As cited in the product listing and datasheet, this product in solution shows an approximate loss of activity of 10% when stored in aliquots at −20 °C for 1 week. Studies at lower dilutions have not been performed. Typically, solutions stored at higher concentrations are the most stable.
D5025
Désoxyribonucléase I from bovine pancreas
Type IV, lyophilized powder, ≥2,000 Kunitz units/mg protein
Synonyme(s) :
DNase I, Désoxyribonucléate-5′-oligonucléotido-hydrolase
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About This Item
Produits recommandés
Source biologique
bovine pancreas
Niveau de qualité
Type
Type IV
Forme
lyophilized powder
Activité spécifique
≥2,000 Kunitz units/mg protein
Poids mol.
~31 kDa
Produit purifié par
chromatography
Composition
Protein, ≥80%
Technique(s)
DNA purification: suitable
Solubilité
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear, colorless
Adéquation
suitable for molecular biology
Application(s)
diagnostic assay manufacturing
diagnostic assay manufacturing
Activité étrangère
Chymotrypsin ≤0.5%
Protease ≤0.05%
RNase ≤0.02%
Conditions d'expédition
wet ice
Température de stockage
−20°C
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Application
La DNase I est utilisée en première étape pour couper l′ADN en vue de l′incorporation de bases marquées dans l′ADN. L′enzyme proposée par Sigma a été utilisée pour le traitement de tissus de cerveaux de rat. Cette étude a montré que la croissance axonale sur les astrocytes n′est pas inhibée par les oligodendrocytes.[1] Dans une autre étude, des échantillons fixés et décongelés d′E. coli ont été digérés avec la DNase I de Sigma avec d′autres enzymes. La digestion a été réalisée avant la perméabilisation et la coloration des acides nucléiques.[2]
La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a été utilisée dans une étude pour l′analyse des nucléases de Bacillus subtilis par zymogramme à deux dimensions. La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a également été utilisée dans une étude évaluant l′effet d′agents se liant dans le petit sillon ou le gros sillon de l′ADN et d′agents intercalants sur l′association avec l′ADN des protéines RecA et désoxyribonucléase I, qui se lient dans le petit sillon.
Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.
Actions biochimiques/physiologiques
La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester situées à côté de pyrimidines et produit des polynucléotides comportant des 5′-phosphates terminaux. En présence de Mg2+, la DNase I clive indépendamment chaque brin d′ADN et les sites de clivage sont répartis au hasard. Les deux brins d′ADN sont clivés à peu près au niveau du même site en présence de Mn2+.[3] Il a été montré que le pH optimal se situe entre 7 et 8. Les cations divalents tels que Mn2+, Ca2+, Co2+ et Zn2+ activent l′enzyme.[4] Une concentration de Ca2+ 5 mM permet de stabiliser l′enzyme vis-à-vis de la digestion protéolytique. La DNase 1 de pancréas de bovin est composée de quatre éléments A, B, C et D, pouvant être distingués par chromatographie, dans des rapports molaires respectifs pour A, B et C de 4/1/1. D est présent en quantités très faibles.[5] Le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS)[6] et l′actine[7] sont connus pour inhiber l′activité enzymatique.
Définition de l'unité
Une unité Kunitz produit une ΔA260 de 0,001 par minute et par ml à pH 5,0 et 25 °C, en utilisant comme substrat de l′ADN de type I ou III.
Forme physique
Poudre lyophilisée contenant du chlorure de calcium
Notes préparatoires
Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu′elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d′activité peut être d′environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active jusqu′à cinq heures à 60 °C entre pH 5 et pH 7, et devient inactive après < 10 minutes à 68 °C. Sa perte d′activité est de 6 %/heure dans un tampon d′acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.
Remarque sur l'analyse
Protéine déterminée par la réaction du biuret.
Inhibiteur
Réf. du produit
Description
Tarif
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Resp. Sens. 1
Code de la classe de stockage
11 - Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 3
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
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J W Fawcett et al.
Journal of cell science, 103 ( Pt 2), 571-579 (1992-10-01)
Axon growth in vitro may be inhibited by contact with oligodendrocytes, but most axons grow readily on the surface of astrocyte monolayers. Since both cell types are in close contact with one another in the damaged nervous system, we have
Enzymes of Molecular Biology
Weir, A. F.
Methods in Molecular Biology, 16 (1993)
Chii J Chan et al.
Biophysical journal, 112(6), 1063-1076 (2017-03-30)
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Protocoles
To standardize a procedure for the enzymatic assay of Deoxyribonuclease I.
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Good afternoon, if the stock concentration of 10mg/ml may loose 10% of its activity after one week, I was wondering if it is okey regarding stability to keep 500ug/ml aliquots at -20ºC for several weeks.
1 answer-
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Is Kunitz unit same as unit here? I have seen some papers and they have U/ml for DNase. How can i conver it?
1 answer-
Product D5025, Deoxyribonuclease I is given in Kunitz units. This product is a powder. When reconstituting the product with a solution, for example 15,000 Kunitz units in 1 ml of 0.15 M NaCl the end-user will have 15,000 Kunitz units/ml.
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What concentration of Product D5025, Deoxyribonuclease I (DNase I), is required to remove DNA from solutions?
1 answer-
DNA can be removed from preparations by incubation with 20 - 50 ug DNAse I in the presence of 50 mM Tris-HCl buffer, pH 7.5, 10 mM magnesium chloride, at 37°C. for 60 min.
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What is the Department of Transportation shipping information for this product?
1 answer-
Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product.
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How should I prepare a solution of Product D5025, DNAse I?
1 answer-
This enzyme can be reconstituted in 0.15 M NaCl at a concentration of 10 mg/ml.
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How do Deoxyribonuclease I (DNase I), products D5025 and D4527 differ from each other?
1 answer-
Both of these products have the same specific activity (>2000 units/mg protein) for Dnase I. The enzyme impurity levels for each, however, are different. D5025 has the following impurity specification: Chymotrypsin (<0.5%), Protease (<0.05%), and RNase (<0.02%). The impurity specifications for D4527 are: Chymotrypsin (<0.01%), Protease (<0.005%), and RNase (<0.01%).
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Are stock solutions of Product D5025, Deoxyribonuclease I (DNase I), stable?
1 answer-
Solutions of DNAse I (10 mg/ml) in 0.15 M NaCl may lose 10% of its activity when stored for a week in aliquots at -20°C. The same solutions stored in aliquots at 2 - 8°C. lose approximately 20% activity.
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How can I convert units of Product D5025, Deoxyribonuclease I (DNase I), to mass?
1 answer-
The mg of solid for each unit package size will be indicated on the label of the package. For a particular lot, you can calculate the specific activity in units per mg solid by multiplying the specific activity in units per mg protein by the percent protein divided by 100.
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