Roche PCR-Reagenzien und PCR-Protokolle

• Auswahlhilfe für Roche PCR-Reagenzien für Routine- und Hot-Start-PCR
• Auswahlhilfe für Roche PCR-Reagenzien für High Fidelity, schwierige Templates und lange PCR-Amplifikation
  
• Taq-DNA-Polymerase und Standard-PCR-Protokoll
• FastStart™ Taq-DNA-Polymerase und Mastermix
• FastStart™ High Fidelity PCR-System
• Expand™ High Fidelity PCR-System und Expand™ High Fidelity^PLUS PCR-System
• Pwo SuperYield DNA-Polymerase
• GC-RICH PCR-System für schwierige PCR-Templates
• Expand™ Long Range, dNTPack
• Produkte für die PCR-Optimierung

 

Auswahlhilfe für Roche PCR-Reagenzien für Routine- und Hot-Start-PCR

PCR-Anwendung	Routine-PCR	Hot-Start	Multiplex/Sequenzierung
Ihr Enzym der Wahl:	Taq-DNA-Polymerase	FastStart™ Taq-DNA-Polymerase	FastStart™ High Fidelity PCR-System
Erfahrung	Konsistenz	Spezifität	Genauigkeit
Amplikongröße	bis zu 3 kb	bis zu 3 kb	bis zu 5 kb
Spezifität
Empfindlichkeit
Robustheit
Genauigkeit vs. Taq	1x	1x	4x
Vermeiden von Verschleppungen	ja	ja	ja
Einheiten/50 μl	1,25	2	2,5
Molekulare Klonierung	TA-Klonierung	TA-Klonierung	TA-Klonierung
Enzym	Taq-DNA-Polymerase, 5 U/μl Taq-DNA-Polymerase, 1 U/μl	FastStart™ Taq-DNA-Polymerase, 5 U/μl	FastStart™ High-Fidelity-PCR-System
Enzym, GMP-Qualität	Taq-DNA-Polymerase, GMP-Qualität, 5 U/μl
dNTPack	Taq-DNA-Polymerase, dNTPack, 5 U/μl Taq-DNA-Polymerase, dNTPack, 1 U/μl	FastStart™ Taq-DNA-Polymerase, dNTPack, 5 U/μl	FastStart™ High-Fidelity-PCR-System, dNTPack
Mastermix	PCR-Master	FastStart™ PCR-Master

Auswahlhilfe für Roche PCR-Reagenzien für High Fidelity, schwierige Templates und lange PCR-Amplifikation

* Müssen Verschleppungen vermieden und eine 6x höhere Genauigkeit möglich sein? Wählen Sie das Expand™-High-FidelityPLUS PCR-System. ** Für Amplikongrößen zwischen 20 und 35 kb wählen Sie das Expand™ 20 kbPLUS PCR-System.

PCR-Anwendung	Große Vielfalt/Einfacher Zugang	Hohe Genauigkeit (high fidelity)	Schwierige Templates	Long Range
Ihr Enzym der Wahl:	Expand™ High Fidelity PCR-System	Pwo SuperYield DNA-Polymerase	GC-RICH PCR-System	Expand™ Long Range
Erfahrung	Robustheit	Genauigkeit	Zuverlässigkeit	Vielseitigkeit
Amplikongröße	bis zu 5 kb	bis zu 3 kb	bis zu 5 kb	5 bis 25 kb**
Spezifität
Empfindlichkeit
Robustheit
Genauigkeit vs. Taq	3x	18x	3x	3x
Vermeiden von Verschleppungen	nein*	nein	nein	nein
Einheiten/50 μl	2,6	2,5	2	3,5
Molekulare Klonierung	TA-Klonierung	Blunt-End-Klonierung	TA-Klonierung gegenüber Blunt-End-Klonierung bevorzugt	TA-Klonierung
Enzym	Expand™ High- Fidelity- PCR-System Expand™ High- FidelityPLUS -PCR-System	Pwo SuperYield DNA Polymerase	GC-RICH PCR-System
dNTPack	Expand™ High- Fidelity- PCR-System, dNTPack Expand™ High- Fidelity-PLUS-PCR- System, dNTPack	Pwo SuperYield- DNA- Polymerase, dNTPack	GC-RICH PCR- System, dNTPack	Expand™ Long Range, dNTPack
Mastermix	High-Fidelity-PCR- Master	Pwo-Master

