HPPIKRO

High Pure-Plasmidisolierungs-Kit

Roche, pkg of 50 purifications (11754777001), pkg of 250 purifications (11754785001)

• UNSPSC Code: 41105500
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• manufacturer/tradename: Roche
• packaging: pkg of 250 purifications (11754785001), pkg of 50 purifications (11754777001)

Beschreibung

General description

Nukleinsäuren binden in Gegenwart von chaotropen Salzen (Guanidin-HCl) an Glasfaservlies. So kann das High-Pure-Filter-Röhrchen spezifisch Nukleinsäuren (sowohl DNA als auch RNA) immobilisieren, während sie von Kontaminanten befreit werden.

Kapazität: Die High-Pure-Spin-Filter-Röhrchen nehmen bis zu 700 μL Probenvolumen auf.
Probe: 0,5–4,0 mL E.-coli-Kulturen (entnommen bei einer Dichte von 1,5–5,0 A ₆₀₀ Einheiten/mL)

Plasmidisolierung im kleinsten Maßstab mit geringem bis mittlerem Durchsatz.

Mit dem High-Pure-Plasmidisolierungs-Kit wird purifizierte Plasmid-DNA in kleinen Mengen mithilfe alkalischer Lyse isoliert, einer häufig verwendeten Methode, bei der aus E. coli frei von RNA-Kontamination hochreine Plasmid-DNA entsteht.

Application

Mit dem High-Pure-Plasmidisolierungs-Kit werden bis zu 15 μg reine Plasmid-DNA von Bakterienkulturen für eine direkte Verwendung in den meisten molekularbiologischen Anwendungen hergestellt:

• PCR
• Sequenzierung
• Klonierung
• In-vitro-Transkription
• Restriktionsenzymverdau
• Zufallsprimer-Markierung

Features and Benefits

• Schnelle Aufreinigung von bis zu 24 Plasmidproben in <30 Minuten.
• Minimierter DNA-Verlust mit einem Kit, das ohne Ausfällung und ohne andere den DNA-Abbau fördernde Handhabungsschritte Kontaminanten entfernt.
• Verbesserte Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit für nachgelagerte Anwendungen mit einem Kit, das RNA und andere Unreinheiten entfernt, die dazu führen, dass Plasmid-DNA unvorhersehbar reagiert.
• Es werden keine schädlichen organischen Verbindungen wie Cesiumchlorid, Phenol, Chloroform und Ethidiumbromid benötigt.

Preparation Note

Zentrale Komponente des Kits ist alkalische Lyse zur Freisetzung von Plasmid-DNA von Bakterien. RNase entfernt die gesamte RNA aus dem Lysat. Nach Entfernen von Zellrückständen und (eingeschlossener) genomischer DNA durch Zentrifugation wird der verbleibende Überstand mit einem chaotropem Salz gemischt und auf das Glasfaservlies in einem High-Pure-Spin-Filter-Röhrchen aufgetragen. Unter den in diesem Verfahren verwendeten Pufferbedingungen bindet das Plasmid an das Glasfaservlies, kontaminierende Substanzen (wie Salze, Proteine und andere zelluläre Kontaminanten) jedoch nicht. Mit den schnellen Wasch- und Schleuderschritten werden alle diese Kontaminanten auf leichte Weise entfernt. Nach der Aufreinigung kann das Plasmid einfach in einen kleinvolumigen salzarmen Puffer oder Wasser eluiert werden.

Analysis Note

Plasmid pUC19 (4,5 μg) wird aus einer 1,5-mL-Suspension E. coli JM₈₃ gewonnen, die 16 Stunden lang auf LB-Medium mit Ampicillin zu einer Zelldichte von 5 A ₆₀₀ Einheiten/mL gewachsen ist. 1 μg der gereinigten Plasmid-DNA wird 1 Stunde lang bei +37 °C mit 5 Einheiten der Restriktionsendonuklease Eco RI inkubiert und dann mit Agarose-Gelelektrophorese analysiert. Die isolierte Plasmid-DNA ist ebenso empfindlich gegenüber Restriktionsendonuklease-Verdau wie Plasmid-DNA, die durch CsCl-Dichtegradientenzentrifugation isoliert wurde.

Other Notes

High-Pure-Technologie und Kieselsäure-Adsorptions-Kits

• Suspensionspuffer
• RNase A, Trockenpulver
• Lysepuffer
• Bindungspuffer
• Waschpuffer I
• Waschpuffer II
• Elutionspuffer
• High-Pure-Spin-Filter-Röhrchen (enthalten Glasfaservlies)
• Sammelröhrchen

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Sicherheitshinweise

• signalword: Danger
• wgk: WGK 1
• pictograms: GHS05,GHS07,GHS08
• hcodes: H302 + H332,H314,H334
• pcodes: P261 - P280 - P303 + P361 + P353 - P304 + P340 + P310 - P305 + P351 + P338 + P310 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Acute Tox. 4 - Acute Tox. 4 Oral - Eye Dam. 1 - Resp. Sens. 1 - Skin Corr. 1 Inhalation
• Lagerklasse: 8B - Non-combustible corrosive hazardous materials
• flash_point_f: Not applicabledoes not flash
• flash_point_c: Not applicabledoes not flash