Buffer Reference Center

• Tabela de faixas de pH de tampões biológicos selecionados (25 °C, 0,1 M)
• Preparação de tampão Tris ou Trizma^® – pH vs. temperatura
• Preparação de tampão fosfato – solução a 0,2 M
• Ácido cítrico – Preparação de Tampão Na₂HPO₄, pH 2,6-7,6
• Ácido cítrico – Preparação de tampão de citrato de sódio, pH 3,0-6,2
• Acetato de sódio – Preparação de tampão de ácido acético, pH 3,7-5,6
• Preparação de tampão Na₂HPO₄ – NaH₂PO₄, pH 5,8-8,0 a 25 °C
• Imidazol (glioxalina) – Preparação de tampão HCl, pH 6,2-7,8 a 25 °C
• Carbonato de sódio – Preparação de tampão de bicarbonato de sódio, pH 9,2-10,8
• Fórmulas e equações de preparação de tampão

Escolhendo o tampão biológico certo

Escolha um tampão com base nos seus requisitos de pH, bem como no pKa, uma medida da força do ácido que leva em consideração o pH, a concentração e a temperatura. As necessidades regulatórias ou de pureza para sua aplicação exata também devem ser consideradas. As tabelas a seguir podem ajudá-lo a navegar na preparação de muitas soluções tampão comuns por pH e pKa. 

Além das tabelas abaixo, desenvolvemos diversas calculadoras de receitas de tampão para auxiliar na preparação do tampão.

TBE e TAE para eletroforese em gel têm receitas um pouco mais complicadas. Podemos ajudá-lo a escolher a receita certa.

O que são classificações de tampão?

A classificação do tampão indica a qualidade e os níveis de impurezas apropriados para diferentes usos. Fornecemos seis classes de tampões indicados para uso geral em laboratório, formulação e fabricação farmacêutica final e aplicações intermediárias que podem precisar de testes de vestígios de metais ou materiais de pureza especificada.

Tabela de faixas úteis de pH de tampões biológicos selecionados (25 °C, 0,1 M)

Tampões	Faixa de pH útil	pKa (a 20 °C)	pKa (a 25 °C)	pKa (a 37 °C)	Classificação de reagente	Classificação certificada BioPerformance
MES	5,5– 6,7	6,16	6,10	5,97	M8250	M2933
Bis-tris	5,8– 7,2	n/a	6,50	6,36	B9754	B4429
ADA	6,0– 7,2	6,65	6,59	6,46	A9883	n/a
ACES	6,1– 7,5	6,88	6,78	6,54	A9758	A3594
PIPES	6,1– 7,5	6,80	6,76	6,66	P6757	P1851
MOPSO	6,2– 7,6	n/a	6,90	6,75	M8389	n/a
BIS-TRIS propano	6,3– 9,5	n/a	6,8, 9,0	n/a	B6755	B4679
BES	6,4– 7,8	7,17	7,09	6,90	B9879	B4554
MOPS	6,5– 7,9	7,28	7,20	7,02	M1254	M3183
TES	6,8– 8,2	7,50	7,40	7,16	T1375	T5691
HEPES	6,8– 8,2	7,55	7,48	7,31	H3375	H4034
DIPSO	7,0– 8,2	n/a	7,60	7,35	n/a	n/a
MOBS	6,9– 8,3	n/a	7,60	n/a	M3295	n/a
TAPSO	7,0– 8,2	n/a	7,60	7,39	T9269	n/a
Tris ou Trizma®	7,0– 9,0	8,20	8,06	7,72	T1503	T6066
HEPPSO	7,1– 8,5	n/a	7,80	6,66	n/a	n/a
POPSO	7,2– 8,5	n/a	7,80	7,63	P3405	n/a
TEA	7,3– 8,3	n/a	7,80	n/a	n/a	n/a
EPPS	7,3– 8,7	n/a	8,00	n/a	E9502	E0276
Tricina	7,4– 8,8	8,16	8,05	7,80	T0377	T5816
Gli-Gli	7,5– 8,9	n/a	8,20	n/a	G1002	G3915
Bicina	7,6– 9,0	8,35	8,26	8,04	B3876	n/a
HEPBS	7,6– 9,0	n/a	8,30	n/a	H6903	n/a
TAPS	7,7-9,1	8,49	8,40	8,18	T5130	T5316
AMPD	7,8– 9,7	n/a	8,80	n/a	A9754	n/a
TABS	8,2– 9,6	n/a	8,90	n/a	n/a	n/a
AMPSO	8,3– 9,7	n/a	9,00	9,10	A6659	n/a
CHES	8,6– 10,0	9,55	9,49	9,36	C2885	n/a
CAPSO	8,9– 10,3	n/a	9,60	9,43	C2278	n/a
AMP	9,0– 10,5	n/a	9,70	n/a	n/a	n/a
CAPS	9,7– 11,1	10,56	10,40	10,02	C2632	n/a
CABS	10,0– 11,4	n/a	10,70	n/a	C5580	n/a