Spitzenforschung sollte nicht aus Kostengründen Kompromisse eingehen müssen. Seit der Einführung der PCR-Technologie hat Roche den Goldstandard bei PCR-Reagenzien gesetzt. Durch unsere fortschrittlichen Isolierungs-, Aufreinigungs- und Herstellungstechniken sorgen wir dafür, dass nicht nur die eindeutigsten und zuverlässigsten Ergebnisse erzielt werden, sondern auch Komfort und ein Preis, der jedem Laborbudget gerecht wird.

• Zuverlässigkeit - Erzielen Sie die benötigten Ergebnisse: von Charge zu Charge, von Röhrchen zu Röhrchen, von Versuch zu Versuch.
• Leistung - Kombinieren Sie erstklassige Enzyme mit Nukleotiden in PCR-Qualität in praktischen dNTP-Packs, damit eine höhere Empfindlichkeit und Ausbeute erzielt wird.
• Konsistenz - Maximieren Sie die experimentelle Leistung mit Mastermischungen, bei denen nur die Zugabe von Primern und Template erforderlich ist.

Nukleotide in PCR-Qualität stellen eine optimale Leistung sicher.

Der Erfolg der PCR hängt in hohem Maße von der Auswahl der Enzyme und Nukleotide ab. Die PCR-Enzyme von Roche sind in praktischen dNTP-Packs erhältlich, die vorgemischte Lösungen von Nukleotid-Natriumsalz ohne Zusatzstoffe enthalten. Diese funktionsgeprüften Nukleotide in PCR-Qualität werden durch enzymatische Synthese hergestellt, durch ein einzigartiges Verfahren aufgereinigt und tragen ideal zur Qualität Ihrer PCR-Ergebnisse bei.

• Reinheit - Wählen Sie Nukleotide, die frei von modifizierten Basen, Tetraphosphaten oder Pyrophosphatverunreinigungen sind, entsprechend den gängigen Qualitätsverfahren, die für chemisch synthetisierte Nukleotidpräparate typisch sind, um die Empfindlichkeit Ihrer PCR zu verbessern.
• Stabilität - Verlängern Sie die Haltbarkeit und verbessern Sie die Reaktionsstabilität mit dNTP, die mit einem optimalen pH-Wert geliefert werden, um die Ausbeute zu maximieren.

Taq-DNA-Polymerase und Standard-PCR-Protokoll

Kosteneffiziente PCR, die sich durch robuste Amplifikation mit minimalen Template-Anforderungen auszeichnet.

Die Roche Taq-DNA-Polymerase wird unter GMP-Bedingungen hergestellt. Dieses hoch aufgereinigte Enzym durchläuft mehrere strenge Tests auf Funktionalität und Reinheit, sodass mit jeder Charge zuverlässige, konsistente Ergebnisse erzielt werden. Weitere Informationen finden Sie in unserem Standard-PCR-Protokoll.

• Zuverlässige, reproduzierbare Ergebnisse mit hoher Chargenkonstanz
• Vermeiden Sie das Testen jeder neuen Charge - wir erledigen das für Sie
• Kombinieren Sie den dUTP-Einbau mit Uracil-DNA-Glykosylase, um einer PCR-Kreuzkontamination vorzubeugen

Abbildung 1. Die Chargenkonstanz gewährleistet reproduzierbare Ergebnisse. Fünf verschiedene Chargen Taq-DNA-Polymerase wurden auf ihre Fähigkeit getestet, ein 0,5 kb-Fragment Lambda-DNA zu amplifizieren. Mit jeder getesteten Charge der Roche Taq-DNA-Polymerase werden verlässliche, konsistente Ergebnisse erzielt.

Die Taq-DNA-Polymerase in GMP-Qualität gehört zur Familie der leistungsstarken, validierten Amplifikationsenzyme und wird unter Anwendung evaluierter Produktions-, Qualitätskontroll- und Abfüllverfahren hergestellt.

