Rezeptur & Video TAE- & TBE-Laufpuffer

Was sind Tris-Acetat-EDTA und Tris-Borat-EDTA?

Tris-Acetat-EDTA (TAE) und Tris-Borat-EDTA (TBE) sind die beiden am häufigsten in der Nukleinsäureelektrophorese eingesetzten Laufpuffer. Als Puffer haben sie einen relativ konstanten pH-Wert und sind aufgrund ihrer Wasserstoffionenkonzentration in der Lage, Elektrizität zu leiten. Diese Eigenschaften sind für die Gelelektrophorese erforderlich, in der Proteine durch elektrische Ladung getrennt werden.

Vorbereiten von Laufpuffern

TBE und TAE werden meist aus ihren Bestandteilen in Labor-Stammlösungen gemischt. Beide Puffer können in der Gebrauchskonzentration oder als Pulver oder Konzentrat erworben werden, das einfach durch Verdünnung hergestellt wird.

Informationen zur Herstellung von TAE und TBE in gängigen Stammlösungskonzentrationen sind in den nachfolgenden Rezepturen enthalten. Unser Pufferrechner kann ebenfalls dabei unterstützen, die richtige Verdünnung (oder Umrechnung) für verschiedene Puffer von der Stammlösung in eine gewünschte Molarität und ein gewünschtes Volumen zu finden.

Video: TAE and TBE Buffers for Gel Electrophoresis (TAE- und TBE-Puffer für die Gelelektrophorese)

Informieren Sie sich über gängige Rezepturen für TAE- und TBE-Pufferlösungen und erfahren Sie, welcher Laufpuffer optimal für Ihre Nukleinsäure-Gelelektrophorese-Anwendung ist. Chris Lemke, Spezialist für Forschungstechnologie, mischt Stammlösungen und gibt hilfreiche Tipps zur Auswahl von Puffern.

Dieses Video wurde in Zusammenarbeit mit Seeding Labs erstellt, einer gemeinnützigen Organisation, die Universitäten und Forschungsinstitute in Entwicklungsländern mit hochwertigen, überzähligen Laborgeräten, Schulungen und professionellem Austausch unterstützt.

TAE-Puffer 50x Rezeptur Stammlösung

• 242 g Tris-Base in bidestilliertem H₂O
  
• 57,1 ml Eisessig
• 100 ml 0,5 M EDTA-Lösung (pH 8,0)

Volumen auf 1 l einstellen.

10x TAE-Rezeptur

Für 1 l 10x-Lösung,

• 48,5 g Tris
• 11,4 ml Eisessig
• 20 ml 0,5M EDTA (pH 8,0)

1x TAE-Rezeptur

Verdünnung 1:10

• 0,4 M Tris-Acetat (pH etwa 8,3)
  
• 0,01 M EDTA

unter Verwendung von Reinstwasser.

TBE-Puffer 10x Rezeptur Stammlösung

• 108 g Tris-Base
• 55 g Borsäure
• 900 ml bidestilliertes H₂O
• 40 ml 0,5 M EDTA-Lösung (pH 8,0)

Volumen auf 1 l einstellen.

1x TBE-Vorbereitung

10x-konzentrierten TBE-Puffer 10-fach mit Reinstwasser verdünnen.

Die finale Lösung soll enthalten:

• 0,13 M Tris (pH 7,6)
• 45 mM Borsäure
• 2,5 mM EDTA

Tipps für die Puffervorbereitung

• Falls eine Ausfällung vorhanden ist, auf 37 °C erwärmen und vor der Verdünnung mischen, bis diese sich vollständig aufgelöst hat.
  
• Es wird empfohlen, die Gebrauchslösungen vor der Verwendung in einfacher Konzentration durch einen 0,2-mm-Filter zu filtern.
• Gebrauchslösungen in einfacher Konzentration sind bei Lagerung bei Raumtemperatur bis zum Verfallsdatum auf der Verpackung haltbar. Verwerfen, wenn der Puffer trüb oder verfärbt ist.

