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Kit Magna per MeRIP della m6A - Analisi della N6-Metiladenosina a livello del trascrittoma

• Sinonimo/i: Kit Magna per MeRIP della m6A, Kit di profilazione m6A
• Codice UNSPSC: 41105331
• NACRES: NA.84

Proprietà

• Livello qualitativo: 300

Descrizione

Descrizione generale

La N6-metiladenosina (m6A) rappresenta un'abbondante modificazione dell'RNA conservata in molte specie diverse, dalle piante ai lieviti, ai mammiferi. Simile alla modificazione della 5-metilcitosina (5-mc) del DNA, l'm6A è una modificazione chimica reversibile dell'RNA. Le modificazioni dell'RNA m6A sono un argomento emergente nel controllo delle transizioni del destino cellulare nelle cellule staminali embrionali dei mammiferi. L'm6A è una delle modificazioni più diffuse sia negli mRNA che negli RNA non codificanti negli eucarioti, con una stima di 12.000 siti m6A in oltre 7.000 geni. Il marcatore è depositato da un eterodimero di proteine 3 e 14 simili alla metiltransferasi (Mettl3 e Mettl14) e può essere rimosso dagli enzimi RNA demetilasi FTO e ALKBH5. Il gene FTO associato al rischio di obesità codifica la prima demetilasi m6A identificata. Le mutazioni di questo gene sono state associate a un aumento del rischio di obesità e diabete di tipo II. Recentemente, l'alterazione dello stato di regolazione dell'm6A ha portato a una prolungata espressione del gene Nanog nelle cellule ES e all'incapacità di uscire dalle fasi di autorinnovamento verso la differenziazione.

L'immunoprecipitazione (MeRIP) dell'RNA metilato (m6A) è un metodo che consente di monitorare lo stato dell'm6A e mappare la posizione delle modificazioni dell'RNA m6A a livello del trascrittoma. Il kit Magna per MeRIP della m6A utilizza il metodo MeRIP per consentire l'identificazione e la caratterizzazione delle modifiche dell'RNA m6A a livello del trascrittoma. Nel saggio MeRIP, l'RNA subisce una frammentazione chimica che lo divide in frammenti di 100 nucleotidi o meno, seguita dall'immunoprecipitazione magnetica con un anticorpo monoclonale specifico per m6A. Dopo l'immunoprecipitazione, i frammenti di RNA isolati possono essere sottoposti a qRT-PCR o a sequenziamento dell'RNA (MeRIP-seq). Il protocollo semplificato è facile da eseguire e consente di ottenere risultati con elevati rapporti S/N.

Applicazioni

Il kit Magna per MeRIP della m6A semplifica il metodo di MeRIP (immunoprecipitazione dell'RNA metilato) per consentire l'identificazione e la caratterizzazione dei siti di metilazione dell'RNA m6A (N6-metiladenosina) a livello del trascrittoma. Adatto per le analisi MeRIP-Seq e qRT-PCR di trascritti di RNA metilato.

Componenti

Tampone per la frammentazione dell'RNA 10X (0,5 mL); EDTA 0,5 M (0,5 mL); tampone IP 5X (15 mL); miscela di sferette magnetiche coniugate con proteine A/G (315 μL); anti-N6-metiladenosina (m6A), clone 17-3-4-1 (100 μ); inibitore della RNasi (90 μL); IgG di topo normale (125 μg); primer di controllo positivo dell'EEF1A1 umano per MeRIP (75 μL); primer di controllo negativo dell'EEF1A1 umano per MeRIP (75 μL)

Esclusione di responsabilità

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Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS07
• Avvertenze: Warning
• Indicazioni di pericolo: H315,H319,H412
• Consigli di prudenza: P264 - P273 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338 - P332 + P313
• Classi di pericolo: Aquatic Chronic 3 - Eye Irrit. 2 - Skin Irrit. 2
• Codice della classe di stoccaggio: 10 - Combustible liquids