Amplikongröße	Spezifität	Empfindlichkeit	Robustheit	Genauigkeit vs. Taq	Vermeiden von Verschleppungen	Einheiten /50 µl	Molekulare Klonierung
Bis zu 3 kb				1x	ja	1,25	TA-Klonierung

Produkt	SKU	Packungsgröße
Taq-DNA-Polymerase | Enzym + Puffer
5 U/μl	11 146 173 001	500 U für bis zu 1.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
	11 418 432 001	1.000 U (4 × 250 U) für bis zu 2.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
	11 596 594 001	2.500 U (10 × 250 U) für bis zu 5.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
	11 435 094 001	5.000 U (20 × 250 U) für bis zu 10.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
1 U/μl	11 647 687 001	1.000 U (4 × 250 U) für bis zu 2.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
Taq-DNA-Polymerase, dNTPack | Enzym + Puffer + dNTP-Set
5 U/μl	04 728 866 001	100 U für bis zu 200 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 728 874 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 1.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 728 882 001	1.000 U (4 × 250 U) für bis zu 2.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 728 904 001	2.500 U (10 × 250 U) für bis zu 5.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 728 858 001	5.000 U (20 × 250 U) für bis zu 10.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
1 U/μl	04 738 225 001	250 U für bis zu 500 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 738 241 001	1.000 U (4 × 250 U) für bis zu 2.000 Reaktionen mit 20 μl Endvolumen, die jeweils 0,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten
PCR Master | Gebrauchsfertige Formulierung; Enzym, Puffer, dNTP
	11 636 103 001	1 Kit für bis zu 200 PCR-Reaktionen mit 50 μl Endreaktionsvolumen, die jeweils 2,5 U Taq-DNA-Polymerase enthalten

FastStart™ Taq-DNA-Polymerase und Mastermix

Wählen Sie die Polymerase, der Forscher vertrauen, wie es bei der qPCR und LightCycler^® Systemen der Fall ist.

Die FastStart™ Taq-DNA-Polymerase ist eine thermostabile, chemisch modifizierte Form einer rekombinanten Taq-DNA-Polymerase. Aufgrund ihrer Modifikation wird die FastStart™ Taq-DNA-Polymerase nur bei hohen Temperaturen aktiviert, was sie zum idealen Enzym macht, wenn die Amplifikation Ihres Assays verzögert ist.

• Höhere Spezifität, Sensitivität und Ausbeute. Die Hot-Start-PCR verbessert die PCR-Leistung und macht das PCR-Setup noch einfacher.
• Einsatz eines praktischen automatisierten Setup. Die vollständige Reaktionsmischung ist bei Raumtemperatur 24 Stunden lang stabil.
• Vermeiden von PCR-Verschleppungen. Kombinieren Sie den dUTP-Einbau mit Uracil-DNA-Glykosylase, um eine PCR-Kreuzkontamination zu verhindern

Abbildung 4. Amplifikation des humanen Erythropoetin-Gens aus 3-300 ng cDNA sofort (E0) und 24 Stunden nach Reaktionsaufbau bei Raumtemperatur (E24).

Amplikongröße	Spezifität	Empfindlichkeit	Robustheit	Genauigkeit vs. Taq	Vermeiden von Verschleppungen	Einheiten /50 µl	Molekulare Klonierung
Bis zu 3 kb				1x	ja	2 µl	TA-Klonierung

Produkt	SKU	Packungsgröße
FastStart™ Taq-DNA-Polymerase | Enzym + Puffer
5 U/μl	12 032 929 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 250 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
	12 032 937 001	1.000 U (4 × 250 U) für bis zu 500 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
	12 032 945 001	2.500 U (10 × 250 U) für bis zu 1.250 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
	12 032 953 001	5.000 U (20 × 250 U) für bis zu 2.500 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
FastStart™ Taq-DNA-Polymerase, dNTPack | Enzym + Puffer + dNTP-Set
5 U/μl	04 738 314 001	100 U für bis zu 50 Reaktionen mit 50 μl Endvolumen, die jeweils 2 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 738 357 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 250 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 738 381 001	1.000 U (4 × 250 U) für bis zu 500 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 738 403 001	2.500 U (10 × 250 U) für bis zu 1.250 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 738 420 001	5.000 U (20 × 250 U) für bis zu 2.500 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
FastStart™ PCR-Master | Gebrauchsfertige Formulierung; Enzym, Puffer, dNTP
	04 710 436 001	2 × 1,25 ml für bis zu 250 Reaktionen mit 20 μl-Endreaktionsvolumen
	04 710 444 001	8 × 1,25 ml für bis zu 1.000 Reaktionen mit 20 μl-Endreaktionsvolumen
	04 710 452 001	10 × 5 ml für bis zu 5.000 Reaktionen mit 20 μl-Endreaktionsvolumen