Tabela de preparação de tampão Tris ou Trizma^® – pH vs. temperatura

pH na temperatura
5 °C	25 °C	37 °C
7,76	7,20	6,91
7,89	7,30	7,02
7,97	7,40	7,12
8,07	7,50	7,22
8,18	7,60	7,30
8,26	7,70	7,40
8,37	7,80	7,52
8,48	7,90	7,62
8,58	8,00	7,71
8,68	8,10	7,80
8,78	8,20	7,91
8,88	8,30	8,01
8,98	8,40	8,10
9,09	8,50	8,22
9,18	8,60	8,31
9,28	8,70	8,42
9,36	8,80	8,51
9,47	8,90	8,62
9,56	9,00	8,70

g/l para solução a 0,05 M
Trizma® HCL	Trizma® Base
7,02	0,67
6,85	0,80
6,61	0,97
6,35	1,18
6,06	1,39
5,72	1,66
5,32	1,97
4,88	2,30
4,44	2,65
4,02	2,97
3,54	3,34
3,07	3,70
2,64	4,03
2,21	4,36
1,83	4,65
1,50	4,90
1,23	5,13
0,96	5,32
0,76	5,47

Tabela de preparação de tampão de fosfato – solução a 0,2 M  

Fosfato de potássio monobásico anidro g/l	Fosfato de sódio heptahidratado dibásico g/l	23 °C pH
22,4	3,49	5,7
22,08	4,29	5,8
21,60	5,37	5,9
21,05	6,60	6,0
20,40	8,05	6,1
19,56	9,93	6,2
18,60	12,07	6,3
17,64	14,22	6,4
16,44	16,90	6,5
15,00	20,12	6,6
13,56	23,34	6,7
12,24	26,29	6,8

Fosfato de potássio monobásico anidro g/l	Fosfato de sódio heptahidratado dibásico g/l	23 °C pH
10,80	29,51	6,9
9,36	32,73	7,0
7,92	35,95	7,1
6,72	38,63	7,2
5,52	41,31	7,3
4,56	43,46	7,4
3,84	45,07	7,5
3,12	46,68	7,6
2,52	48,55	7,7
2,04	49,09	7,8
1,68	49,89	7,9
1,27	50,81	8,0

Ácido cítrico – Preparação de tampão de Na₂HPO₄, pH 2,6–7,6¹

Ácido cítrico monohidratado, C₆H₈O₇ • H₂O, MW 210,14; 0,1 M contém 21,01 g/l. Na₂HPO₄, MW 141,98; 0,2 M contém 28,40 g/l, ou Na₂HPO₄ • 2H₂O, MW 178,05; 0,2 M contém 35,61 g/l.

x ml de 0,1 M-ácido cítrico e y ml de 0,2 M-Na₂HPO₄ misturado

pH	x ml de ácido cítrico a 0,1 M	y ml de 0,2-Na2HPO4
2,6	89,10	10,90
2,8	84,15	15,85
3,0	79,45	20,55
3,2	75,30	24,70
3,4	71,50	28,50
3,6	67,80	32,20
3,8	64,50	35,50
4,0	61,45	38,55
4,2	58,60	41,40
4,4	55,90	44,10
4,6	53,25	46,75
4,8	50,70	49,30
5,0	48,50	51,50
5,2	46,40	53,60
5,4	44,25	55,75
5,6	42,00	58,00
5,8	39,55	60,45
6,0	36,85	63,15
6,2	33,90	66,10
6,4	30,75	69,25
6,6	27,25	72,75
6,8	22,75	77,25
7,0	17,65	82,35
7,2	13,05	86,95
7,4	9,15	90,85
7,6	6,35	93,65

Ácido cítrico – Preparação de tampão de citrato de sódio, pH 3,0-6,2¹

Ácido cítrico monohidratado, C₆H₈O₇ • H₂O, MW 210,14; 0,1 M contém 21,01 g/l. Citrato trissódico di-hidratado, C₆H₅O₇Na₃ • 2H₂, MW 294,12; 0,1 M contém 29,41 g/l.

