S7165
Kit de détection in situ de l'apoptose ApopTag Red
The ApopTag Red In Situ Apoptosis Detection Kit detects apoptosis in situ by the indirect TUNEL method, utilizing an anti-digoxigenin antibody with a rhodamine fluorochrome.
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886,00 $
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About This Item
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Produits recommandés
Niveau de qualité
Fabricant/nom de marque
ApopTag
Chemicon®
Technique(s)
immunocytochemistry: suitable
immunohistochemistry (formalin-fixed, paraffin-embedded sections): suitable
Méthode de détection
fluorometric
Conditions d'expédition
dry ice
Température de stockage
−20°C
Description générale
Les kits ApopTag indirects (S7100, S7101, S7110, S7111 et S7165) ont été validés pour une utilisation dans la coloration histochimique et cytochimique des échantillons suivants : tissus fixés au formaldéhyde et inclus en paraffine, coupes de cryostat, suspensions cellulaires, échantillons obtenus par Cytospin, et cultures cellulaires. Des méthodes de montage complètes ont été développées (34, 45).
La spécificité de coloration des kits ApopTag Peroxydase a été démontrée par Chemicon et de nombreux autres laboratoires. Chemicon a testé de nombreux types de systèmes modèles cellulaires et tissulaires, notamment : (a) prostate, thymus et gros intestin humains (données internes) ; (b) prostate ventrale de rat post-castration (21), (c) lymphocytes de thymus de rat traités in vitro avec de la dexaméthasone (3, 13), (d) membres d'embryons de souris de 14 jours (1) et (e) glande mammaire de rat en régression après sevrage (36). Dans les modèles de thymocytes et de prostate, l'électrophorèse sur gel d'agarose a été utilisée pour évaluer la quantité d'ADN présentant une distribution "en échelle" (ou "DNA laddering" en anglais), dont le pic coïncide avec le pourcentage maximal de cellules colorées. De nombreux articles de revues scientifiques, publiés par des laboratoires du monde entier, ont établi l'utilité des kits ApopTag. (Voir la section V. Références, Publications citant les kits ApopTag).
Les kits ApopTag à la fluorescéine et à la rhodamine ont été testés pour des colorations spécifiques dans les systèmes modèles suivants : (A) lymphocytes du sang périphérique normal humain induits par la dexaméthasone tel que dans les colorations Cytospin, (b) glande mammaire de rat en régression, préparée tel que dans les colorations de coupes fixées à la formaline et incluses en paraffine, et (c) lymphocytes du sang périphérique leucémique humain induits par la camptothécine, tel que dans les colorations de suspensions cellulaires utilisées pour la cytométrie en flux quantitative (22).
Dans certains cas, certains tissus contiennent des types cellulaires qui lient tout nucléotide marqué à la fluorescéine, tel que celui contenu dans le kit direct ApopTag à la fluorescéine (S7160). Il est donc recommandé d'utiliser ce kit (S7160) pour colorer les suspensions cellulaires, les échantillons obtenus par cytospin et les cultures cellulaires, mais pas les coupes de tissus. Chemicon suggère l'utilisation des kits ApopTag à la fluorescéine (S7110, S7111) ou le kit ApopTag Red pour la coloration des coupes de tissus. Voir la fiche technique pour obtenir des références.
Application
Les kits de détection in situ de l'apoptose ApopTag marquent les cellules apoptotiques dans les échantillons de recherche en modifiant l'ADN génomique grâce à la désoxynucléotidyltransférase terminale (TdT), permettant ainsi la détection des cellules apoptotiques par coloration spécifique.
Ce manuel contient des informations et des protocoles pour le kit de détection de l'apoptose ApopTag Red (S7165).