Vergleichsdiagramm TAE vs. TBE

	TBE-Puffer	TAE-Puffer	Hinweise
Pufferkapazität	Hoch	Niedrig	TAE erschöpft sich bei längerer oder wiederholter Elektrophorese.
Migration von DNA	Langsam	Schnell	TAE hat eine bessere Konduktivität.
Auflösung	Hohe Auflösung von Fragmenten < 2KB DNA	Hohe Auflösung von Fragmenten > 2KB DNA	TBE unterstützt Quervernetzung von Agarose.
Enzyminhibitor	Ja	Nein	Durch Borat aus TBE werden viele Enzyme gehemmt.
Kosten	Höher	Niedriger

Anwendungen

Tris-Acetat-EDTA (TAE)-Laufpuffer und Tris-Borat-EDTA (TBE) sind in der DNA-Agarose-Gelelektrophorese häufig verwendete Puffer, die besonders bei präparativen Arbeiten Vorteile bieten.¹

Im Vergleich zu Tris-Borat-EDTA (TBE)- und Tris-Phosphat-EDTA (TPE)-Puffern läuft doppelsträngige DNA in TAE tendenziell schneller. Da TAE jedoch die geringste Pufferkapazität der drei Puffer hat, kann die Pufferkapazität bei längerer Elektrophorese erschöpft werden. Die Zirkulation oder der Austausch von Puffern kann hier Abhilfe schaffen.

TAE

Der 1x TAE-Puffer wird sowohl im Agarosegel als auch als Laufpuffer verwendet. Für eine maximale Auflösung werden Spannungen < 5 V/cm (Abstand zwischen den Elektroden der Einheit) empfohlen.²

TAE-Puffer wird in der Agarose-Gelelektrophorese von RNA verwendet.^3,4

Es wurde eine Studie zur Mobilität freier DNA-Lösung in TAE bei verschiedenen Pufferkonzentrationen in Gegenwart und Abwesenheit von zugesetztem NaCl durchgeführt.⁵

Es wird die Verwendung von TAE-Puffer in einem denaturierenden Gradienten-Gelelektrophoreseverfahren für eine breit angelegte Mutationsanalyse beschrieben.

TBE

TBE-Puffer wird für die Auflösung von RNA- und DNA-Fragmenten empfohlen, die kleiner als 1500 bp sind.

TBE wird sowohl bei nicht-denaturierenden als auch bei denaturierenden (7 M Harnstoff) Gelen verwendet.

Es wird auch routinemäßig für Gele in der automatischen Sequenzierung von DNA verwendet.

Für die Pulsfeld-Gelelektrophorese (PFGE) wird Tris-Borat-EDTA-Puffer eingesetzt. Für eine maximale Auflösung werden Spannungen von weniger als 5 V/cm empfohlen.

Bionic Puffer stellt eine einzigartige Alternative zu herkömmlichen TBE (Tris-Borat-EDTA)- und TAE (Tris-Acetat-EDTA)-Elektrophoresepuffern dar. Bionic Pufferermöglicht:

• Eine Bandenauflösung in Minuten
• Einen Durchlauf von Gelen in zwei- bis dreifacher Geschwindigkeit von TBE/TAE
• Schärfere Bänder in kürzerer Zeit
• Verwendung mit vorgegossenen Gelen

Literatur

1. Ogden RC, Adams DA. 1987. [8] Electrophoresis in agarose and acrylamide gels.61-87. https://doi.org/10.1016/0076-6879(87)52011-0

2. Sambrook, J, Russell, DW. 2001. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, . 3rd ed., pp. 5.8, 5.76, A1.16.. CSHL Press (Cold Spring Harbor, NY), .

3. Loening U. 1967. The fractionation of high-molecular-weight ribonucleic acid by polyacrylamide-gel electrophoresis. 102(1):251-257. https://doi.org/10.1042/bj1020251

4. Masters DB. 1992. High sensitivity quantification of RNA from gels and autoradiograms with affordable optical scanning. Biotechniques. 12(6):902-906, 908-911.

5. Stellwagen E, Stellwagen N. 2002. The free solution mobility of DNA in Tris-acetate-EDTA buffers of different concentrations, with and without added NaCl. Electrophoresis. 23 (12):1935-1941.

6. Hayes V. 1999. Improvements in gel composition and electrophoretic conditions for broad-range mutation analysis by denaturing gradient gel electrophoresis. 27(20):29e-29. https://doi.org/10.1093/nar/27.20.e29