Concentração na urina com Amicon^® Ultra Centrifugal Filters

A medição precisa de proteínas específicas na urina é importante para diagnosticar e gerenciar doenças. No entanto, a concentração de proteínas urinárias é muitas vezes inferior ao limite de detecção de testes clínicos. Os dispositivos Amicon^® Ultra-4 mL 10 kDa MWCOpodem ser utilizados para concentrar amostras de urina antes das análises laboratoriais clínicas.

Método

Enriquecimento de cadeias leves de imunoglobulina livres (proteínas de Bence-Jones) em amostras de urina utilizando Amicon^® Ultra-4 mL 10 kDa MWCO filters.

1. Determine a proteína total em uma amostra de urina de 24 horas.
2. Preencha o dispositivo Amicon^® Ultra-4mL com 4 mL de urina.
3. Centrifugue a 3400 x g durante 30–45 minutos (até obter aproximadamente 25–50 μL de amostra concentrada). Isto representa um aumento de 160 vezes na concentração da amostra original.
4. Coloque uma ponta de pipeta na parte inferior da unidade do filtro e retirar a amostra concentrada.
5. Realize eletroforese de agarose no concentrado para quantificar cadeias de luz e identificar outras proteínas. Determine a percentagem de correntes leves em relação ao número total de componentes na urina. Em seguida, multiplique a porcentagem de cadeias leves pela concentração total de proteína de 24 horas (gramas por volume de 24 horas).
6. Realize eletroforese de imunofixação no concentrado para identificar cadeias leves.

Resultados da resolução eletroforética de cadeias leves de imunoglobulina livres (proteínas de Bence-Jones) em amostras de urina concentradas usando dispositivos de concentração centrífuga Centricon (C) e Amicon Ultra (A). As bandas escuras a cerca de 25 kDa em cada faixa representam essas proteínas.

Observações adicionais

1. Imunoglobulinas heterogêneas normais também podem ser vistas no concentrado de urina com eletroforese de imunofixação. Este "efeito escada" é composto por cadeias leves micro-heterogêneas. As proteínas de Bence-Jones podem estar dentro desta escada. Para verificar a presença de proteínas de Bence-Jones requer análise adicional por eletroforese bidimensional.
2. Se houver excesso de antígeno, a diluição do concentrado será necessária até que o equilíbrio seja alcançado entre o antígeno (proteína Bence-Jones) e o anticorpo.

Produtos relacionados

1. Os dispositivos Amicon^® Ultra também podem ser usados para concentrar soro, plasma e líquido cefalorraquidiano para análises semelhantes. Uma concentração de aproximadamente 20 mg/mL é necessária para detectar cadeias leves livres de pacientes doentes por eletroforese de agarose. A detecção por eletroforese de imunofixação é 10 vezes mais sensível do que por eletroforese em agarose.
2. Os Static concentrators (Minicon^® devices) também estão disponíveis para a concentração de proteína Bence-Jones na urina.

Agradecimentos

A pesquisa utilizando dispositivos Amicon^® Ultra para concentração de urina neste protocolo foi conduzida por Mark Merchant, Ph.D. em Helena Laboratories, Beaumont, TX.

Referências

1. N. T. Clinical Guide to Laboratory Tests, 2nd ed. Philadelphia: Saunders, WB; 1990;362–363..

2. Kahn SN. 1991. Dear Dr. [Bence] Jones... 37(9):1557-1558. https://doi.org/10.1093/clinchem/37.9.1557

3. July 2002.. Cleveland Clinic homepage. Accessed .

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5. Christenson RH, Tucker JA, Allen E. 1985. Results of dipstick tests, visual inspection, microscopic examination of urine sediment, and microbiological cultures of urine compared for simplifying urinalysis.. 31(3):448-451. https://doi.org/10.1093/clinchem/31.3.448