11745816910
Roche
DIG-Nick Translationsmischung
sufficient for 40 labeling reactions, pkg of 160 μL, suitable for hybridization
Synonym(e):
Nick-Translation
Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise
Alle Fotos(1)
About This Item
UNSPSC-Code:
41105500
Empfohlene Produkte
Form
solution
Qualitätsniveau
Verwendung
sufficient for 40 labeling reactions
Verpackung
pkg of 160 μL
Hersteller/Markenname
Roche
Grünere Alternativprodukt-Eigenschaften
Designing Safer Chemicals
Learn more about the Principles of Green Chemistry.
sustainability
Greener Alternative Product
Methode(n)
hybridization: suitable
Grünere Alternativprodukt-Kategorie
, Aligned
Lagertemp.
−20°C
Allgemeine Beschreibung
DIG-Nick Translationsmischung ist eine praktische Mischung aus Enzym und Nukleotid zur Nick Translation. Sie nutzt die Kombination aus DNase und DNA-Polymerase, um einen Strang der DNA-Helix einzuschneiden und anschließend markierte Nukleotide einzubringen, wenn die Polymerase die eingeschnittene Stelle untersucht oder „Korrektur liest“. Große Plasmide, Cosmide und Polymerase-Kettenreaktion(PCR)-Fragmente werden regelmäßig mit diesem Verfahren verwendet, und die DNA kann linearisiert oder Supercoiled sein. Einzelne Templates erzeugen bei der 90-minütigen Standardreaktion konsistente Ergebnisse und führen zu einer durchschnittlichen Sondenlänge von 200 bp bis 500 bp. Das Molverhältnis von Digoxigenin (DIG)-11-desoxyuridintriphosphat (dUTP) zu Desoxythymidintriphosphat (dTTP) wird angepasst, um sicherzustellen, dass jedes 20. bis 25. Nukleotid in der neu synthetisierten DNA mit DIG modifiziert ist. Diese Dichte von Haptenen in der DNA erzeugt in der immunologischen Nachweisreaktion die höchste Sensitivität.
Wir verpflichten uns, Ihnen umweltfreundlichere Alternativprodukte anzubieten, die einen oder mehrere der „12 Grundsätze der Grünen Chemie“ erfüllen. Dieses Produkt wurde als sicherere Chemikalie entwickelt. Das DIG-System wurde als empfindliche und kosteneffektive Alternative zur radioaktiven Markierung im Nachweis von Nukleinsäuren entwickelt. Die Vielseitigkeit des DIG-Systems ist in zahlreichen Publikationen belegt. Die radioaktive Markierung stellt daher nicht mehr die einzige Option für die DNA-Markierung zur Hybridisierung dar.
Spezifität
Hitzeinaktivierung: Beenden Sie die Reaktion durch Zugabe von 1 μl 0.5 M EDTA (pH-Wert 8,0) und Erwärmung auf 65 °C für 10 Minuten.
Anwendung
DIG-Nick Translationsmischung wird zur Erzeugung hochsensitiver Sonden für die In-situ-Hybridisierung, die mit Digoxigenin-11-dUTP markiert sind, eingesetzt.
Hinweis: Die Mischung kann auch für Filterhybridisierungsverfahren eingesetzt werden. Wir empfehlen für hochsensitive Filterhybridisierungssonden jedoch, dass Sie DIG-High Prime von Roche Applied Science verwenden.
Für die nichtradioaktive Markierung von In-situ-Sonden mit anderen Haptenen und Fluorophoren bietet Roche Applied Science die Biotin-Nick Translationsmischung und die Nick Translationsmischung (ohne Nukleotide) an.
Hinweis: Die Mischung kann auch für Filterhybridisierungsverfahren eingesetzt werden. Wir empfehlen für hochsensitive Filterhybridisierungssonden jedoch, dass Sie DIG-High Prime von Roche Applied Science verwenden.
Für die nichtradioaktive Markierung von In-situ-Sonden mit anderen Haptenen und Fluorophoren bietet Roche Applied Science die Biotin-Nick Translationsmischung und die Nick Translationsmischung (ohne Nukleotide) an.
Qualität
Die Funktion wurde in einem Dot-Spot-Assay getestet.
Prinzip
Das Nick Translationsverfahren basiert auf der Fähigkeit der DNase I, bei geringen Enzymkonzentrationen in Gegenwart von MgCl2 zufällig verteilte Nicks in DNA einzubringen.
E. coli DNA-Polymerase I synthetisiert DNA komplementär zu dem intakten Strang in 5′→3′-Richtung unter Verwendung der 3′-OH-Termini des Nicks als Primer. Die 5′→3′-exonukleolytische Aktivität von DNA-Polymerase I entfernt gleichzeitig Nukleotide in Richtung der Synthese. Die Polymeraseaktivität ersetzt im Anschluss die entfernten Nukleotide mit isotopmarkierten oder haptenmarkierten Desoxyribonukleosidtriphosphaten. Bei geringen Temperaturen (+15 °C) wird die unmarkierte DNA während der Reaktion daher durch neu synthetisierte, markierte DNA ersetzt.
E. coli DNA-Polymerase I synthetisiert DNA komplementär zu dem intakten Strang in 5′→3′-Richtung unter Verwendung der 3′-OH-Termini des Nicks als Primer. Die 5′→3′-exonukleolytische Aktivität von DNA-Polymerase I entfernt gleichzeitig Nukleotide in Richtung der Synthese. Die Polymeraseaktivität ersetzt im Anschluss die entfernten Nukleotide mit isotopmarkierten oder haptenmarkierten Desoxyribonukleosidtriphosphaten. Bei geringen Temperaturen (+15 °C) wird die unmarkierte DNA während der Reaktion daher durch neu synthetisierte, markierte DNA ersetzt.
Angaben zur Herstellung
1 Fläschchen mit 5x konzentriertem stabilisierten Reaktionspuffer in 50%igem Glycerin (v/v) und DNA-Polymerase I, DNase I, 0,25 mM dATP, 0,25 mM dCTP, 0,25 mM dGTP, 0,17 mM dTTP und 0,08 mM DIG-11-dUTP (alkalisch-stabil).
Assaydauer: 100 Minuten
Probenmaterialien: Supercoiled und linearisierte Plasmid-DNA, Supercoiled und linearisierte Cosmid-DNA, aufgereinigte PCR-Produkte.
Hinweis: Denaturierung des Templates vor der Nick Translation ist nicht erforderlich.
Assaydauer: 100 Minuten
Probenmaterialien: Supercoiled und linearisierte Plasmid-DNA, Supercoiled und linearisierte Cosmid-DNA, aufgereinigte PCR-Produkte.
Hinweis: Denaturierung des Templates vor der Nick Translation ist nicht erforderlich.
Sonstige Hinweise
Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.
Lagerklassenschlüssel
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
Flammpunkt (°F)
No data available
Flammpunkt (°C)
No data available
Analysenzertifikate (COA)
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Unser Team von Wissenschaftlern verfügt über Erfahrung in allen Forschungsbereichen einschließlich Life Science, Materialwissenschaften, chemischer Synthese, Chromatographie, Analytik und vielen mehr..
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