PCR-Mastermix
PCR-Reaktionsröhrchen
Was ist ein PCR- oder RT-PCR-Mastermix?
Ein PCR-Mastermix, manchmal auch als Supermix oder Readymix bezeichnet, ist eine Chargenmischung aus PCR-Reagenzien in optimalen Konzentrationen, die vorbereitet und auf viele PCR-Röhrchen oder 96-Well-PCR-Platten aufgeteilt werden kann. Der Mastermix enthält in der Regel DNA-Polymerase, dNTP, MgCl2 und Puffer. Durch die Verwendung eines Mastermix werden Pipettieraufwand und Kontaminationsrisiko verringert, es ist bequem, spart Zeit und verhindert mögliche Fehler beim Mischen, was ihn ideal für Anwendungen mit hohem Durchsatz macht.
Der Mastermix ermöglicht es Forschern, Kontrollen einzurichten und verschiedene Konzentrationen ihrer Ziel-DNA- oder -RNA-Templates zu testen, ohne dass sie jedem Reaktionsröhrchen oder Well einzeln genaue Mengen an Enzymen, Puffern, Cofaktoren (in der Regel MgCl2), Wasser und dNTP hinzufügen müssen. Stattdessen wird ein großer Mastermix, der alle oder die meisten PCR-Reagenzien enthält, einmal vorbereitet. Die entsprechende Menge des Mastermix kann in die Röhrchen oder Platten-Wells pipettiert und mit allen Komponenten kombiniert werden, die sich abhängig von der Reaktion unterscheiden, wie z. B. DNA- oder RNA-Templates oder Primer.
Groß angelegte PCR-Reaktionen können 2000 oder mehr einzelne 25 μl- bis 50 μl-Reaktionen enthalten. Selbst bei einer Charge aus 20 Reaktionen können Forscher mit einem Mastermix Zeit sparen, Pipettierfehler reduzieren und die Konsistenz verbessern. Diese Mischungen verhindern, dass Reagenzien ganz aus einer Reaktion ausgelassen werden, was zu falsch-negativen Ergebnissen führen würde.
Unser PCR-Mastermix-Rechner hilft Ihnen bei der Planung eines Mastermix-Rezepts für eine individuelle Charge von PCR-Reaktionen.
PCR-Mastermix-Anwendungen
PCR-Mastermischungen werden üblicherweise für die folgenden Anwendungen verwendet:
- Hochdurchsatz-PCR
- Routine-PCR
Mastermischungen mit Hot-Start-DNA-Polymerase sind ideal für die folgenden Anwendungen geeignet:
- Multiplex-PCR
- Reduktion von Primer-Dimeren
- Komfortable Einstellung der Umgebungstemperatur, kompatibel mit der Automatisierung
Labore, die sich in der Voruntersuchungsphase befinden, können die DNA- oder RNA-Templates variieren und sich auf den Komfort durch andere vorgemischte Komponenten verlassen.
PCR-Mastermix-Komponenten
- Enzym
- Puffer
- Cofaktor - Magnesiumchlorid (MgCl2) wird am häufigsten verwendet. Manchmal wird MgSO4 für bestimmte Enzyme verwendet.
- dNTP
- Primer
- Template-DNA (wenn alle Proben einheitlich sein sollen)
- Nuklease-freies Wasser oder Wasser in PCR-Qualität
Mastermix-Arten
Um Zeit zu sparen und Fehler bei der Messung und Dosierung zu vermeiden, sind viele vorgefertigte PCR-Mastermischungen erhältlich.
Die meisten handelsüblichen PCR-Mastermischungen sind für einen bestimmten PCR-Typ (z. B. Hot-Start) bestimmt oder nur mit bestimmten Thermocyclern kompatibel. Dies gilt insbesondere für die Echtzeit-PCR (auch als quantitative PCR oder qPCR bezeichnet), die auf einem Thermocycler aufbaut, der den Verlauf der Reaktion anhand der entsprechenden Fluoreszenzentwicklung des im Mastermix enthaltenen Farbstoffs erkennen kann.
Kommerzielle Mastermischungen erfordern vor der Verwendung immer noch einen gewissen Grad an Vorbereitung, und sei es nur, um DNA- oder RNA-Templates hinzuzufügen. Sie müssen möglicherweise zusätzlich aufgetaut, gekühlt, mit Wasser in PCR-Qualität verdünnt und mit einer Pipette oder Zentrifuge gemischt werden. Stellen Sie sicher, dass Sie den richtigen Mastermix für Ihre experimentellen Anforderungen und Ihren PCR-Aufbau auswählen.