FastStart™ High Fidelity PCR-System

Multiplexing und Sequenzierung, ein stringenter Hot-Start und eine verbesserte Genauigkeit sind der Schlüssel zu komplexen Endpunkt-PCR-Anwendungen, wie Multiplexing oder Sequenzierung. Wählen Sie das FastStart™ High Fidelity PCR-System für komplexe Hot-Start-PCR bis zu 5 kb mit höherer Genauigkeit, wie sie für Multiplexing und Sequenzierung erforderlich ist. Bis zu sechsmal genauer als die Standard-Taq-DNA-Polymerase und die FastStart™ Taq-DNA-Polymerase.

• Hervorragende Multiplex-Leistung mit schnellen, hochwertigen Ergebnissen
• Erleben Sie eine sechsfach höhere Genauigkeit im Vergleich zu Taq- und FastStart™ Taq-DNA-Polymerase
• Verwenden Sie das mitgelieferte PCR-Additiv (DMSO), wenn Sie schwierige Templates amplifizieren

Abbildung 5. Empfindlichkeitstest bei 18-Plex (74 bp - 470 bp) PCR. Ein Satz bestehend aus 18 Multiplex-Primern wurde auf verschiedene Konzentrationen menschlicher genomischer DNA angewendet.

Amplikongröße	Spezifität	Empfindlichkeit	Robustheit	Genauigkeit vs. Taq	Vermeiden von Verschleppungen	Einheiten /50 µl	Molekulare Klonierung
Bis zu 5 kb				6x	ja	2,5	TA-Klonierung

Produkt	SKU	Packungsgröße
FastStart™ High Fidelity PCR-System | Enzym + Puffer
	03 553 400 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 200 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,5 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
	03 553 361 001	2.500 U (10 × 250 U) für bis zu 1.000 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,5 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
FastStart™ High Fidelity PCR-System, dNTPack | Gebrauchsfertige Formulierung; Enzym, Puffer, dNTP
	04 738 284 001	125 U für bis zu 50 Reaktionen mit 50 μl Endvolumen, die jeweils 2,5 U FastStart Taq-DNA-Polymerase enthalten
	04 738 292 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 200 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,5 U FastStart enthalten

Expand™-High-Fidelity-PCR-System und Expand™-High FidelityPLUS-PCR-System

Expand™ High Fidelity PCR-Reagenzien sind für eine robuste Amplifikation in einem breiten Spektrum von Assays und Amplikontypen konzipiert. Sie bestehen aus einer Enzymmischung aus Taq-DNA-Polymerase und einer Polymerase mit Korrekturleseaktivität für robuste PCR. Wählen Sie das Expand™ High Fidelity^PLUS PCR-System für robuste PCR bis zu 5 kb mit PCR-Verschleppungsschutz.

• Ein Enzym für alle Anwendungen. Das Expand™ High Fidelity PCR-System amplifiziert robust eine Vielzahl von Templates und gewährleistet eine hohe Ausbeute, Genauigkeit und Flexibilität.
• Detektieren Sie Amplifikationsprodukte, die vorher nicht nachweisbar waren, und vermeiden Sie falsch-negative Ergebnisse.
• Erzielen Sie aussagekräftige PCR-Ergebnisse aus kleinen Mengen Template-DNA.

Das Expand™-High Fidelity^PLUS-PCR-System ist ideal für robuste High-Fidelity-Anwendungen, wie z. B. das Klonieren und Markieren von DNA-Fragmenten mit radioaktiv oder nicht-radioaktiv modifizierten Nukleotiden. Kombinieren Sie außerdem den dUTP-Einbau mit Uracil-DNA-Glycosylase, um eine PCR-Kreuzkontamination zu verhindern.

