This product is not tested specifically for use in cell culture, however, the product information provided for C9697 may be applied to this product. See the link below to review the product data-sheet. For tissue culture applications, collagenase can be solubilized in calcium-free solutions such as Hank's Balanced Salts (Cat. No. H 2387) or Earles Balanced Salt Solution (Cat. No. E6267).
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/390/021/c9697pis-ms.pdf
C7657
Collagénase from Clostridium histolyticum
Type XI, 2-5 FALGPA units/mg solid, ≥800 CDU/mg solid
Synonyme(s) :
Clostridiopeptidase A
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About This Item
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Produits recommandés
Source biologique
Clostridium histolyticum
Niveau de qualité
Forme
powder
Activité spécifique
≥800 CDU/mg solid
2-5 FALGPA units/mg solid
Poids mol.
68-130 kDa
Solubilité
TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
Application(s)
diagnostic assay manufacturing
Température de stockage
−20°C
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Catégories apparentées
Application
Ce produit a été utilisé pour isoler des lignées cellulaires PDAC (adénocarcinome canalaire pancréatique) et pour cultiver des fibroblastes pancréatiques.[1]
La clostridiopeptidase A a été employée dans une étude décrivant une méthode quantitative pour évaluer de petites quantités de collagène, basée sur la spectrométrie de masse MALDI-TOF (désorption/ionisation laser assistée par matrice avec analyseur à temps de vol) après digestion du collagène.
Actions biochimiques/physiologiques
La libération efficace de cellules à partir d'un tissu nécessite l'action de collagénases et de la protéase neutre. La collagénase est activée à l'aide de quatre atome-grammes de calcium (Ca2+) par mole d'enzyme. On pense que le filtrat de culture contient au moins 7 protéases différentes, de poids moléculaires allant de 68 à 130 kDa. Le pH optimal se situe entre 6,3 et 8,8. L'enzyme est typiquement utilisée pour digérer les constituants conjonctifs d'échantillons tissulaires afin de libérer des cellules individuelles. Le traitement par une collagénase peut provoquer la mort de certaines cellules. La digestion nécessite généralement des concentrations de 0,1 à 5 mg/ml. La durée de la réaction pour dissocier efficacement les cellules sans trop provoquer de mort cellulaire varie de 15 minutes à plusieurs heures. Utiliser de préférence un tampon de Krebs Ringer additionné de calcium et de BSA, et du Zn2+ pour l'activité.
La collagénase est activée à l′aide de quatre atome-grammes de calcium par mole d′enzyme. Elle est inhibée par l′acide éthylèneglycol-bis(bêta-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique, le bêta-mercaptoéthanol, le glutathion, l′acide thioglycolique et la 8-hydroxyquinoline.
Qualité
Présente également des activités clostripaïne, protéase neutre non spécifique et triptyque.
Définition de l'unité
Une unité de digestion de collagène (UDC) libère une quantité de peptides à partir du collagène d′un tendon d′Achille de bovin équivalant, en termes de couleur avec la méthode à la ninhydrine, à 1,0 μmole de leucine en 5 heures à pH 7,4 et à 37 °C en présence d′ions calcium. Une unité d′hydrolyse de FALGPA hydrolyse 1,0 μmole de furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala par minute à 25 °C. Une unité de protéase neutre hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole de tyrosine en 5 heures à pH 7,5 et à 37 °C. Une unité de clostripaïne hydrolyse 1,0 μmole de BAEE par minute à pH 7,6 et à 25 °C en présence de DTT.
Notes préparatoires
Une solution mère peut être préparée en dissolvant 0,05-0,1 mg/ml de collagénase dans du tampon TESCA (TES 50 mM contenant du chlorure de calcium à 0,36 mM), pH 7,4 à 37 °C.
Substrat
Réf. du produit
Description
Tarif
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Organes cibles
Respiratory system
Code de la classe de stockage
11 - Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 1
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Équipement de protection individuelle
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
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Protocoles
To measure collagenase activity, N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala is used in a continuous spectrophotometric rate determination at 345 nm. Collagenase hydrolyzes collagen peptide bonds.
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How can I dissolve this product for Tissue digestion (Hanks Buffer or even medium possible)? Thanks
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