Wir bieten zahlreiche Mastermischungen für PCR und Echtzeit-PCR an, die für verschiedene Geräte validiert sind. Unsere praktische Auswahlhilfe für die PCR hilft Ihnen bei der Auswahl eines geeigneten Mastermix oder der Komponenten für die Herstellung einer eigenen Mischung. Wir haben auch einige unserer meistverkauften PCR-Mastermischungen nach PCR-Methoden zusammengestellt:
Vorbereitung eines kommerziellen Mastermix
Beachten Sie, dass dieses typische Rezept von Mix zu Mix und je nach spezifischer Verwendung variiert. Bitte lesen Sie die mitgelieferte Produktliteratur zur Vorbereitung für den spezifischen Mastermix oder Readymix.
Standard PCR-Mastermischungen
ReadyMix™ Taq PCR-Reaktionsmischung mit MgCl2
ReadyMix™ Taq PCR-Reaktionsmischung ist eine vorbereitete Lösung, die alles enthält, was für eine PCR-Reaktion benötigt wird, mit Ausnahme von spezifischen Primern und dem Template. Die Mischung enthält unsere hochwertige Taq-DNA-Polymerase, 99 % reine Desoxynukleotide und Puffer in einem 2× optimierten Reaktionskonzentrat.
Der PCR Master von Roche enthält alle Reagenzien, die zur Durchführung einer Standard-PCR benötigt werden. Alles, was hinzugefügt werden muss, ist die Template-DNA, Primer und die erforderliche Menge Wasser.
REDTaq® ReadyMix™ PCR-Reaktionsmischung
Diese Mischung kombiniert die Leistung und Vorteile unserer REDTaq® DNA-Polymerase mit dem Komfort einer ReadyMix™ PCR-Reaktionsmischung. REDTaq® ReadyMix™ ist eine gebrauchsfertige Mischung aus Taq-DNA-Polymerase, zu 99 % reinen Desoxynukleotiden, Reaktionspuffer und einem inerten roten Farbstoff in einem 2X-Konzentrat.
High Fidelity PCR-Mastermischungen
Roche High Fidelity-PCR Master
Wählen Sie den praktischen High Fidelity-PCR Master, eine doppelt konzentrierte, gebrauchsfertige Mischung, in der das Expand High Fidelity-PCR System mit dNTP in PCR-Qualität, MgCl2 und ein optimierter Reaktionspuffer kombiniert werden.
Millipore KOD Hot-Start-Mastermix
Gebrauchsfertige 2X-Mischung mit KOD Hot-Start-DNA-Polymerase, zwei monoklonalen Antikörpern, hochreinen Desoxynukleotiden und Reaktionspuffer mit MgSO4. Diese Mischung ist für die komfortable High Fidelity-PCR optimiert.
RT-PCR-Mastermischungen
Das Roche Transcriptor High Fidelity cDNA-Synthese-Kit wurde für die reverse Transkription von RNA mit höherer Genauigkeit im Vergleich zu anderen reversen Transkriptasen entwickelt. Das Kit enthält Transcriptor High Fidelity Reverse Transkriptase, eine Mischung aus einer rekombinanten reversen Transkriptase und einem Enzym mit Korrekturlesefunktion, das für die zweistufige RT-PCR optimiert ist.
DasSYBR® Green-Kit für die quantitative RT-qPCR bietet eine hochempfindliche Methode für die quantitative Analyse der Genexpression. Unser QRT-PCR ReadyMix™ vereint die Vorteile von M-MLV RT und JumpStart Taq in einem praktischen Readymix.
Das Reagenz KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ ist ein gebrauchsfertiger, hochempfindlicher Mastermix für die reverse Transkription in der quantitativen PCR (RT-qPCR) von RNA-Templates unter Verwendung von Nachweischemikalien für Hybridisierungssonden wie TaqMan® 5'-Hydrolyse-Sonden auf Echtzeit-PCR-Systemen (siehe Abschnitt zur Gerätekompatibilität, um das geeignete Reagenz für Ihr Gerät auszuwählen).
Der MystiCq® microRNA cDNA-Synthese-Mix enthält alle Komponenten, die für die Umwandlung reifer microRNA in cDNA-Templates für die qPCR erforderlich sind. Dieses Kit verfügt über separate Schritte für Polyadenylierung und reverse Transkription, sodass das Protokoll bei Bedarf optimiert werden kann.