Abbildung 6. Vergleich des Expand™-High-FidelityPLUS-PCR-Systems mit vier kommerziell erhältlichen Polymerase-Mischungen. Verschiedene Mengen (ng) humaner genomischer DNA wurden verwendet, um ein 4,8 kb-Fragment des Tissue-Plasminogen-Activator- (tPA) Gens zu amplifizieren, und zwar unter Einhaltung der vom jeweiligen Hersteller empfohlenen Bedingungen. Das Expand-High-FidelityPLUS-PCR-System bietet die beste Spezifität, Empfindlichkeit und Ausbeute, selbst bei einer Menge von nur 1 ng humaner genomischer DNA.

Lieferant A: Mischung aus Taq-DNA-Polymerase (am N-Terminus deletiert), einer Polymerase mit Korrekturlesefunktion und einem Hot-Start-Antikörper.
Lieferant B und D: Mischung aus Taq-DNA-Polymerase und einer Polymerase mit Korrekturlesefunktion.
Lieferant C: Mischung aus Taq-DNA-Polymerase, einer Polymerase mit Korrekturlesefunktion und einem Verstärkungsfaktor.

Amplikongröße	Spezifität	Empfindlichkeit	Robustheit	Genauigkeit vs. Taq	Vermeiden von Verschleppungen	Einheiten /50 µl	Molekulare Klonierung
Bis zu 5 kb				3x	nein*	2,6	TA-Klonierung

Produkt	SKU	Packungsgröße
Expand™ High Fidelity PCR-System | Enzym + Puffer
	11 732 641 001	100 U für bis zu 40 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,6 U Enzymmischung enthalten
	11 732 650 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 200 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,6 U Enzymmischung enthalten
	11 759 078 001	2.500 U (10 × 250 U) für bis zu 1.000 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,6 U Enzymmischung enthalten
Expand™ High Fidelity-PCR, dNTPack | Enzym + Puffer + dNTP-Set
	04 738 250 001	100 U für bis zu 40 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,6 U Enzymmischung enthalten
	04 738 268 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 200 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,6 U Enzymmischung enthalten
	04 738 276 001	2.500 U (10 × 250 U) für bis zu 1.000 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,6 U Enzymmischung enthalten
High Fidelity PCR-Master | Gebrauchsfertige Formulierung; Enzym, Puffer, dNTP
	12 140 314 001	1 Kit für bis zu 500 Reaktionen mit 20 μl-Endreaktionsvolumen

Produkt	SKU	Packungsgröße
Expand™ High FidelityPLUS PCR-System | Enzym + Puffer
	03 300 226 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 500 Reaktionen mit 20 μl-Endvolumen, die jeweils 1 U Enzymmischung enthalten
	03 300 234 001	2.500 U (10 × 250 U) für bis zu 2.500 Reaktionen mit 20 μl-Endvolumen, die jeweils 1 U Enzymmischung enthalten
Expand™ High FidelityPLUS PCR-System, dNTPack | Enzym + Puffer + dNTP-Set
	04 743 725 001	125 U für bis zu 125 Reaktionen mit 20 μl-Endvolumen, die jeweils 1 U Enzymmischung enthalten
	04 743 733 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 500 Reaktionen mit 20 μl-Endvolumen, die jeweils 1 U Enzymmischung enthalten

Pwo SuperYield DNA-Polymerase

High Fidelity-PCR ist für Anwendungen erforderlich, in denen die Sequenzgenauigkeit von größter Wichtigkeit ist, ohne dass die Ausbeute darunter leidet. Verwenden Sie Pwo SuperYield DNA-Polymerase, um eine hohe Ausbeute an PCR-Produkten mit gleichbleibend hoher Genauigkeit zu erhalten. Entscheiden Sie sich für maximale Genauigkeit und vermeiden Sie bei Kombination mit einer reversen Transkriptase mit Korrekturlesefunktion, wie z. B. dem Transcriptor High Fidelity cDNA-Synthesekit, Sequenzfehler, Basenaustausche und Rahmenverschiebungen. Die Kombination ist ideal für Anwendungen wie Klonierung, ortsspezifische Mutagenese und Genexpressionsanalyse.

• Erzielen einer herausragenden Genauigkeit und hohen Ausbeute. 18-fach höhere Genauigkeit im Vergleich zur Taq-DNA-Polymerase, ohne Optimierung.
• Erzielen hoher Leistungen mit schwierigen Templates. Die Lösung GC-RICH ermöglicht die Amplifikation von GC-reicher DNA.
• Reduzieren von Arbeitsschritten in der Klonierung. Einsetzen von Verdauungsenzymen direkt im Pwo SuperYield PCR-Mix.

