Saccharose in Erfrischungsgetränken

Reflektometrische Bestimmung nach enzymatischer Umwandlung.

Einleitung

Chemische Analysen von Lebensmitteln und Getränken werden durchgeführt, um einen sicheren Verzehr sowie die Produktqualität und Produktintegrität zu gewährleisten. Im Rahmen der Qualitätskontrolle müssen die Hersteller von Erfrischungsgetränken die Konzentration von Zucker (Saccharose) in ihren Endprodukten und während des Herstellungsprozesses überwachen. In diesem Anwendungshinweis wird eine Methode zur Bestimmung von Saccharose in Erfrischungsgetränken mit dem Reflectoquant^® Saccharose-Test und dem Reflektometer RQflex^® 20 beschrieben.

Versuchsmethode

Saccharose wird durch Saccharosephosphorylase in Fructose und Glucose-1-phosphat gespalten. Letzteres wird durch Phosphoglucomutase in Glucose-6-phosphat umgewandelt. Dieses wird wiederum durch NAD im Rahmen der katalytischen Wirksamkeit der Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase zu Gluconat-6-phosphat oxidiert. In Gegenwart von Diaphorase reduziert das dabei gebildete NADH ein Tetrazoliumsalz zu einem blauen Formazan, das reflektometrisch bestimmt wird.

Reagenzien, Geräte und Materialien

Testsätze

• Saccharose-Testmethode: reflektometrisch mit Teststäbchen und Reagenz 0,25 - 2,50 g/l Reflectoquant^® (1.16141)

Geräte

• Reflectometer RQflex^® 20 Reflectoquant^® (1.17246)*

*Dieser Anwendungshinweis bezieht sich auf RQflex^® 20 und alle eingestellten Geräte (RQflex^® 10, RQflex^® plus)

Probenvorbereitung

Die Probe abhängig vom zu erwartenden Saccharosegehalt verdünnen, z. B. für eine Verdünnung von 1:100 0,5 ml der Probe in einen 50-ml-Messkolben pipettieren und mit destilliertem Wasser bis zur Marke auffüllen. Die Messergebnisse sollen möglichst in der Mitte des Messbereichs liegen. Es kann erforderlich sein, den Verdünnungsschritt mit einer weiteren Verdünnung zu wiederholen.

Instrumentelle Analytik

• 10 ml destilliertes Wasser, 5 Tropfen Reagenz Sa-1 und 1 ml der entsprechend verdünnten Probe in das Testglas geben und schwenken.
• Die START-Taste des Reflektometers drücken und gleichzeitig beide Reaktionszonen des Teststäbchens für ca. 2 Sekunden in die Messprobe tauchen (20 - 26 °C).
• Überschüssige Flüssigkeit über die lange Kante des Stäbchens auf ein saugfähiges Papiertuch ablaufen lassen.
• Das Teststäbchen sofort in den Stäbchenadapter einsetzen.
• Das Teststäbchen wird nach 300 Sekunden im Reflektometer gemessen.

Der Messwert [g/l] wird automatisch gespeichert. (Siehe Bedienungsanleitung für RQflex^® und die Anwendungshinweise für den Reflectoquant^® Saccharose-Test.)

Serielle Messung

Nach der ersten Messung können durch Drücken der Starttaste beliebig viele weitere Messungen durchgeführt werden. Dies erfordert jedoch die Verwendung einer Stoppuhr, da die Countdown-Funktion des Reflektometers nur für die erste Messung verfügbar ist. Die Nachweiszonen des Teststäbchens müssen während der Reaktionszeit in geeigneter Weise vor Lichteinfall geschützt werden.

Berechnung

Saccharosegehalt [g/l] = Messwert [g/l] x Verdünnungsfaktor

Ergebnisse

Tabelle 1. Messwerte für Cola (Nennkonz. in Cola lt. Hersteller: 10,6 g/100 ml. Ergebnis HPLC: 10,5 g/100 ml

	Volumen von Cola	Verdünnungsfaktor	Saccharosegehalt in Verdünnung		Saccharose in 100 ml Cola
	ml/100 ml		g/l	g/100 ml
Verdünnung 1	0,30	333	0,32	10,7
Verdünnung 2	0,50	200	0,55	11,0
Verdünnung 3	0,75	133	0,76	10,1
Verdünnung 4	1,00	100	1,02	10,2
Verdünnung 5	1,25	80	1,20	9,6
Verdünnung 6	1,50	67	1,60	10,7
Verdünnung 7	1,75	57	1,71	9,8
Verdünnung 8	2,00	50	2,16	10,8
Verdünnung 9	2,25	44	2,24	10,0
			Mittelwert	10,3

Tabelle 2. Messwerte für Orangeade (Nennkonzentration in Orangeade lt. Hersteller 9,4 g/100 ml)

	Volumen von Orangeade	Verdünnungsfaktor	Saccharosegehalt in Verdünnung		Saccharose in 100 ml Orangeade
	ml/100 ml		g/l	g/100 ml
Verdünnung 1	0,30	333	0,28	9,3
Verdünnung 2	0,50	200	0,45	9,0
Verdünnung 3	0,75	133	0,68	9,0
Verdünnung 4	1,00	100	0,85	8,5
Verdünnung 5	1,25	80	1,09	8,7
Verdünnung 6	1,50	67	1,43	9,6
Verdünnung 7	1,75	57	1,50	8,6
Verdünnung 8	2,00	50	1,91	9,6
Verdünnung 9	2,25	44	2,11	9,3
Verdünnung 10	2,50	40	2,24	9,0
			Mittelwert	9,1