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Miscela KAPA2G Fast Multiplex

suitable for PCR, 2 ×

• Sinonimo/i: PCR, PCR multiplex, multiplex
• Codice UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.55

Proprietà

• Durata: ≤12 mo.
• Livello qualitativo: 100
• Confezionamento: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5801); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5802)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• Concentrazione: 2 ×
• tecniche: PCR: suitable
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

I kit per PCR KAPA2G Fast Multiplex contengono un enzima di seconda generazione (2G) ricavato da un processo di evoluzione mirata. La DNA polimerasi KAPA2G FAST HotStart^® ha una formulazione hot start mediata da anticorpi messa a punto per offrire una maggiore processività e rapidità, con velocità di estensione significativamente più elevate rispetto alla Taq DNA polimerasi wild-type. Oltre alla velocità, KAPA2G Fast assicura resa e sensibilità maggiori rispetto agli altri enzimi, consentendo una PCR multiplex più uniforme.
I kit per PCR KAPA2G Fast HotStart sono stati concepiti per una PCR rapida, con tempi di reazione totali più brevi del 20-70% rispetto a quelli dei saggi PCR tradizionali eseguiti con Taq DNA polimerasi wild-type. Questo risultato può essere ottenuto senza sacrificare le prestazioni della reazione e non richiede termociclatori o consumabili per PCR speciali.

Applicazioni

La miscela KAPA2G Fast Multiplex è stata utilizzata per:

• tipizzazione di organismi transgenici[1]
• amplificazione di microsatelliti
• tipizzazione e rilevamento di patogeni[2]
• amplificazione di frammenti di DNA multipli per la genotipizzazione dei polimorfismi a singolo nucleotide (SNP)
• PCR semi quantitativa[3][4]
• 3-plex PCR[5]

Azioni biochim/fisiol

I frammenti di DNA generati con la DNA polimerasi KAPA2G Fast hanno le stesse caratteristiche dei frammenti di DNA generati con Taq DNA polimerasi wild-type e possono essere utilizzati per il sequenziamento, la digestione con enzimi di restrizione e i clonaggi. Come la Taqwild-type, la KAPA2G Fast possiede le attività 5'→3′ polimerasica e 5'→3' esonucleasica ma non possiede alcuna attività 3'→5′ esonucleasica (proofreading). La fedeltà della KAPA2G Fast è simile a quella della Taqwild-type; ha un tasso di errore di circa 1 errore ogni 1,7 x 10⁵ nucleotidi incorporati. I prodotti di PCR generati con KAPA2G Fast hanno una coda 3'-dA e possono quindi essere clonati in vettori di clonaggio TA.

Caratteristiche e vantaggi

Migliore sensibilità, specificità e resa

• Rappresentazione uniforme di tutti gli ampliconi
• PCR multiplex efficace anche con bersagli difficili ricchi di GC

Maggiore velocità senza ripercussioni sulla performance

• Riduzione del 60% del tempo di ciclaggio
• Tempi di estensione di soli 15 secondi

Note rapide:

• La miscela KAPA2G Fast Multiplex contiene la DNA polimerasi ingegnerizzata KAPA2G Fast HotStart per una PCR multiplex rapida ed efficiente.
• La miscela KAPA2G Fast Multiplex contiene un tampone ottimizzato per la PCR multiplex, con 0,2 mM di ciascun dNTP e 3 mM di MgCl₂ (alla concentrazione 1X).
• Utilizzare 0,2 μM di ogni primer e 10-100 ng di templato di DNA per reazione.
• Eseguire l′annealing a 60 °C per 30 secondi.
• Eseguire l′estensione per 15 secondi, allungando la durata per ampliconi più lunghi e/o reazioni con forte multiplex.

Qualità

Ogni lotto di DNA polimerasi KAPA2G Fast HotStart contiene <2% di proteine contaminanti (confermato con saggio Agilent Protein 230). I kit per PCR KAPA2G Fast Multiplex sono sottoposti a rigorosi controlli di qualità, sono esenti da attività contaminanti delle esonucleasi ed endonucleasi e soddisfano stringenti criteri per quanto riguarda i livelli di contaminazione del DNA.

Nota sulla preparazione

Assicurarsi sempre che il prodotto sia stato completamente scongelato e miscelato prima dell′uso. I reagenti possono essere conservati a 4 °C per l′uso a breve termine (fino a un mese). Riportare a -20 °C per la conservazione a lungo termine. A condizione che la miscela ReadyMix sia stata manipolata con cautela e non abbia subito alcuna contaminazione, il kit non è soggetto a compromissione se lasciato (non intenzionalmente) a temperatura ambiente per un breve periodo di tempo (fino a 3 giorni). Si sconsiglia la conservazione prolungata a temperatura ambiente e a 4 °C. Si ricorda che i reagenti conservati a temperature superiori a -20 °C sono più inclini alla degradazione in caso di contaminazione durante l′uso. Pertanto, la conservazione a tali temperature avviene a rischio e pericolo dell′utilizzatore.

Altre note

Per soli scopi di ricerca. Non usare a scopo diagnostico.

Note legali

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

Solo come componenti del kit

• KAPA2G Fast HotStart^® DNA Polymerase
• Reaction buffer
• dNTPs
• MgCl₂ 3 mM

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS07,GHS08
• Avvertenze: Warning
• Indicazioni di pericolo: H302,H371
• Consigli di prudenza: P260 - P264 - P270 - P301 + P312 + P330 - P308 + P311 - P501
• Classi di pericolo: Acute Tox. 4 Oral - STOT SE 2
• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): does not flash
• Punto d’infiammabilità (°C): does not flash