蛋白質測定 改良 Lowry 法

2.範圍

本程序適用於所有具備不經三氯乙酸 (TCA) 沉澱的洛氏蛋白質測定規格的產品。

3.定義

純淨水 -來自去離子系統，電阻率 > or = 18 MΩ-cm @ 25 °C

4.討論

銅 + 蛋白質	； 鹼性 pH   >	銅-蛋白複合物
	酚試劑

5.RESPONSIBILITIES

所有分析服務實驗室人員都有責任按照書面規定遵守本程序。

6.

7.程序

7.1 條件：

T = 25 °C, A_750nm, 光路 = 1 cm

7.2 方法：

比色法

7.3 試劑：

7.3.1 0.85% 氯化鈉溶液（NaCl） 使用氯化鈉溶液，0.85%, Product Number S9888在純淨水中配製 100 mL。

7.3.2 0.01% Lowry Protein Standard (WPS) 在試劑 7.3 中製備 10 mL。1 使用 產品編號

7.3.3 Modified Lowry Reagent (LOW) 根據標籤說明，將一小瓶改良的 Lowry Reagent, Modified,  Product Number

（產品編號：

7.3.a href="/product/sigma/L1013「>L1013 或 產品編號 L3540 。此溶液可保存約一個月或直到溶液變得混濁。

7.3.4 蛋白質樣品溶液（樣品） 在試劑 7.3.1 中製備含有 10-100 mg 蛋白質/mL 樣品的溶液。

7.3.5 0.33 N Folin & Ciocalteu「s Phenol Reagent (F&C) 使用 2 N Folin & Ciocalteu」s Phenol Reagent（如 產品編號F9252）在純淨水中進行 6 倍稀釋，製備溶液。

7.4測試方法

抑制反應

以毫升為單位，將下列試劑移入適當的容器中：

	測試	標準 1	標準 2	標準 3	標準 4	Std 5	空白
Reagent 7.3.1 (NaCl)	-----	0.90	0.70	0.50	0.30	-----	1.00
Reagent 7.3.2 (WPS)	-----	0.10	0.30	0.50	0.70	1．00	-----
試劑7．3 (LOW)	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
試劑 7.3.4 (Sample)	1.00	-----	-----	-----	-----	-----	-----	-----	-----

攪拌徹底混合，並在 25 °C 下孵育 10 分鐘。 孵育時間必須至少 10 分鐘，以便銅溶液與肽鍵發生反應。如果需要，這段時間可以長達 24 小時。
然後加入：

	測試	標準 1	標準 2	標準 3	標準 4	Std 5	空白
Reagent 7.3.5 (F&C)	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50

攪拌徹底混合，並在 25 °C 下孵育 30 分鐘。 孵育時間必須至少 30 分鐘，但不超過 60 分鐘，因為 30 分鐘後仍會繼續顯色。所有標準品、樣品和空白吸光度必須在很短的時間內在分光光度計上讀取。

將溶液移至適當的比色皿中，使用適當的分光光度計記錄測試品、標準品和空白品的 A_750nm 

7.5 計算

ΔA_750nm 標準=A_750nm 標準-A_750nm 空白
將標準品的ΔA_750nm vs. mg蛋白質。
樣品測定：
ΔA_750nm Test = A_750nm Test - A_750nm Blank
根據標準曲線測定 mg蛋白質。
mg 蛋白質 = (來自標準曲線的蛋白質 mg) * (df)
df = 稀釋因子

% Protein =	(mg Protein) * (100)
	(mg solid/mL)

100 = 轉換成百分比

100 = 轉換成百分比

毫克蛋白質/毫升	(毫克蛋白質)
	(mL 樣品/毫升)

100 = 轉換為百分比

。

8.參考文獻及附件

1. Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall R. 1951. J. Biol. Chem.(193):265-275.

2. Peterson G. 1979. Analytical Biochemistry.(100):201-220.

9.批准
	列印名稱	簽名	標題	日期
Prepared by：	霍莉查普曼	霍莉查普曼	原創人	11/9/04
批准人：	羅德尼伯巴赫	羅德尼伯巴赫	分析服務部主管	11/10/04
批准人：	GeneMcNaughton	GeneMcNaughton	品質保證	11/10/04

材料

抱歉，發生意外錯誤。

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