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PhasePrep™ BAC-DNA-Kit
Scalable method for isolating large-molecular weight plasmids
Synonym(e):
BAC-Kit
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About This Item
UNSPSC-Code:
41105501
NACRES:
NA.52
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Methode(n)
DNA extraction: suitable
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15-25°C
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Allgemeine Beschreibung
Das PhasePrep BAC-DNA-Kit bietet eine skalierbare und kostengünstige Lösung für die Isolierung von Plasmiden mit hohem Molekulargewicht, etwa von künstlichen Bakterienchromosomen (BAC, Bacterial Artificial Chromosomes) aus rekombinanten E. coli-Kulturen. Das Kit ist für Aufbereitungen in vier verschiedenen Größen geeignet und enthält ausreichend Reagenzien für 300-Mikro-, 180-Mini-, 30-Midi- oder 15-Maxi-Präparate. Aus rekombinanten Übernacht-E. coli-Kulturen mit 5, 40, 250 oder 500 ml Volumen können 2, 12, 50 oder 100 mg BAC-DNA gewonnen werden. Die aufgereinigte BAC-DNA enthält sehr geringe Mengen von Endotoxinen (≤10 EU/μg DNA).
Eine rekombinante E. coli-Kultur wird durch Zentrifugation geerntet und einem modifizierten alkalischen Lyseverfahren mit SDS unterzogen. Aus dem geklärten Lysat wird Nukleinsäure ausgefällt; Rest-RNA wird durch einen kurzen Verdau bei erhöhten Temperaturen mit einer RNase-Mischung entfernt. Endotoxine und andere Verunreinigungen werden mittels einfacher temperaturvermittelter Extraktion und Phasentrennung entfernt. Abschließend wird die BAC-DNA selektiv aus der Lösung ausgefällt.
Die gewonnene BAC-DNA liegt hauptsächlich in ihrer eng aufgewickelten Form vor und ist frei von Verunreinigungen mit RNA; sie ist für die sofortige Verwendung in Downstream-Anwendungen wie Sequenzierung, Restriktionsverdau, Klonen und PCR bereit.
Eine rekombinante E. coli-Kultur wird durch Zentrifugation geerntet und einem modifizierten alkalischen Lyseverfahren mit SDS unterzogen. Aus dem geklärten Lysat wird Nukleinsäure ausgefällt; Rest-RNA wird durch einen kurzen Verdau bei erhöhten Temperaturen mit einer RNase-Mischung entfernt. Endotoxine und andere Verunreinigungen werden mittels einfacher temperaturvermittelter Extraktion und Phasentrennung entfernt. Abschließend wird die BAC-DNA selektiv aus der Lösung ausgefällt.
Die gewonnene BAC-DNA liegt hauptsächlich in ihrer eng aufgewickelten Form vor und ist frei von Verunreinigungen mit RNA; sie ist für die sofortige Verwendung in Downstream-Anwendungen wie Sequenzierung, Restriktionsverdau, Klonen und PCR bereit.
Das PhasePrep™ BAC-DNA-Kit bietet eine skalierbare und kostengünstige Lösung für die Isolierung von Plasmiden mit hohem Molekulargewicht, etwa von künstlichen Bakterienchromosomen (BAC) aus rekombinanten E. coli-Kulturen. Das Kit ist für Aufbereitungen in vier verschiedenen Größen geeignet und enthält ausreichend Reagenzien für 300-Mikro-, 180-Mini-, 30-Midi- oder 15-Maxi-Präparate. Aus rekombinanten Übernacht-E. coli-Kulturen mit 5, 40, 250 oder 500 ml Volumen können 2, 12, 50 oder 100 mg BAC-DNA gewonnen werden. Die aufgereinigte BAC-DNA enthält sehr geringe Mengen von Endotoxinen (£10 EU/g DNA).
Eine rekombinante E. coli-Kultur wird durch Zentrifugation geerntet und einem modifizierten alkalischen Lyseverfahren mit SDS unterzogen. Aus dem geklärten Lysat wird Nukleinsäure ausgefällt; Rest-RNA wird durch einen kurzen Verdau bei erhöhten Temperaturen mit einer RNase-Mischung entfernt. Endotoxine und andere Verunreinigungen werden mittels einfacher temperaturvermittelter Extraktion und Phasentrennung entfernt. Abschließend wird die BAC-DNA selektiv aus der Lösung ausgefällt.
Eine rekombinante E. coli-Kultur wird durch Zentrifugation geerntet und einem modifizierten alkalischen Lyseverfahren mit SDS unterzogen. Aus dem geklärten Lysat wird Nukleinsäure ausgefällt; Rest-RNA wird durch einen kurzen Verdau bei erhöhten Temperaturen mit einer RNase-Mischung entfernt. Endotoxine und andere Verunreinigungen werden mittels einfacher temperaturvermittelter Extraktion und Phasentrennung entfernt. Abschließend wird die BAC-DNA selektiv aus der Lösung ausgefällt.
Anwendung
Das PhasePrep™ BAC-DNA-Kit wird verwendet, um künstliche Bakterienchromosomen (BAC, Bacterial Artificial Chromosomes) zu isolieren.[1][2][3]
Die gewonnene BAC-DNA liegt hauptsächlich in ihrer eng aufgewickelten Form vor und ist frei von Verunreinigungen mit RNA; sie ist für die sofortige Verwendung in Downstream-Anwendungen wie Sequenzierung, Restriktionsverdau, Klonen und PCR bereit.
Leistungsmerkmale und Vorteile
- Typischer DNA-Ertrag von 2–100 μg aus 5–500 ml Übernachtkultur
- Keine Phenol-Chloroform-Extraktion erforderlich
- Maximale Mikro- bis Maxi-Aufbereitungen mit ein und demselben Kit
- Kein langes Warten auf Tropfsäulen
- Typischer DNA-Ertrag von 2–100 μg aus 5–500 ml Übernachtkultur
- Maximale Mikro- bis Maxi-Aufbereitungen mit ein und demselben Kit
- Kein langes Warten auf Tropfsäulen
Sonstige Hinweise
Das PhasePrep™ BAC-DNA-Kit bietet eine hochgradig skalierbare, schnelle und kostengünstige Lösung für die Isolierung von Plasmiden mit hohem Molekulargewicht, etwa von künstlichen Bakterienchromosomen (BAC, Bacterial Artificial Chromosomes) aus rekombinanten E. coli-Kulturen.
Weitere Informationen finden Sie unter www.sigma-aldrich.com/genelutehp.
Rechtliche Hinweise
PhasePrep is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC
Signalwort
Danger
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Eye Irrit. 2 - Met. Corr. 1 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Zielorgane
Central nervous system
Lagerklassenschlüssel
8A - Combustible corrosive hazardous materials
Flammpunkt (°F)
Not applicable
Flammpunkt (°C)
Not applicable
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