MAB3420

Anticuerpo anti-Tau-1, clon PC1C6

clone PC1C6, Chemicon^®, from mouse

• Sinónimos: Anti-Tau Antibody
• UNSPSC Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Propiedades

• biological source: mouse
• Quality Level: 100
• antibody form: purified antibody
• clone: PC1C6, monoclonal
• species reactivity: human, rat, bovine
• packaging: antibody small pack of 25 μg
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): immunofluorescence: suitable; immunohistochemistry: suitable; western blot: suitable
• isotype: IgG2a
• NCBI accession no.: NM_005910.3; NM_016834.2; NM_016835.2; NM_016841.2
• UniProt accession no.: P10636
• shipped in: dry ice
• Storage temp.: −20°C
• target post-translational modification: unmodified

Descripción

General description

Se ha observado que Tau, una proteína de unión a microtúbulos que sirve para estabilizar los microtúbulos en los axones en crecimiento, se encuentra hiperfosforilada en los filamentos helicoidales emparejados (PHF), el principal componente fibroso de las lesiones neurofibrilares asociadas con la enfermedad de Alzheimer. Se cree que la hiperfosforilación de Tau es el evento crítico que conduce al ensamblaje de los PHF. Se han identificado seis isoformas de la proteína Tau, todas ellas fosforiladas por la glucógeno sintasa cinasa 3 (GSK 3). Ubicación celular y subcelular: In situ, el anti-tau-1 tiene una especificidad estricta por los axones de las neuronas. El anticuerpo no tiñe los cuerpos celulares ni las dendritas de las neuronas, tampoco tiñe ningún otro tipo de célula (4). Sin embargo, esta especificidad intracelular in vivo no se mantiene en cultivo: el anti-tau-1 tiñe el axón, los cuerpos celulares y las dendritas de las neuronas de hipocampo de rata en cultivo (5). Originalmente se pensaba que la especificidad del anti-tau-1 representaba la expresión restringida de tau en los axones. Estudios posteriores revelaron que esta especificidad depende del estado de fosforilación. En muestras desfosforiladas (muestras tratadas con fosfatasa alcalina) el anti-tau-1 tiñe los astrocitos, las células gliales perineuronales y los axones, los cuerpos celulares y las dendritas de las neuronas, mientras que en muestras no tratadas, el anti-tau-1 tiñe sólo los axones (6). (El epítopo reconocido por el anti-tau-1 está probablemente en o cerca de un sitio fosforilado).

Specificity

El anticuerpo anti-Tau-1 se une a todas las especies electroforéticas conocidas de tau en cerebro humano, de rata y bovino (SDS-PAGE unidimensional). Sin embargo, hay cierto sesgo no fosforilado con el clon PC1C6, ya que parece reconocer sólo los sitios de serina desfosforilada en 195, 198, 199 y 202 {Szendrei, et al 1993;&http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi-cmd=Retrieve db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=7680727}. Consulte también Billingsley & Kincaid, 1997 Biochem J 323:577-591 si desea más información de cartografía en PC1C6.

Immunogen

Proteínas asociadas a microtúbulos bovinos desnaturalizadas purificadas.

Application

Categoría de investigación
Neurociencia

El anticuerpo anti-Tau-1, clon PC1C6, es un anticuerpo contra la Tau-1 para utilizar en IH y WB con más de 65 citas en productos.

Inmunotransferencia Western: Las proteínas de los microtúbulos cerebrales bovinos purificadas mediante dos ciclos de montaje y desmontaje (9) se disuelven en tampón de muestras SDS-PAGE. Se cargan cinco microgramos de la preparación microtubular por carril en un gel de gradiente SDS-PAGE del 4% al 20% a lo largo de marcadores de peso molecular laterales (14,3 - 200 kD). Después de su separación mediante electroforesis, las proteínas se transfieren a la nitrocelulosa. La proteína Tau se detecta en una serie de 5 bandas (52-68 kD) con aproximadamente 5 ng/ml de anti-tau1.

Inmunofluorescencia: una dilución de 1:1000 de este anticuerpo detectó la proteína Tau en neuronas primarias de ratón. (Basnet, N., et al. (2018). Nat. Cell Biol. 20(10); 1172-1180.

Immunohistoquímica: 5 μg/ml; tiñe principalmente los axones en el tejido; sin embargo, en cultivo la expresión de Tau no se limita a los axones.

El usuario debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.

Protocolo de inmunohistoquímica

Desfosforilación de cortes de tejido (opcional)

Se recomienda desfosforilación con fosfatasa alcalina para la tinción de los ovillos neurofibrilares en el tejido cerebral de Alzheimer con anti-tau-1 (6). Este tratamiento cambia el patrón de tinción del anti-tau-1 para incluir los cuerpos celulares, las dendritas y los axones de las neuronas. En muestras sin tratar, el anti-tau-1 tiñe sólo los axones.

1. Incube los cortes de tejido a +32°C durante 2,5 horas con agitación constante en la siguiente disolución: Tris-HCl 100 mM, pH 8,0; 130 unidades/ml de fosfatasa alcalina, PMSF 1 mM, 10 μg/ml de pepstatina y 10 μg/ml de leupeptina.

2. Enjuague dos veces los cortes, 3 minutos por enjuague, con Tris-HCl 100 mM, pH 8,0.

Tinción anti-tau-1

1. Bloquee la unión inespecífica incubando los cortes en PBS que contenga un 1 % (v/v) de suero animal normal y un 0,03 % (p/v) de Triton X-100. El suero animal debe proceder de la misma especie que el anticuerpo secundario.

2. Enjuague 3 veces con PBS, 3 minutos por enjuague.

3. Incube los cortes con anti-tau-1, aproximadamente 5 μg/ml, diluido en PBS que contenga un 1 % (v/v) de suero animal normal.

4. Lave con PBS, cambiando la disolución 3 veces en un período de 3 minutos.

5. Detecte con un sistema convencional de detección de anticuerpos secundarios (10-13).

Subcategoría de investigación
Enfermedades neurodegenerativas

Target description

5 bandas (52–68 kDa)

Linkage

Sustituye a: AB1512

Physical form

Presentación: Purificada

Proteína A purificada

Tampón fosfato 0,02 M, pH 7,6, NaCl 0,25 M y azida sódica al 0,1 %

Storage and Stability

Mantener durante 1 año a -20°C desde la fecha de envío. Distribuir en alícuotas para evitar congelaciones y descongelaciones repetidas. Para la recuperación máxima del producto, debe centrifugarse el vial original después de descongelar y antes de retirar la tapa.

Analysis Note

Control
Tejido cerebral de Alzheimer (se recomienda desfosforilación con fosfatasa alcalina para la tinción de los ovillos neurofibrilares del tejido cerebral de Alzheimer) o células de glioblastoma T98G humanas

Other Notes

Concentración: Para conocer la concentración específica del lote, consulte el certificado de análisis.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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