Principes de la procédure
Les réactifs fournis dans les kits ApopTag sont conçus pour marquer les extrémités 3'-OH libres d'ADN in situ avec des nucléotides marqués chimiquement et non marqués. Les nucléotides contenus dans le tampon de réaction sont ajoutés par voie enzymatique à l'ADN par la désoxynucléotidyltransférase terminale (TdT) (13, 31). La TdT catalyse l'ajout sans matrice de nucléosides triphosphates aux extrémités 3'-OH de l'ADN double brin ou simple brin. Les nucléotides incorporés forment un oligomère composé de digoxygénine ou d'un nucléotide à la fluorescéine, et d'un nucléotide non marqué selon une séquence aléatoire. Le rapport entre nucléotides marqués et non marqués dans les kits ApopTag est optimisé pour favoriser la liaison des anticorps anti-digoxygénine, ou pour minimiser l'auto-extinction de la fluorescéine. La longueur exacte de l'oligomère ajouté n'a pas été mesurée. Le système ApopTag diffère de manière significative des techniques de marquage in situ de l'apoptose décrites précédemment (13, 16, 38, 46), dans lesquelles la liaison de l'avidine à la biotine cellulaire peut être une source d'erreur. Le système digoxygénine/anti-digoxygénine s'est avéré avoir une sensibilité équivalente aux systèmes avidine/biotine (22). La seule source naturelle de digoxygénine est la plante appelée digitale. Les ligands similaires sur le plan immuno-chimique pour la liaison à l'anticorps anti-digoxygénine sont généralement insignifiants dans les tissus animaux, ce qui garantit un faible bruit de fond pour la coloration. L'anticorps polyclonal de mouton purifié par affinité est le réactif anti-digoxygénine spécifique utilisé dans les kits ApopTag. Cet anticorps présente une réactivité croisée de ≤ 1 % avec les principaux stéroïdes des vertébrés. En outre, le fragment Fc de cet anticorps a été retiré par digestion protéolytique afin d'éliminer toute adsorption non spécifique sur les récepteurs cellulaires au fragment Fc.
De nombreux résultats obtenus avec les kits ApopTag ont été publiés (voir la section V. Références, Publications citant les kits ApopTag). La gamme de produits ApopTag offre diverses options de design expérimental. Un chercheur peut choisir de détecter la coloration par microscopie à fond clair ou à fluorescence, ou par cytométrie en flux, selon le niveau d'expertise et l'équipement disponibles. Il existe également des possibilités d'étudier d'autres protéines d'intérêt dans le contexte de l'apoptose lors de l'utilisation des kits ApopTag. En utilisant des anticorps conjugués à une enzyme autre que la peroxydase et en choisissant un substrat approprié, il est possible d'examiner une autre protéine et l'apoptose de manière simultanée à l'aide des kits ApopTag Peroxydase. Il existe également un choix de fluorophores (fluorescéine et rhodamine) utilisant la technologie ApopTag. Il existe une flexibilité dans le choix des combinaisons anticorps-fluorophore, qui permet d'étudier d'autres protéines importantes.
Le kit de détection in situ de l'apoptose ApopTag Red détecte l'apoptose in situ par la méthode indirecte TUNEL (marquage des extrémités aux dUTP grâce à la désoxynucléotidyltransférase terminale), en utilisant un anticorps anti-digoxygénine avec un fluorochrome rhodamine.
Composants
Tampon de réaction, 90417, 2,0 mL, de -15 °C à -25 °C
Enzyme TdT, 90418, 0,64 mL, de -15 °C à -25 °C
Tampon de lavage / d'arrêt, 90419, 20 mL, de -15 °C à -25 °C
Solution de blocage, 90425, 2,6 mL, de -15 °C à -25 °C
Anticorps anti-digoxygénine-rhodamine*, 90429, 2,1 mL, entre 2 °C et 8 °C
Lamelles en plastique, 90421, 100 unités, temp. ambiante
*anticorps polyclonal de mouton purifié par affinité
Nombre de tests par kit : Le kit fournit le matériel suffisant pour colorer 40 échantillons de tissu d'environ 5 cm2 chacun, lorsqu'il est utilisé conformément aux instructions. Si le kit est utilisé pour l'analyse d'échantillons sur lame, le tampon de réaction sera épuisé avant les autres réactifs.
Stockage et stabilité
2. Protéger l'anticorps anti-digoxygénine conjugué à la rhodamine (90429) de toute exposition inutile à la lumière.
Précautions
1. Les composants suivants du kit contiennent du cacodylate de potassium (acide diméthylarsinique) comme tampon : Tampon d'équilibration (90416), tampon de réaction (90417) et enzyme TdT (90418). Ces éléments sont nocifs en cas d'ingestion ; éviter tout contact avec la peau et les yeux (porter des gants et des lunettes) et rincer immédiatement en cas de contact.
2. Les anticorps conjugués (90429) et les solutions de blocage (90425) contiennent 0,08 % d'azide de sodium en tant que conservateur.
3. L'enzyme TdT (90418) contient du glycérol et ne congèle pas à -20 °C. Pour une durée de conservation maximale, ne pas réchauffer ce réactif à température ambiante avant utilisation.
Informations légales
Clause de non-responsabilité
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B - STOT RE 2 Inhalation
Organes cibles
Respiratory Tract
Code de la classe de stockage
6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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