Abbildung 7. Verbesserte Genauigkeit in der RT-PCR. Kombination einer reversen Transkriptase mit Korrekturlesefunktion, Transcriptor High Fidelity Reverse Transkriptase (Roche), einer Polymerase mit Korrekturlesefunktion, Pwo SuperYield DNA-Polymerase (Roche) für die Amplifikation. Daten im Vergleich zu einer häufig verwendeten M-MuLV reversen Transkriptase und Taq-DNA-Polymerase. Die Fehlerrate wurde nach der reversen Transkription und 25 PCR-Zyklen mit dem 454-Sequenziersystem bestimmt. Die Fehlerraten für die Roche-Enzyme waren der Mittelwert aus vier unabhängigen Versuchen, bei denen mindestens 3,1 × 106 Basen sequenziert wurden. Für M-MuLV reverse Transkriptase und Taq-DNA-Polymerase wurden 4,5 × 106 Basen sequenziert. Die Genauigkeit wird als Fehlerquote -1 dargestellt.

Amplikongröße	Spezifität	Empfindlichkeit	Robustheit	Genauigkeit vs. Taq	Vermeiden von Verschleppungen	Einheiten /50 µl	Molekulare Klonierung
Bis zu 3 kb				18x	nein	2,5	Blunt-End-Klonierung

Produkt	SKU	Packungsgröße
Pwo Super Yield DNA-Polymerase | Enzym + Puffer
	04 340 850 001	500 U (2 × 250 U) für bis zu 200 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,5 U Pwo SuperYield DNA-Polymerase enthalten
Pwo Super Yield DNA-Polymerase, dNTPack | Enzym + Puffer + dNTP-Set
	04 743 750 001	100 U für bis zu 40 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2,5 U Pwo SuperYield DNA-Polymerase enthalten
Pwo Master | Gebrauchsfertige Formulierung; Enzym, Puffer, dNTP
	03 789 403 001	2.5 ml (10 × 250 μl) für bis zu 100 Reaktionen mit 50 μl-Endreaktionsvolumen, die jeweils 2,5 U Pwo SuperYield DNA-Polymerase enthalten

GC-RICH PCR-System für schwierige PCR-Templates

Entscheiden Sie sich für das GC-RICH PCR-System, eine Mischung aus einer Polymerase mit Korrekturlesefunktion und Taq-DNA-Polymerase, um Templates zu amplifizieren, die mit anderen Polymerasen oder anderen Mischungen aus Polymerasen und Zusätzen nur schwer oder gar nicht zu amplifizieren sind. Die verbesserte Verarbeitbarkeit der Mischung und die einzigartige GC-RICH-Auflösungslösung sorgen für eine hervorragende Leistung.

• Amplifizieren schwieriger Templates, einschließlich GC-reicher Ziele und sich wiederholender Sequenzen
• Verwenden Sie das mitgelieferte Wasser in PCR-Qualität und optimierte Reagenzien, einschließlich der GC-RICH-Auflösungslösung
• Amplifizieren von DNA-Fragmenten bis zu 5 kb

Abbildung 8. Erfolgreiche Amplifikation von GC-reichen Templates mit dem GC-RICH PCR-System. Amplifikation eines 264 bp-Templates (74 % GC-Gehalt) innerhalb des humanen ApoE-Gens unter Verwendung des GC-RICH PCR-Systems oder des Expand High Fidelity PCR-Systems.

Ergebnis: Mit dem GC-RICH PCR-System wird das GC-reiche Fragment mit hoher Spezifität und Ausbeute unter Verwendung der GC-RICH-Auflösungslösung amplifiziert.