x ml de ácido cítrico a 0,1 M e y ml de citrato trissódico a 0,1 M misturado

pH	x ml de ácido cítrico a 0,1 M	y ml citrato trissódico a 0,1 M
3,0	82,0	18,0
3,2	77,5	22,5
3,4	73,0	27,0
3,6	68,5	31,5
3,8	63,5	36,5
4,0	59,0	41,0
4,2	54,0	46,0
4,4	49,5	50,5
4,6	44,5	55,5
4,8	40,0	60,0
5,0	35,0	65,0
5,2	30,5	69,5
5,4	25,5	74,5
5,6	21,0	79,0
5,8	16,0	84,0
6,0	11,5	88,5
6,2	8,0	92,0

Acetato de sódio – PREPARAÇÃO de tampão de ácido acético, pH 3,7–5,6¹

Acetato de sódio tri-hidratado, CH₃COONa • 3H₂O, MW 136,09; 0,2 M contém 27,22 g/l.

x ml de 0,2 M-NaOAc e y ml de 0,2 M-HOAc misturado

pH, 18 °C	x ml 0,2 M-NaOAc	x ml 0,2 M-HOAc
3,7	10,0	90,0
3,8	12,0	88,0
4,0	18,0	82,0
4,2	26,5	73,5
4,4	37,0	63,0
4,6	49,0	51,0
4,8	59,0	41,0
5,0	70,0	30,0
5,2	79,0	21,0
5,4	86,0	14,0
5,6	91,0	9,0

Na₂HPO₄ – PREPARAÇÃO de tampão NaH₂PO₄, pH 5,8-8,0 a 25 °C¹

Na₂HPO₄ • 2H₂O, MW 178,05; 0,2 M contém 35,61 g/l. Na₂HPO₄ • 12H₂O, MW 358,22; 0,2 M contém 71,64 g/l. NaH₂PO₄ • H₂O, MW 138,01; 0.2 M contém 27,6 g/l. NaH₂PO₄ • 2H₂O, MW 156,03; 0,2 M contém 31,21 g/l.

x mL de 0,2 M-Na₂HPO₄, y ml de 0,2 M-NaH₂PO₄; diluído para 100 ml com H₂O

pH, 25 °C	x ml 0,2 M-Na2HPO4	y ml 0,2 M-NaH2PO4
5,8	4,0	46,0
6,0	6,15	43,85
6,2	9,25	40,75
6,4	13,25	36,75
6,6	18,75	31,25
6,8	24,5	25,5
7,0	30,5	19,5
7,2	36,0	14,0
7,4	40,5	9,5
7,6	43,5	6,5
7,8	45,75	4,25
8,0	47,35	2,65

Imidazol (glioxalina) – PREPARAÇÃO de tampão HCl, pH 6,2–7,8 a 25 °C¹

Imidazol, C₃H₄N₂, MW 68,08

25 ml de 0,2 M-imidazol (13,62 g/l), x ml de 0,2 M-HCl, diluído para 100 ml com H₂O

pH, 25 °C	x mL 0,2 M-HCl
6,2	21,45
6,4	19,9
6,6	17,75
6,8	15,2
7,0	12,15
7,2	9,3
7,4	6,8
7,6	4,65
7,8	3,0

Carbonato de sódio – PREPARAÇÃO de tampão de bicarbonato de sódio, pH 9,2-10,8¹

Na₂CO₃ • 10H₂O, MW 286,2; 0,1 M contém 28,62 g/l. NaHCO₃, MW 84,0; 0,1 M contém 8,40 g/l.

x ml de 0,1 M-Na₂CO₃ e y ml 0,1 M-Na₂HCO₃ misturado

20 °C	37 °C
x ml 0,1 M-Na2CO3	x ml 0,1 M- Na2HCO3
9,2	8,8	10	90
9,4	9,1	20	80
9,5	9,4	30	70
9,8	9,5	40	60
9,9	9,7	50	50
10,1	9,9	60	40
10,3	10,1	70	30
10,5	10,3	80	20
10,8	10,6	90	10

Fórmulas e equações de preparação de tampão

Porcentagem em peso (p/v)

(% de tampão desejado/100) × volume de tampão final (ml) = g de material inicial necessário.

Soluções molares

molaridade desejada × peso da fórmula × volume final da solução (L) = gramas necessários

Equação de Henderson-Hasselbach

Referência

1. Dawson R, Elliot D, Elliot W, Jones KM. 1986. Data for Biochemical Research. 3rd ed.. Oxford Science Publ..