Echtzeit qPCR-Mastermischungen
Sondenbasierte qPCR
Der FastStart TaqMan® Probe Master von Roche ist ein gebrauchsfertiger, 2X konzentrierter Mastermix, der alle Reagenzien enthält (außer Primer, Sonde und Template), die für die Durchführung quantitativer Echtzeit-DNA-Nachweisassays, darunter qPCR und zweistufige qRT-PCR, im Hydrolyse-Sondennachweisformat benötigt werden.
Roche EagleTaq Universal Master Mix (ROX) ist ein gebrauchsfertiger, 2X konzentrierter PCR-Mastermix, der alle Reagenzien (außer Primer, Sonden und Template) enthält, die für die Durchführung quantitativer Echtzeit-PCR-Hydrolyse-Sondenreaktionen benötigt werden. Es enthält einen speziellen ROX-Referenzfarbstoff und eignet sich daher für alle Echtzeitgeräte, bei denen ein ROX-Referenzfarbstoff für die quantitative Analyse benötigt wird.
SYBR® Green PCR
SYBR® Green Mastermischungen sind für die Echtzeit-PCR geeignet. Es wird ein asymmetrischer Cyaninfarbstoff eingesetzt. Unsere beliebteste SYBR® Green-Mischung ist FastStart SYBR® Green von Roche. Der FastStart SYBR® Green Master ist eine gebrauchsfertige Reagenzienmischung, welche die Vorbereitung von Reaktionen für qPCR und zweistufige qRT-PCR unter Verwendung des interkalierenden Farbstoffs SYBR® Green I für DNA-Nachweis und -Analyse vereinfacht.
KiCqStart® qPCR ReadyMix™ Reagenzien
KiCqStart® qPCR ReadyMix™ Mastermischungen werden gebrauchsfertig in einem konzentrierten Format geliefert. Dazu gehören Puffer, Stabilisatoren und Hot-Start-Taq. Verwendung in schnellen oder konventionellen Zyklusprotokollen auf jedem beliebigen Thermocycler. Wählen Sie zwischen SYBR ® Green oder sondenbasierten Mischungen.
Der KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ Mastermix ist kompatibel mit Bio-Rad-, Cepheid-, Eppendorf-, Illumina-, Corbett- und Roche-Systemen. Zu den Komponenten gehören ein 2×-Reaktionspuffer mit optimierten Konzentrationen von MgCl2, dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP), KiCqStart® Taq-DNA-Polymerase, SYBR ® Green Farbstoff und Stabilisatoren.
Low ROX™ funktioniert mit Low ROX™ für ABI- und Stratagene-Geräte.
LuminoCt™ qPCR-Reagenzien
Basierend auf einer hochgradig optimierten ReadyMix™ Chemie bieten LuminoCt™ pPCR-Reagenzien unübertroffene Assay-Geschwindigkeiten ohne Abstriche in Bezug auf Genauigkeit, Präzision oder Empfindlichkeit. Darüber hinaus arbeiten LuminoCt™ Reagenzien mit den meisten qPCR-Geräten ohne Einschränkungen zusammen, sodass die Optimierung der Reaktionsbedingungen auf ein absolutes Minimum beschränkt ist. Oft können die Benutzer einfach ihr Kit auswählen, ihren Assay zusammenstellen und mit der Arbeit beginnen. Noch nie war es so schnell und einfach, die bestmöglichen qPCR-Daten zu erzeugen.
Das LuminoCt™ SYBR® Green qPCR ReadyMix™ Reagenz wurde entwickelt, um unübertroffene Assay-Geschwindigkeiten ohne Einbußen in Bezug auf Genauigkeit, Präzision oder Empfindlichkeit zu erzielen. Dank der umfassenden Entwicklung und Validierung der ReadyMix™ Chemie ist eine Optimierung praktisch nicht mehr erforderlich, wenn das LuminoCt™ Reagenz in Verbindung mit entsprechend entwickelten Primern verwendet wird. Durch den JumpStart™ Taq-Antikörper im ReadyMix™ Reagenz wird die Polymeraseaktivität bei Umgebungstemperaturen eliminiert, ohne die mit chemisch modifizierter Hot-Start-Taq verbundenen Leistungsprobleme zu verursachen.
Das LuminoCt™ qPCR ReadyMix™ Kit ist für die Durchführung von sondenbasierten qPCR-Assays auf gängigen Echtzeitgeräte-Plattformen konzipiert. Das ReadyMix™ Reagenz erfordert die Zugabe eines Referenzfarbstoffs (im Kit enthalten), wenn es auf Echtzeitgeräten verwendet wird, die einen passiven ROX-Referenzfarbstoff zur Normalisierung von qPCR-Assays benötigen.
Empfohlene Mastermix-Produkte
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