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Kit per PCR KAPA2G Robust HotStart

• Sinonimo/i: Kit PCR
• Codice UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.55

Proprietà

• impiego: sufficient for 1000 reactions; sufficient for 200 reactions; sufficient for 500 reactions; sufficient for 5000 reactions
• Livello qualitativo: 100
• Durata: ≤12 mo.
• Caratteristiche: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included: no; hotstart
• Confezionamento: pkg of 100 U (KK5522); pkg of 250 U (KK5515); pkg of 2500 U (KK5525); pkg of 500 U (KK5517)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• tecniche: PCR: suitable
• input: crude DNA
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

La DNA polimerasi KAPA2G Robust di seconda generazione si è evoluta per risolvere il problema delle discrepanze di amplificazione in un′ampia gamma di tipi di ampliconi (ricchi di GC e AT). Il kit per PCR KAPA2G Robust HotStart consente una maggiore processività e un′attività più specifica che si traducono in solide prestazioni della PCR, elevata sensibilità e una migliore tolleranza ai comuni inibitori. Le elevate prestazioni della DNA polimerasi KAPA2G Robust sono ideali per le applicazioni di PCR più complesse e per i campioni più difficili in quanto eliminano la necessità di utilizzare diversi enzimi e protocolli per l′ottimizzazione.

Applicazioni

Il kit per PCR KAPA2G Robust HotStart^® è stato usato per:

• Amplificazione con PCR di campioni di saliva
• Amplificazione con PCR per sequenziamento diretto
• PCR nidificata
• Amplificazione di templati ricchi di GC e AT
• Templati contenenti comuni inibitori della PCR, ad esempio sali, urea, SDS o etanolo
• PCR su campioni crudi, ad esempio tamponi boccali, cellule coltivate di mammifero, lievito o batteri
• Colony PCR
• RT-PCR

Azioni biochim/fisiol

I DNA generati con la DNA polimerasi KAPA2G Robust HotStart^® sono simili ai frammenti generati con la DNA polimerasi Taq wild-type. La fedeltà di KAPA2G Robust HotStart è simile a quella della Taq wild-type; è soggetta a un tasso d′errore di circa 1 ogni 1,7 x 10⁵ nucleotidi incorporati. Può essere usata nella digestione degli enzimi di restrizione, nella clonazione e nel sequenziamento. Analogamente alla Taq wild-type, KAPA2G Robust HotStart è dotata di attività polimerasica 5′→3′ ed esonucleasica 5′→3′, ma non di attività esonucleasica 3′→5′ (proofreading).

Caratteristiche e vantaggi

Efficiente amplificazione di bersagli ricchi di GC e AT

• Ottime prestazioni in una vasta gamma di templati ricchi di GC e AT
• Maggiori percentuali di buona riuscita della PCR

Migliore tolleranza ai comuni inibitori della PCR

• Efficiente amplificazione da campioni crudi
• Maggiore resa e sensibilità per unità di enzima

Prestazioni imbattibili nella Colony PCR

• Maggiore resa e migliore coerenza della PCR diretta da cellule di E. coli e lievito

Note rapide:

• I kit per PCR KAPA2G Robust HotStart contengono la DNA polimerasi KAPA2G Robust HotStart, concepita per un′elevata processività e un′alta tolleranza agli inibitori.
• Si possono usare come templati sia i campioni di DNA genomico purificato sia i campioni crudi (ad esempio, Colony PCR).
• Usare 0,5 U di DNA polimerasi KAPA2G Robust HotStart per reazione da 25 μL. Le PCR più impegnative (campione ricco in GC, crudo) possono richiedere una concentrazione più elevata dell′enzima.
• Utilizzare un tempo di estensione di 15 sec/kb per ciclo e aumentarlo a 30-60 sec/kb per gli ampliconi o i templati difficili.
• I tamponi KAPA2G contengono MgCl₂ 1,5 mM a 1X.
• Si può aggiungere ulteriore MgCl₂ usando la soluzione di MgCl₂ 25 mM fornita nel kit.
• Il tampone A KAPA2G è ottimizzato per resa, specificità e sensibilità elevate.
• Il tampone B KAPA2G è consigliato per campioni con template contaminati da inibitori.
• Il tampone GC KAPA2G è consigliato per PCR ricche in GC (>70% GC).
• L′enhancer KAPA 1 può essere usato con i tamponi A o B KAPA2G, soprattutto per i saggi ricchi in GC.
• I prodotti di reazione presentano una coda 3′-dA e possono essere clonati per diventare vettori di clonazione TA.

Qualità

È confermato che ogni lotto di DNA polimerasi KAPA2G Robust HotStart contiene il <2% di proteina contaminante (confermato con saggio Agilent Protein 230). I kit per PCR KAPA2G Robust HotStart sono sottoposti a rigorosi test di controllo di qualità, sono privi di attività contaminanti eso ed endonucleasiche e soddisfano stringenti criteri per quanto riguarda la contaminazione da DNA.

Nota sulla preparazione

Assicurarsi sempre che i componenti siano completamente scongelati e amalgamati prima dell′uso. Per l′uso a breve termine, conservare a 4 °C al massimo per un mese. Riportare a -20 °C per lo stoccaggio a lungo termine. Se tutti i componenti sono stati maneggiati con cura e non sono stati contaminati, si può prevedere che il kit non venga compromesso se inavvertitamente lasciato a temperatura ambiente per un breve periodo di tempo (fino a 3 giorni). Si raccomanda di non conservare a lungo termine a temperatura ambiente e a 4 °C. Si ricorda che i reagenti conservati a temperature superiori a -20 °C sono più inclini alla degradazione in caso di contaminazione durante l′uso. Pertanto, la conservazione a tali temperature avviene a rischio e pericolo dell′utilizzatore.

Altre note

Solo per fini di ricerca. Non usare in procedure diagnostiche.

Note legali

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

Solo come componenti del kit

• KAPA2G Robust Standard or HotStart^® DNA Polymerase 5 U/μL
• 5X KAPA2G Buffer A
• 5X KAPA2G Buffer B
• 5X KAPA2G GC Buffer with MgCl₂
• 5X KAPA Enhancer 1
• MgCl₂ 25 mM

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS07,GHS08
• Avvertenze: Warning
• Indicazioni di pericolo: H302,H371,H412
• Consigli di prudenza: P260 - P264 - P270 - P273 - P308 + P311 - P501
• Classi di pericolo: Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - STOT SE 2
• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): does not flash
• Punto d’infiammabilità (°C): does not flash