Amplikongröße	Spezifität	Empfindlichkeit	Robustheit	Genauigkeit vs. Taq	Vermeiden von Verschleppungen	Einheiten /50 µl	Molekulare Klonierung
Bis zu 5 kb				3x	nein	2	TA-Klonierung gegenüber Blunt-End-Klonierung bevorzugt

Produkt	SKU	Packungsgröße
GC-RICH PCR-System | Enzym + Puffer
	12 140 306 001	100 U für bis zu 50 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U Enzymmischung enthalten
GC-RICH PCR-System, dNTPack | Enzym + Puffer + dNTP Set
	04 743 784 001	100 U für bis zu 50 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 2 U Enzymmischung enthalten

Expand™ Long Range, dNTPack

Verlassen Sie sich auf dieses System der nächsten Generation von Roche, den Pionieren der Long-Template-PCR. Wählen Sie das Expand™ Long Range dNTPack für die konsistente Amplifikation von PCR-Produkten zwischen 5 und 25 kb aus genomischer DNA. Verwenden Sie das Expand™ 20 kb^PLUS PCR-System für die Amplifikation von Fragmenten, die länger als 20 kb sind. Dieses einzigartige System besteht aus einer optimierten Puffer- und Enzymmischung.

• Konstante Amplifikation langer Templates bis zu 25 kb mit hoher Spezifität, Ausbeute und verbesserter Genauigkeit.
• Sparen Sie mit einem praktischen und flexiblen Kit Zeit und Ressourcen. Verwenden Sie einen Puffer für alle Fragmentgrößen und benutzen Sie die mitgelieferte DMSO- und MgCl₂-Lösung zur Feinabstimmung Ihrer Reaktion.
• Einsatz in allen Long-Template-Anwendungen, wobei hohe Ausbeuten ausschließlich vom gewünschten Fragment erhalten werden.
• Bestellen Sie das kostengünstige dNTP-Paket, das auch vorgemischte Nukleotide in PCR-Qualität enthält.

Abbildung 9. Amplifikation verschiedener genomischer Templates mit dem Expand™ Long Range dNTPack

Amplikongröße	Spezifität	Empfindlichkeit	Robustheit	Genauigkeit vs. Taq	Vermeiden von Verschleppungen	Einheiten /50 µl	Molekulare Klonierung
5 bis 25 kb				3x	nein	3,5	TA-Klonierung

Produkt	SKU	Packungsgröße
Expand™ Long Range, dNTPack | Enzym + Puffer + dNTP-Set
	04 829 034 001	175 U für bis zu 125 Reaktionen mit 20 μl-Endvolumen, die jeweils 1,4 U Enzymmischung enthalten
	04 829 042 001	700 U für bis zu 500 Reaktionen mit 20 μl-Endvolumen, die jeweils 1,4 U Enzymmischung enthalten
	04 829 069 001	3.500 U (5 × 700 U) für bis zu 2.500 Reaktionen mit 20 μl-Endvolumen, die jeweils 1,4 U Enzymmischung enthalten

* Für Amplikongrößen von 20-35 kb: Wählen Sie das Expand 20 kbPLUS PCR-System.

Produkt	SKU	Packungsgröße
Expand™ 20 kbPLUS PCR-System | Enzym + Puffer
	11 811 002 001	200 U für bis zu 40 Reaktionen mit 50 μl-Endvolumen, die jeweils 5 U Enzymmischung enthalten

Produkte für die PCR-Optimierung

Produkt	SKU	Packungsgröße
Kit für die PCR-Optimierung	11 636 138 001	1 Kit für bis zu 100 einstufige oder bis zu 50 zweistufige Optimierungs-Assays mit 100 μl-Endreaktionsvolumen
Uracil-DNA-Glykosylase	11 444 646 001	100 U
Uracil-DNA-Glykosylase, hitzelabil	11 775 367 001	100 U
	11 775 375 001	500 U
T4-Gen-32-Protein	10 972 983 001	100 µg
	10 972 991 001	500 µg
PCR-Pufferset	11 699 121 001	2 x 2 ml (2 × 1 ml von jeder Lösung)
PCR-Puffer ohne MgCl2 10x konz.	11 699 105 001	3 × 1 ml
MgCl2 Stammlösung	11 699 113 001	3 × 1 ml
Wasser, PCR-Qualität	03 315 843 001	100 ml (4 Fläschchen à 25 ml)
	03 315 932 001	25 ml (25 Fläschchen à 1 ml)
	03 315 959 001	25 ml (1 Fläschchen à 25 ml)
Streifen mit PCR-Röhrchen und Kappen	11 667 009 001	125 Streifen (8 Röhrchen/Streifen)