Analyse de la santé cellulaire
Les réactifs, kits et outils d'analyse de la viabilité cellulaire permettent de mesurer des indicateurs généraux et spécifiques de la vigueur d'une culture de cellules. Les tests de viabilité peuvent être employés pour mesurer de manière générale la santé des cellules, ou pour évaluer les effets d'un traitement en parallèle de tests de cytotoxicité. Les tests de prolifération utilisent souvent la synthèse d'ADN et la division cellulaire comme mesures de l'activité métabolique des cellules, suite à l'application de conditions particulières ou de traitements. Les kits de cytotoxicité peuvent utiliser des résultats de bioréduction pour évaluer l'activité métabolique.
La contamination des cultures est l'une des barrières les plus courantes à l'obtention de cultures cellulaires fiables et efficaces. Même si certains contaminants peuvent être détectés par une inspection consciencieuse des cultures au microscope, les contaminants comme les mycoplasmes échappent à toute méthode de détection visuelle. Il est donc conseillé de cribler en routine les cultures à l'aide de kits et de réactifs qui permettent de détecter de manière fiable les contaminants microbiens. Les réactifs qui réduisent au minimum ou éliminent la contamination dès son apparition sont des éléments essentiels d'une salle de culture, qui renforcent les techniques aseptiques et les bonnes pratiques de salle de culture.
Notre gamme complète dédiée à l'étude de la santé cellulaire comprend les éléments suivants :
Tests de viabilité et de prolifération cellulaires
Les tests permettant de mesurer la prolifération et la viabilité cellulaires servent à surveiller la réponse et la santé des cellules en culture après un traitement par divers stimuli. Le choix d'une bonne méthodologie dépend du nombre et du type de cellules à évaluer, et du résultat attendu. Les tests de prolifération cellulaire peuvent suivre le nombre de cellules au cours du temps, le nombre de divisions cellulaires, l'activité métabolique, ou la synthèse d'ADN. Un comptage des cellules à l'aide de colorants de viabilité du type bleu de trypan ou calcéine AM peut fournir la vitesse de prolifération ainsi que le pourcentage de cellules viables. Le 5(6)-carboxyfluorescéine diacétate N-succinimidyl ester (CFSE) (21888, SCT110) est une méthode populaire de mesure du nombre de divisions cellulaires qu'a connues une population. Lors de son entrée dans la cellule, le CFSE est clivé par des estérases intracellulaires pour former le composé fluorescent, et le groupement succinimidyl ester réagit de manière covalente avec les amines primaires des protéines intracellulaires. L'intensité de la fluorescence de chaque cellule fille est divisée par deux à chaque division, ce qui permet de détecter de manière simple le nombre de divisions cellulaires par cytométrie en flux.
Métabolisation du MTT en formazan par des cellules viables sur une plaque de 96 puits
Notre gamme complète d'outils et de solutions de mesure de la viabilité et de la prolifération cellulaires repose sur diverses méthodes, notamment les suivantes :
- Tests de prolifération d'après la synthèse d'ADN
- Tests de prolifération métaboliques
- Tests de viabilité cellulaire par luminescence
- Tests de prolifération avec colorant fluorescent
- Triple coloration des cellules vivantes/mortes/totales pour les cultures en 3D
- Comptage de la viabilité avec colorant d'exclusion (bleu de trypan)
Tests de cytotoxicité
Les tests qui mesurent l'activité métabolique permettent d'analyser la prolifération et la viabilité cellulaires, ainsi que la cytotoxicité. La réduction de sels de tétrazolium tels que le MTT et le XTT en composés colorés du type formazan ou la bioréduction de la résazurine (R7017, TOX8) ne s'opère que dans les cellules métaboliquement actives. Les cellules proliférant activement voient leur activité métabolique augmenter, tandis que les cellules en difficulté, telles que celles exposées à des toxines présentent une baisse d'activité.
Tests d'apoptose
La mort cellulaire est nécessaire à de nombreuses fonctions physiologiques normales au cours du développement et de l'homéostasie. La capacité des cellules tumorales à échapper à la mort cellulaire programmée, aussi connue sous le nom d'apoptose, caractérise de nombreux types de cancer. Une grande variété de protéines cellulaires, notamment des récepteurs surfaciques, des protéine adaptatrices, des protéases et des constituants mitochondriaux, régulent l'équilibre précaire entre la survie des cellules et leur mort par apoptose. Recourir à une sélection réfléchie de tests peut permettre d'analyser non seulement les effets des conditions de culture cellulaire et des traitements sur la mort cellulaire, mais aussi les mécanismes par lesquels ceux-ci affectent la santé des cellules. Nous proposons une gamme complète de produits de test pour la détection de l'apoptose aux stades précoce, intermédiaire et tardif.
Détection et élimination des contaminants cellulaires
La maintenance de cultures cellulaires exemptes de contamination est un critère fondamental pour la recherche à base de cellules. Parmi les problèmes de culture cellulaire les plus répandus, on peut citer la contamination par les mycoplasmes, un genre bactérien dont la morphologie est caractérisée par une taille inférieure au micron et l'absence de paroi cellulaire, ce qui rend ces bactéries difficiles voire impossibles à détecter par microscopie, et résistantes à de nombreux antibiotiques. Même si les mycoplasmes ne provoquent généralement pas la mort des cellules, ils sont responsables de divers effets, notamment un dérèglement du métabolisme, une baisse de la prolifération et l'apparition d'aberrations chromosomiques. En bref, une contamination par des mycoplasmes compromet la capacité des lignées cellulaires affectées à fournir des données pertinentes pour la recherche en sciences de la vie.
Nos outils de détection et d'élimination des mycoplasmes incluent :
- Kit de détection des mycoplasmes par PCR LookOut® et autres kits PCR et qPCR permettant de dévoiler de manière fiable et sensible les mycoplasmes dans les cultures cellulaires
- Bouillon tryptose phosphate et autres réactifs permettant de détecter les mycoplasmes par leur culture
- Colorations pour ADN permettant de détecter les mycoplasmes par une méthode de coloration fluorescente de l'ADN
- Spray et réactifs de destruction des mycoplasmes LookOut® permettant de décontaminer les cultures de leurs mycoplasmes
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