimensioni, utilizzando un unico protocollo di ciclizzazione e impostazione della reazione.
• I prodotti di reazione presentano una coda 3′-dA e possono essere clonati per diventare vettori per TA cloning.

Qualità

Ogni lotto di DNA polimerasi KAPA2G Robust HotStart contiene <2% di proteine contaminanti (confermato con saggio Agilent Protein 230). I kit per PCR KAPA2G Robust HotStart ReadyMix sono sottoposti a rigorosi controlli di qualità, sono esenti da attività contaminanti delle esonucleasi ed endonucleasi e soddisfano stringenti criteri per quanto riguarda i livelli di contaminazione del DNA.

Nota sulla preparazione

Assicurarsi sempre che il prodotto sia stato completamente scongelato e miscelato prima dell′uso. I reagenti si possono conservare a 4 °C per l′uso a breve termine (fino a 1 mese). Riportare a -20 °C per la conservazione a lungo termine. A condizione che tutti i componenti siano stati manipolati con cautela e non abbiano subito alcuna contaminazione, il kit non è soggetto a compromissione se lasciato (non intenzionalmente) a temperatura ambiente per un breve periodo di tempo (fino a 3 giorni). Si sconsiglia la conservazione prolungata a temperatura ambiente e a 4 °C. Si ricorda che i reagenti conservati a temperature superiori a -20 °C sono più inclini alla degradazione in caso di contaminazione durante l′uso. Pertanto, la conservazione a tali temperature avviene a rischio e pericolo dell′utilizzatore.

Altre note

Solo per fini di ricerca. Non usare in procedure diagnostiche.

Note legali

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Solo come componenti del kit

• KAPA2G Robust HotStart^® DNA Polymerase 1U per 25 µL reaction
• MgCl₂ 2mM at 1X
• dNTP Mix 0.2 mM of each dNTP at 1X

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS07,GHS08
• Avvertenze: Warning
• Indicazioni di pericolo: H302,H371
• Consigli di prudenza: P260 - P264 - P270 - P301 + P312 + P330 - P308 + P311 - P501
• Classi di pericolo: Acute Tox. 4 Oral - STOT SE 2
• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): does not flash
• Punto d’infiammabilità (°C): does not flash