病毒生產中的 DNA/RNA 移除

無論您是在開發細胞和基因療法還是病毒疫苗，去除污染的核酸都是病毒生產的重要部分。最簡單的方法就是使用 Benzonase® 內切酶。

 

病毒生產過程中的核酸雜質

這些核酸雜質從何而來？為了生產用於疫苗、細胞和基因治療的病毒，需要對細胞進行基因改造。

這些游離核酸對病患安全構成威脅，並對產品良率造成負面影響。世界衛生組織和美國 FDA 建議 10 ng/dose，任何剩餘的核酸長度為 200 碱基對。為了符合這些準則，純化製程必須大幅降低核酸的大小和數量。

什麼是Benzonase^®？

Benzonase內切酶是一種通常在Serratia marcescens細菌中表達的內切酶。Benzonase^®內切酶在大腸桿菌 W3110（K12的突變菌株）中表達。它是非特異性的，能將 DNA 和 RNA 裂解成更小的片段，對單股和雙股核酸以及線性和圓形核酸都有作用。它沒有蛋白質分解活性。一旦這些核酸被分解，Benzonase^® 內切核酸酶和小的 DNA 片段就可以很容易地用切向流過濾去除。

Benzonase^®可用於生物處理的許多應用，包括：

• 病毒粒子的純化（從蛋白質和其他生物製劑中去除 DNA 和 RNA）。無論是用於開發病毒疫苗、用於疫苗、細胞和基因治療的病毒載體，還是用於溶瘤病毒，Benzonase^®內切酶都能去除最終產品中的核酸污染，以符合監管標準。
• 降低核酸對層析步驟造成的粘度。透過去除樣品中的核酸，可減少 DNA 與樹脂結合時造成的 DNA 污垢，並確保在層析過程中病毒的結合能力最大化，以獲得最佳產量。
• 防止細胞結塊

優化Benzonase^®的使用

使用Benzonase^®前，請先閱讀本產品的使用說明。/h2>

在製程中使用Benzonase^®前，您需要優化所需的酵素用量。這由五個步驟決定：

1. 確定 DNA 濃度
2. 計算您所需的酵素理論濃度
3. 測試不同濃度的酵素以及不同的培養時間和溫度
4. 測試比例測試縮放比例
5. 測試製程中不同位置的最佳濃度

在較大的規模中，優化酶的使用是最關鍵的，正如成本建模分析中所描述的，材料成本變得更加重要。若要瞭解更多有關優化 Benzonase^® 內切酶的流程，請參閱我們的應用說明 "Optimization Strategy and Process Economics of DNA Digestion in Viral Vector Production for Gene Therapy「和數據表」Optimization of Benzonase^® endonuclease use in virus purification。「

有關如何使用 Benzonase^® 的更多資訊，請參閱我們的 Benzonase^® Nuclease Q & A。

Benzonase^®內切酶選項

針對生物製造，我們提供三種版本的 IPEG PQG GMP  Benzonase^®內切酶，以符合您的法規要求：

• 苯腙酶^®內切酶，純度等級 I (≥99%) 適合生物製藥生產 EMPROVE^® Expert
• 苯腙酶 內切酶 Safety Plus Emprove^® Expert
• Benzonase^® 耐鹽內切酶

所有版本均在 E.大腸桿菌 W3110 表達系統製備，病毒污染的風險極低。然而，Benzonase^®內切酶Safety Plus Emprove^® Expert和Benzonase^® Salt Tolerant內切酶 都是由化學界定的培養基製成，並經過檢測沒有不定生病毒和支原體。要瞭解更多關於從標準 Benzonase^® 內切酶轉換到 Benzonase^® 內切酶 Safety Plus Emprove^® Expert，請下載 法規公告。

Benzonase^® 內切酶透過提高這些步驟的效率來強化下游製程，並使病毒粒子的回收率提高。它還能減少最終產品中的游離核酸含量，有助於滿足監管機構的期望。

觀看我們的隨選網路研討會業務持續性管理，瞭解更多資訊：從Benzonase^®成功案例中汲取的原則和教訓，或下載我們相關的白皮書.

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