04716728001
Roche
DNase I recombinante, exempte de RNases
from bovine pancreas, expressed in Pichia pastoris
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About This Item
Produits recommandés
Source biologique
bovine pancreas
Niveau de qualité
Produit recombinant
expressed in Pichia pastoris
Forme
solution
Poids mol.
~39 kDa
Conditionnement
pkg of 10,000 U
Fabricant/nom de marque
Roche
pH optimal
7.0-8.0
Description générale
La DNase I recombinante est une endonucléase spécifique de l′ADN. Cette enzyme catalyse la dégradation aléatoire de l′ADN simple brin et double brin en hydrolysant les liaisons phosphodiester avec l′ADN, produisant un mélange de mononucléotides et d′oligonucléotides. Toutes les substances utilisées lors de la production de la DNase I recombinante sont d′origine non animale, le produit obtenu est donc exempt d′éléments d′origine animale.
Contenu du kit
Contenu du kit
- DNase I recombinante exempte de RNases, 10 U/μl
- Tampon d′incubation, concentré 10x
Spécificité
Inactivation par la chaleur : Une unité de DNase I recombinante exempte de RNases peut être inactivée par voie thermique via une incubation de 10 minutes à 75 °C.
Remarque importante : Il est également possible d′inactiver la DNase I recombinante exempte de RNases et de l′éliminer par une extraction au phénol selon des protocoles standard, par exemple ceux décrits dans Current Protocols in Molecular Biology.
Remarque importante : Il est également possible d′inactiver la DNase I recombinante exempte de RNases et de l′éliminer par une extraction au phénol selon des protocoles standard, par exemple ceux décrits dans Current Protocols in Molecular Biology.
Application
La DNase I recombinante exempte de RNases peut servir à dégrader l′ADN dans les applications qui sont sensibles à la présence de RNases. Par exemple, la DNase I est fréquemment utilisée pour :
- Éliminer l′ADN génomique des préparations d′ARN avant une RT-PCR
- Isoler de l′ARN exempt d′ADN après des réactions de transcription in vitro
- Réaliser des translations de coupure
- Cartographier les régions sensibles aux DNases dans l′ADN des eucaryotes
Caractéristiques et avantages
- Élimine la contamination par l'ADN dans tous les échantillons d′ARN
- Ne contient aucune activité RNase ou protéase détectable
- Peut être inactivée par la chaleur, donc plus besoin d′extraction organique
- Expédiée avec un tampon d'incubation optimisé, qui maintient une activité DNase maximale
- Produite selon un procédé n′impliquant aucune substance d′origine animale, afin d′éviter tout risque lié aux produits d'origine animale
Conditionnement
1 kit constitué de 2 éléments
Qualité
Absence de contaminants : Chaque lot est testé afin de confirmer l'absence de RNases et de protéases, conformément aux procédures de contrôle qualité actuellement en vigueur.
Caractéristiques
Forme glycosylée
La DNase I recombinante est N-glycosylée de manière hétérogène ; elle apparaît donc sous forme de deux bandes en électrophorèse sur gel.
Besoin d′ions divalents
Pour une activité maximale, la DNase I nécessite des cations divalents. L′endonucléase spécifique de l′ADN est activée par des ions tels que les ions magnésium et est stimulée par les ions calcium. Cette enzyme est donc inhibée par les agents chélateurs de métaux comme l′EDTA.
La DNase I recombinante est N-glycosylée de manière hétérogène ; elle apparaît donc sous forme de deux bandes en électrophorèse sur gel.
Besoin d′ions divalents
Pour une activité maximale, la DNase I nécessite des cations divalents. L′endonucléase spécifique de l′ADN est activée par des ions tels que les ions magnésium et est stimulée par les ions calcium. Cette enzyme est donc inhibée par les agents chélateurs de métaux comme l′EDTA.
Définition de l'unité
Une unité correspond à l′activité enzymatique qui provoque une augmentation de l′absorbance de 0,001/minute dans 1 ml à 260 nm dans les conditions d′essai.
Conditions d′essai :
L′activité volumique est déterminée sur le mélange d′essai suivant. 100 μg d′ADN de thymus de veau sont incubés dans 2,5 ml de tampon d'incubation 1x en présence de 40 à 70 unités de DNase I recombinante exempte de RNases à +25 °C. La hausse de l′absorbance est mesurée à 260 nm.
Conditions d′essai :
L′activité volumique est déterminée sur le mélange d′essai suivant. 100 μg d′ADN de thymus de veau sont incubés dans 2,5 ml de tampon d'incubation 1x en présence de 40 à 70 unités de DNase I recombinante exempte de RNases à +25 °C. La hausse de l′absorbance est mesurée à 260 nm.
Notes préparatoires
Activateur : Ions métalliques bivalents
Solution de travail : Tampon de stockage : Tris-HCl 20 mM, NaCl 50 mM, CaCl2 2 mM, MgCl2 2 mM, dithioérythritol 1 mM, Pefabloc SC 0,1 mg/ml, glycérol 50 % (v/v), pH 7,6 (à 4 °C).
Tampon d′incubation (10x) : Tris/HCl 400 mM, NaCl 100 mM, MgCl2 60 mM, CaCl2 10 mM, pH 7,9.
Tampon de dilution pour l′enzyme : Tris-HCl 25 mM, glycérol 50 % (v/v), pH 7,6 (à 4 °C).
Solution de travail : Tampon de stockage : Tris-HCl 20 mM, NaCl 50 mM, CaCl2 2 mM, MgCl2 2 mM, dithioérythritol 1 mM, Pefabloc SC 0,1 mg/ml, glycérol 50 % (v/v), pH 7,6 (à 4 °C).
Tampon d′incubation (10x) : Tris/HCl 400 mM, NaCl 100 mM, MgCl2 60 mM, CaCl2 10 mM, pH 7,9.
Tampon de dilution pour l′enzyme : Tris-HCl 25 mM, glycérol 50 % (v/v), pH 7,6 (à 4 °C).
Stockage et stabilité
Stocker la solution d′enzyme non diluée entre -15 et -25 °C ; conserver dans un tampon de stockage à 4 °C.
Autres remarques
Produit réservé à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
Code de la classe de stockage
12 - Non Combustible Liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 1
Point d'éclair (°F)
does not flash
Point d'éclair (°C)
does not flash
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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Protocoles
DNase I from bovine pancreas is a glycoprotein of Mr 37000. A special procedure is used to remove RNases from the DNase preparation.
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