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Página inicialConcentração de proteínas e troca de tampãoUma estratégia simples para o enriquecimento de proteínas usando Ultrafiltração

Uma estratégia simples para o enriquecimento de proteínas usando Ultrafiltração

O proteoma de plasma humano é um vasto recurso para a descoberta e investigação de biomarcadores. Tradicionalmente, a cromatografia de filtração em gel tem sido utilizada para fracionar soluções proteicas baseadas no tamanho1,2. No entanto, a filtração de gel é trabalhosa, limitada pelo tamanho da amostra e demorada. Também dilui a amostra significativamente. Essas limitações podem ser superadas pela ultrafiltração, que foi relatada3–5 como um método de preparação de amostras para a preparação de frações de baixo peso molecular (abaixo de 10 kDa) para análise de biomarcadores. Aqui, os dispositivos Amicon® Ultra foram usados para purificar o citocromo c a partir de uma mistura contendo 10% de soro bovino fetal.

Método

Neste experimento, dispositivos de ultrafiltração foram utilizados para enriquecer frações de baixo peso molecular (LMW) e alto peso molecular (HMW) do soro. Utilizando uma abordagem de filtração em série (Figura 1), as proteínas foram fracionadas por meio de redução do corte de peso molecular (MWCO) em dispositivos de 4 mL Amicon® Ultra, variando de 100 kDa a 10 kDa MWCO.

estratégia de fracionamento em série

Resultados

Enriquecimento em série

Esta estratégia de enriquecimento em série permitiu a compartimentalização de proteínas e o rendimento melhorado em comparação com a filtração direta utilizando um dispositivo de MWCO inferior (Figura 2, acima). As amostras preparadas utilizando a estratégia de enriquecimento também apresentaram maior pureza em comparação com a filtração direta tradicional (Figura 3, acima). Os dados mostram que a ultrafiltração em série é uma abordagem viável para o enriquecimento de proteínas à base de tamanho.

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Referências

1.
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2.
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Schulz-Knappe P, Schrader M, Ständker L, Richter R, Hess R, Jürgens M, Forssmann W. 1997. Peptide bank generated by large-scale preparation of circulating human peptides. Journal of Chromatography A. 776(1):125-132. https://doi.org/10.1016/s0021-9673(97)00152-0
4.
Basso D, Valerio A, Seraglia R, Mazza S, Piva MG, Greco E, Fogar P, Gallo N, Pedrazzoli S, Tiengo A, et al. 2002. Putative Pancreatic Cancer-Associated Diabetogenic Factor: 2030 MW Peptide. Pancreas. 24(1):8-14. https://doi.org/10.1097/00006676-200201000-00002
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Prazeres S, Santos MA, Ferreira HG, Sobrinho LG. 2003. A practical method for the detection of macroprolactinaemia using ultrafiltration. 58(6):686-690. https://doi.org/10.1046/j.1365-2265.2003.01721.x
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